大豆对苜蓿夜蛾抗性鉴定技术规程DB22／T 1761-2013.pdf

ICS 65.020 B 05 备案号：37817-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1761 2013 大豆对苜蓿夜蛾抗性鉴定技术规程 rule of resistance identification techniques of soybean to heliothis viriplaca hufnagel 2013-02-06发布 2013-06-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1761 2013 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准主要起草单位：吉林农业大学、吉林省林业科学研究院。本标准主要起草人：徐伟、付晓霞、史树森、袁海滨、姚瑞、任珊、田径、毕锐、卢爱军。DB22/T 1761 2013 1 大豆对苜蓿夜蛾抗性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了大豆对苜蓿夜蛾抗虫性的田间与室内鉴定的取样、接虫和评价标准。本标准适用于大豆抗苜蓿夜蛾品种的筛选与鉴定。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文 件 2.1 抗虫性 insect resistance 某些植物或 品种 具有抵御害 虫 危害 的 可遗传特 性，在同一生长环境 下，相同 虫口 密度 下 比其他植物 或 品种对 害 虫 危害表现为受害轻，损失小 的 能力。2.2 抗虫鉴定圃 nursery for evalution of resistance to insect 在 田间 设置 的用于 自然或 人 工控制条件 下鉴定 植物或 品种抗虫性的 试验区圃。鉴定 圃 内 不施 用 杀 虫 剂或 对鉴定 结果可能有影响 的 其他化 学 制剂。2.3 孵化 hatch 幼 虫 从卵中脱壳而 出的 过程。2.4 叶面积损失率 leaf area loss rate 食叶昆 虫取 食寄 主 植物叶片 的 面积占完整叶片 的 百分率（%）。2.5 抗性指数 resistance index 表示植物 对 昆 虫的抗性 程度，以昆 虫取 食 的 植物量或其存活率及发育速率等指 标 表示。3 田间抗虫性鉴定 3.1 抗虫鉴定圃选择 DB22/T 1761 2013 2 抗虫鉴定 圃一 般 设置在 苜蓿夜蛾 常年 发生 重，光 照 良好，地势平坦、土壤肥 力 较均匀 一 致 的 地块。3.2 抗虫鉴定圃的管理 抗虫鉴定 圃 应做到水肥 和 耕作管理水平 一 致，一 般 在 苜蓿夜蛾 发生 期 不施 用任 何 农 药。对 其他害 虫干扰 可 采 取 防 虫 网隔离 或 人 工 清除 其他 虫 源 等 方法排除。3.3 鉴定品种（材料）的种植 在 鉴定 圃 内，大豆品种（材料）小区 采 取 随机 区 组排 列种 植，小区一 般 为 4行 区，行 长 3 m 5 m，行距 0.65 m，穴距 6 cm 7 cm，人 工 精 量 点播，小区 间 距 0.5 m。4 次重复。种 植区 边缘 种 植 3 行 6 行感 虫品种 作 为 保护行。3.4 鉴定时间 6月 中 下 旬，苜蓿夜蛾 幼 虫 发生 期进行(幼 虫 形态描述参见附录 A)，此时 在 东北 大豆 为 3节 6节期（大 豆 生育 期划 分 标准 参见附录 B）。3.5 鉴定虫源 3.5.1 自然虫源 鉴定虫 源来 自 农田 自然发生 的苜蓿夜蛾。利 用 自然 虫 源进行 抗虫性鉴定 更 接 近 生 产实际，且简便易 行。3.5.2 接种虫源 3.5.2.1 接虫条件 当 受 到气候 及 农田 生 态 条件 差异 的 影响，苜蓿夜蛾 发生量小，自然 虫 源少 于 50 头/百 株，应采 取人 工 接虫 补足 虫 源。3.5.2.2 接虫饲养 野外 采 集 苜蓿夜蛾 末龄 幼 虫（形态 特 征 见附录 A），（饲养 方法见附录 C）。