红薯脱毒种薯繁育技术规程DB5206／T85—2018.pdf

I C S 6 5.0 2 0B 3 0DB5206铜 仁 市 地 方 标 准D B 5 2 0 6/T 8 5 2 0 1 8代 替 D B 5 2 2 2 0 0/T 5 7-2 0 0 9红 薯 脱 毒 种 薯 繁 育 技 术 规 程2 0 1 8-1 2-0 6 发 布 2 0 1 8-1 2-0 6 实 施铜 仁 市 质 量 技 术 监 督 局发 布D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 8I目 次前 言.1 范 围.12 规 范 性 引 用 文 件.13 术 语 和 定 义.14 总 则.25 脱 毒 种 薯 的 质 量.26 脱 毒 红 薯 试 管 苗 繁 育 技 术.37 高 级 脱 毒 试 管 苗 速 繁.38 脱 毒 红 薯 原 原 种 繁 育 技 术 标 准.49 脱 毒 红 薯 原 种 繁 育 技 术 标 准.51 0 脱 毒 红 薯 生 产 种 繁 育 技 术 标 准.61 1 脱 毒 红 薯 不 同 级 别 脱 毒 苗 的 病 毒 检 测 方 法.61 2 脱 毒 红 薯 不 同 级 别 脱 毒 苗 的 质 量 标 准.8D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 8I I前 言本 标 准 按 照 G B/T 1.1-2 0 0 9 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规则 起 草。请 注 意：本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利，本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责任。本 标 准 代 替 D B 5 2 2 2 0 0/T 5 7-2 0 0 9 红 薯 脱 毒 红 薯 繁 育 技 术 规 程。本 标 准 与 D B 5 2 2 2 0 0/T5 7-2 0 0 9 相 比，除 编 辑 性 修 改 外 主 要 差 异 如 下：该 标 准 中 引 用 的 相 关 国 家 标 准、行 业 标 准 和 地 方 标 准，已 更 新 为 现 行 有 效 标 准；本 标 准 由 铜 仁 市 农 业 委 员 会 提 出 并 归 口。本 标 准 负 责 制 定 单 位:铜 仁 市 种 子 管 理 站、铜 仁 市 植 保 站。本 标 准 参 加 单 位：思 南 县 农 牧 科 技 局、沿 河 县 种 子 管 理 站、印 江 县 种 子 管 理 站、德 江 县种 子 管 理 站、松 桃 种 子 管 理 站。本 标 准 主 要 制 定 人:李 朝 霞、李 永 凤、甘 坤 俊、徐 文 霞、罗 会 群、陈 正 福、涂 刚、王 安华、廖 雪 红、陈 忠、张 玉 清本 标 准 的 历 次 版 本 发 布 情 况 为：D B 5 2 2 2 0 0/T 5 7-2 0 0 9。D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 81红 薯 脱 毒 种 薯 繁 育 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 红 薯 脱 毒 种 薯 及 种 苗 的 繁 育 技 术 规 程，适 用 于 铜 仁 市 各 红 薯 种 薯（苗）繁育 基 地、产 地 及 栽 培 区。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 所 注 日 期 的 版 本适 用 于 本 文 件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。G B 4 4 0 6 种 薯G B 7 4 1 3 红 薯 种 苗 产 地 检 疫 规 范N Y/T 4 0 2 脱 毒 甘 薯 种 薯(苗)病 毒 检 测 技 术 规 程N Y/T 1 2 0 0 甘 薯 脱 毒 种 薯3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准3.1脱 毒 试 管 苗 v i r u s-f r e e t u b e s e e d I i n g应 用 茎 尖 分 生 组 织 培 养 技 术 获 得,经 检 测 确 认 不 带 红 薯 羽 状 斑 驳 病 毒(S P F M V)、红 薯 潜隐 病 毒（S P L V）、红 薯 褪 绿 斑 病 毒（S P C F V）的 试 管 苗。