3.5.2.3 接虫方法 在 苜蓿夜蛾 卵 孵 化 盛 期 调查 大豆品种 上 的 初孵 幼 虫 数，当 自然 虫 源少 于 50 头/百 株 时，人 工 接 初孵 1龄 幼 虫，接虫 不 考虑 植 株 现有 虫 数，采 取 均匀 接虫，接虫 后 密度 达 50 头/百 株。3.6 鉴定方法 在 田间苜蓿夜蛾 1 龄 幼 虫 盛 期 开始调查 大豆 叶面积损失率，每 5d 调查 一 次，共调查 5 次，以 品种（材料）小区为 观察 单位,按 表 1 目测 标准 记 录 鉴定 材料 的抗性 指 数，数据载入 表 2鉴定 材料 抗性 指 数 调查 表。表 1 田间抗性指数目测标准 抗性 指 数 目测 标准 0 小区 50%以 上 的 叶片叶面积损失率在 0 5%1 小区 50%以 上 的 叶片叶面积损失率在 6%25%DB22/T 1761 2013 3 表 1（续）2 小区 50%以 上 的 叶片叶面积损失率在 26%50%3 小区 50%以 上 的 叶片叶面积损失率在 51%75%4 小区 50%以 上 的 叶片叶面积损失率在 76%100%表 2 鉴定材料抗性指数调查表 调查 人：品种（材料）代码 调查 时 间 大豆 生育 期 区 组 A 区 组 B 区 组 C 区 组 D 注：区 组 A、区 组 B、区 组 C、区 组 D：代 表 4个 重复 小区 3.7 抗性等级评估 根据公式（1）-（5）计算 不同 抗性鉴定 材料 调查 期 间的抗性 指 数加权 平均 数 和标准 差，按 着 表 3标准 进行 鉴定 材料 的抗性 类型 评 估。iiPMMM=.(1)式 中：M 鉴定品种抗性 指 数加权 平均 数 的 总 平均 数 PMi 第 i个 品种 各 次 调查 抗性 指 数 的 加权 平均 数 Mi 第 i个 品种 各 次 调查 的抗性 指 数 平均 数()PMiPiMi=.(2)式 中：Pi 第 i个 品种 各 次 调查 的 权 重 Mi 第 i个 品种 各 次 调查 的的抗性 指 数 平均 数 DB22/T 1761 2013 4 CViPiCVi=.(3)式 中：CVi 第 i个 品种 各 次 调查 区 组平均 数 的 变 异 系数 5 sCVimi=.(4)式 中：5 调查 5次 S 标准 差 Mi 第 i个 品种 第 j次 调查 区 组 间的抗性 指 数 平均 数()251ijiMMs-=-.(5)式 中：S 标准 差 Mij 每个 品种 每 次 记 录 每个 区 组 的抗性 指 数 表 3 抗性分级标准 抗性 等 级 标准 抗性 类型 1 M M+1.5S 高 感 HS 注 1：M：鉴定品种 调查 期 间抗性 指 数 的 平均 数;注 2：M：不同 鉴定品种 调查 期 间抗性 指 数 的 加权 平均 数 的 总 平均 数 注 3：标准 差 4 室内抗性鉴定 4.1 试验虫源 4.5 饲养 的 2d龄 幼 虫。4.2 供试豆叶 鉴定品种大豆 植 株顶部展开 的 第 3片叶。4.3 幼虫处理 将 2 d龄 苜蓿夜蛾 幼 虫 放入培养皿（直 径 6 cm 9 cm）中，每皿 5 头，皿底放 一 张 保 湿滤纸。用 湿脱 脂棉球包裹 大豆 叶 柄，外包封 口 膜 防 止 叶片失 水，之后放入培养皿 内，再 用 保 鲜膜将培养皿 的 上 口 封DB22/T 1761 2013 5 上，防 治 幼 虫 逃逸，同 时 在 膜上刺若 干 微孔 以 保 持通 气良好。将培养皿放入 昆 虫 培养箱 中 饲养，温 度 和 光 照 等条件 参见附录 C。每个 品种 设置 4 个 重复。4.4 鉴定方法和抗性等级评估 4.4.1 标准品种分级法 4.4.1.1 叶面积损失率 统计 在 接虫 后 3 d利 用 叶面积 仪测 定 幼 虫取 食 大豆品种的 叶面积，并 计算 叶面积损失率。以 最 抗和 最 感各 5个 品种的 叶面积损失率为 对照，分 5个 等 级，分 级 标准 见 表 4。表 4 标准品种分级法 抗性 等 级 标准 抗性 类型 1 a+7d 高 感 HS 注 1：a、b 分 别 为 5份 高 抗标准品种和 份 高 感 标准品种的 叶面积损失率 的 平均 值（或 取 食 高 抗和 高 感 品种 幼 虫 重 量的 平均 值）注 2：d=(b a)/8。4.4.1.2 幼虫 重 量 统计 在 没 有叶面积 仪 时，可以 采 用 幼 虫 重 量 法。接虫 后 6 d测 定 幼 虫 重 量，以 取 食 最 抗和 最 感 各 5个 品种 的 幼 虫 重 量为 对照，分 5个 等 级，划 分 标准 见 表 4.4.4.1.3 叶面积损失分级法 当 没 有 最 抗和 最 感材料 或 对照 材料 不 全 时，可 采 取 叶面积损失分 级 法。在 接虫 后 3d 利 用 叶面积 仪 测 定 幼 虫取 食 大豆品种的 叶面积，并 计算 叶面积损失率。分 级 标准 见 表 5。表 5 叶面积损失分级法 抗性 等 级 叶面积损失率 抗性 类型 1 10%以 下(少 量 针状 取 食 孔)高 抗 HR 2 10%30%(针状 取 食 孔 不 连 片)抗 R 3 30%60%(受害面积 部 分 成 小片 状 分 布)中 间 M 4 60%90%(受害面积有 连 片叶 肉 组 织 存在)感 S 5 90%以 上(受害面积 无连 片叶 肉 组 织 存在)高 感 HS DB22/T 1761 2013 6 A A 附 录 A（资 料性 附录）苜蓿夜蛾种 类描述与识别 A.1 形态特征描述 A.1.1 成 虫 体 长 14mm 17mm，翅 展 28mm 36mm。头、胸灰褐色，下 唇须 和 足 灰白色。前翅黄褐色带青绿 色，内 横线棕褐色隐约 不 清，中 横线 较 宽、棕色，外 横线棕褐色但浓淡 不 匀。环 纹 由 中 央 1棕色 点 与 外 围 3个 棕色 小 点组 成；肾纹棕色，不 十 分 清 楚，位于 中 横线 上，上 有 许多 不 规则的 小 黑 点。后 翅淡黄褐色，中 部 有 1大 型 弯曲黑斑，外 缘 有 黑色宽带，带 的 中 央 有 1白色至淡褐色斑。雌 蛾 翅正 面 斑纹颜色 较 深，后 翅反 面 斑纹 为 红褐色；腹 部 粗 大，腹 面 灰白色散 生一些小 黑 点，腹 末具一 圈橙黄色毛。雄 蛾 翅正 面 斑纹颜色 较 浅，后 翅反 面 斑纹 为 枯黄色；腹 部 细 长，腹 面 灰白色，腹 末 尖 具 枯黄色 长 毛，抱握器明显。A.1.2 卵 半 球 形，直 径 0.54 mm，高 约 1 mm，底部 较平，卵壳表面有 33 36条 纵棱。初 产时 白色，后变 黄绿色。A.1.3 幼虫 末龄 幼 虫 体 长 31mm 37mm。体色 变 化 较 大，黄绿色至棕绿色。头部 淡黄褐色，上 有 许多明显 的黑褐色 小 斑 点。背线 及 亚背线黑褐色，气 门线 和 足 黄绿色。A.1.4 蛹 体 长 15mm 20mm，宽 4mm 5mm，黄褐色，体 末 端 生有 尖 而 略弯 的 刺 1对。A.2 发 育历期 在 25-28，光 照 16h：8h条件 下，卵 期 4 7d；1龄 期 3 4d；2龄 期 3 4d；3龄 期 4 5d；4龄 期 45d；5龄 期 7 8d；蛹 期 16 17d；成 虫 期 8 11d；产 卵 前 期 2d。A.3 生活习 性 与 发 生 规 律 A.3.1 生活习 性 A.3.1.1 幼虫 幼 虫 有 假死 性，当 受 谅 后 可 卷成筒 形，落 地 假死，有 时 幼 虫 也 有 退 行 习 性。幼 龄 幼 虫 吐丝把 大豆 顶叶 卷 起，在其中 蚕 食。被 害叶 张开 时，叶面 附 着 有 细丝 和虫 粪。幼 虫 长 大 后 不 再 卷 叶，而 是沿 叶 的主 脉DB22/T 1761 2013 7 暴 食叶 内，形 成 长 大的 缺刻 与 孔 洞。在 华 北 第 二 代 幼 虫，为害 豆 荚 比为害叶片 更重，在 荚 上 咬 成 圆 孔 食害 荚 中 乳熟 的豆 粒，被 害 粒缺 口 平 滑 而 大。A.3.1.2 成 虫 成 虫夜 伏昼 出，白 天 出 来 后 能 作 远 距离 飞翔，尤 以中 午 最 为活 跃，在植 株 间 飞翔，吸 食 花蜜，夜间 也 有 较 强 的 趋 光 性。成 虫 产 卵 于大豆 叶 背，散 产。A.3.2 发 生 规 律 苜蓿夜蛾 以 蛹 在 土 中 做 茧越冬，在 东北 5月 上、中 旬 越冬 蛹 开始 羽 化，5月 下 旬 至 6月 上、中 旬 为成 虫 盛 期。6月 上、中 旬 开始 产 卵。6月 中、下 旬 第 一 代 幼 虫 为害 最 重，6月 下 旬 至 7月 上 旬 幼 虫 老熟 入 土 化 蛹。7月 中、下 旬 至 8月 上 旬 第 二 代 成 虫出 现。8月 中、下 旬 第 二 代 幼 虫 开始入 土 化 蛹 越冬。DB22/T 1761 2013 8 B B 附 录 B（资 料性 附录）大豆发 育期划 分标准 B.1 营 养时 期（V）营 养 时期 如 下：出 苗 期（VE）：子 叶在 地 面以 上；子 叶 期（VC）：单 叶 半 展开，叶片 的 叶 缘 已 分 离；一 节期（V1）：单 叶 充 分生长，第 一 复 叶小叶片 的 叶 缘 分 离；二 节期（V2）：单 叶以 上第 一片 复 叶 充 分生长；三 节期（V3）：从 单 叶 着 生 的 叶 算 起，主 茎 上 有 三 个 节 的 叶片 充 分生长；n节期（Vn）：从 单 叶 着 生 的 叶 算 起，主 茎 上 有 n个 节 的 叶片 充 分生长；B.2 生殖 时 期（R）生 殖 时期 如 下：始 花 期（R1）：主 茎 的任 何节 位 上 有一 朵花 开放；盛 花 期（R2）：主 茎 最上部 具有 充 分生长叶片 的 2个 节 之 中 任 何 一 个 节 位 上开 花；始 荚 期（R3）：主 茎 最上部 4个 具有 充 分生长叶片 着 生 的 节 中，任 何 一 个 节 位 有 5mm长 的 幼 荚；盛 荚 期（R4）：主 茎 最上部 4个 具有 充 分生长叶片 着 生 的 节 中，任 何 一 个 节 位 上 有 2cm长 的 荚；始 粒 期（R5）：主 茎 最上部 4个 具有 充 分生长叶片 着 生 的 节 中，任 何 一 个 节 位 上 豆 荚 内种 子 长 度 达 3mm；鼓粒 期（R6）：主 茎 最上部 4个 具有 充 分生长叶片 着 生 的 节 中，任 何 一 个 节 位 上 豆 荚 内 绿色 种子充满荚皮 的种 穴 成 熟 初 期（R7）：主 茎 上 有一 个 荚 达 到 成 熟 时 的 正 常 色 泽；完 熟 期（R8）：25%豆 荚 达 到 正 常 的 成 熟 色 泽。种 子含 水 量 低 于 15%。完 熟 期 后 尚需 5-10天 进行 种 子 脱 水。DB22/T 1761 2013 9 C C 附 录 C（资 料性 附录）苜蓿夜蛾饲养 C.1 饲养条件 温 度(26 1),光 周 期 14 10(光 照 黑 暗),相 对 湿 度 50%75%。C.2 饲养方法 C.2.1 幼虫的饲养 幼 虫 放 置在 塑 料 养 虫 盒 内，以 感 虫大豆 叶片 饲养 至 化 蛹。C.2.2 蛹 的处理 在 田间取 腐殖 土，高温 灭菌，向 土 中 加 少 量 蒸馏 水，并 搅拌 均匀，倒 入养 虫 盒 内。将 蛹 放 在 装 有 腐殖 土 的 盒 内，其 上 覆盖 1cm厚 的 腐殖 土。C.2.3 成 虫饲养 成 虫 羽 化 后，雌、雄成 虫按 1:1混合 放入养 虫 笼 中，饲 喂 5%的 蜂蜜 水，由 其自 由 交配，在 养 虫 笼 上 覆盖蜡 纸，使 雌 蛾 产 卵 于 蜡 纸上。C.2.4 卵 的处理 将 同 日 产 下的 卵 放 在同一 培养皿 中，皿 内 放 置 加湿 的 脱 脂棉球，放入 昆 虫 培养箱 中 待 孵 化。C.2.5 幼虫饲养 幼 虫 孵 化 后 仍 以同一 品种 感 虫大豆 叶片 饲 喂 2d，用于田间和室内抗性鉴定 试验。DB22/T 1761 2013 10 参 考 文 献 1 崔章 林，盖钧镒，吉 东 风,任 珍静.1996.大豆种 质资 源 对 食叶 性 害 虫抗性的鉴定.大豆科学,16(2):93-102 2 盖钧镒，崔章 林.1997.大豆抗 食叶 性 害 虫 育 种的鉴定 方法 与标准.作 物 学 报,23(4):400-407 3 彭 玉 华，梅德圣，李卫.1997.大豆对 叶食 性 害 虫抗性的 自然 鉴定.中 国油 料,19(2):51-53 4 孙祖 东,盖钧镒.1999.大豆对 食叶 性 害 虫抗性的研究.中 国 农业科学,(增):81-88 5 吴巧娟,吴娟娟,吴 业 春，等.2006.大豆 资 源 对 斜 纹 夜蛾的抗性鉴定.大豆科学,25(4):409-413 6 徐 冉，王彩洁，李 伟,等.2007.大豆抗虫性鉴定研究 进 展.大豆科学,26(5):771-774 7 杨 向 东，郭 东 全,包 绍君，等.2007.双 价抗虫 转基因 大豆抗苜蓿夜蛾 分 析.大豆科学,26(6):969-971 _