3.2脱 毒 种 薯（苗）v i r u s-f r e e t u b e（s e e d I i n g）从 育 种 家 种 子 繁 殖 脱 毒 试 管 苗 开 始,逐 渐 繁 殖 增 加 种 薯(苗)数 量 的 种 薯 生 产 体 系 出 来 的种 薯(苗)注:分为育种家种子、原原种、原种生产用种四个级别。3.2.1育 种 家 种 子 b r e e d e r s s e e d由 育 种 者 直 接 和 掌 握 的 原 始 种 子,具 有 该 品 种 的 典 型 性 的 遗 传 稳 定 性,纯 度 1 0 0%,不 带 病毒 的 其 他 病 虫 害,产 量 及 其 他 主 要 性 状 符 合 推 广 时 的 原 有 水 平。3.2.2原 原 种 p r e-e I i t e由 育 种 家 种 子 或 典 型 品 种 的 脱 毒 试 管 苗 在 防 虫 网 室、温 室 条 件 下 生 产 的 符 合 质 量 标 准 的种 薯（苗）。3.2.3原 种 e I i t e用 原 原 种 作 种 薯,在 良 好 隔 离 条 件 下 生 产 的 符 合 质 量 标 准 的 种 薯(苗)。3.2.4生 产 用 种 c e r t i e d s e e dD B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 82用 原 种 作 种 薯,在 良 好 隔 离 条 件 下 生 产 的 符 合 质 量 标 准 的 种 薯(苗)。3.3病 毒 病 株 允 许 率脱 毒 种 薯 繁 殖 田 中 病 毒 病 株 的 比 率。3.4真 菌、细 菌 病 株 允 许 率脱 毒 种 薯（苗）繁 殖 田 中 真 菌、细 菌 病 株 的 比 率。3.5虫 害 株 允 许 率脱 毒 种 薯（苗）繁 殖 田 中 虫 害 株 的 比 率3.6混 杂 植 株 的 允 许 率脱 毒 种 薯（苗）繁 殖 田 中 混 杂 的 其 它 红 薯 品 种 植 株 的 比 率。3.7脱 毒 种 薯 块 根 整 齐 度单 块 质 量 在 1 0 0 g 的 5 0 0 g 的 红 薯 种 薯 块 根 质 量 占 块 根 总 质 量 的 比 率。3.8有 缺 陷 薯机 械 损 伤、虫 鼠 伤、畸 形 块 根 总 质 量 的 比 率。3.9杂 质一 批 块 根 中 除 具 有 价 值 的 块 根 外,其 他 物 质 称 为 杂 质。包 含 浮 土、块 根 上 所 沾 的 泥 土、无 种 用 价 值 的 块 根，以 及 其 他 有 机、无 机 物 质 质 量。3.1 0腐 烂本 标 准 中 指 根 腐 烂、软 腐 病、镰 刀 菌 干 腐 病 造 成 的 腐 烂 外,其 他 原 因 造 成 的 腐 烂。4 总 则4.1 脱 毒 红 薯 高 级 脱 毒 试 管 苗、脱 毒 红 薯 原 原 种、原 种、生 产 种 繁 育 单 位 所 生 产 的 种 薯（苗），必 须 符 合 国 家 规 定 的 有 关 标 准。4.2 脱 毒 繁 育 体 系 的 建 立 要 根 据 种 植 面 积 及 具 备 的 技 术 条 件 确 定。原 原 种、原 种 的 繁 育 由 省、市、县 级 具 备 脱 毒、组 培 条 件 的 科 研 单 位 或 繁 育 基 地（企 业）进 行。生 产 种 的 繁 育 由 县（区）、乡 级 农 业 繁 育 基 地（企 业）单 位 进 行。各 育 种 单 位 应 设 立 专 用 繁 育 基 地，繁 种 必 须 持 有 关 部门 发 放 的 脱 毒 种 薯 繁 育 许 可 证。4.3 进 行 脱 毒 所 用 的 品 种，必 须 是 当 地 大 面 积 的 主 栽 品 种 或 已 经 审 定 即 将 推 广 的 新 品 种。4.4 脱 毒 红 薯 是 经 过 脱 除 红 薯 羽 状 斑 驳 病 毒、红 薯 潜 隐 病 毒、红 薯 褪 绿 斑 病 毒、红 薯 烟 草 花叶 病 毒 的 种 薯 种 苗。5 脱 毒 种 薯 的 质 量5.1 品 种 纯 度高 级 脱 毒 试 管 苗 必 须 是 经 过 严 格 病 毒 检 测，确 任 不 含 有 已 知 病 毒 或 指 定 病 毒，且 经 过 株D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 83系 评 选 而 中 选 的 试 管 苗 以 及 用 其 它 离 体 快 繁 或 防 蚜 条 件 下 速 繁 后 的 试 管 茎 蔓 苗。原 原 种 和 原种 的 纯 度 不 低 于 9 9%，生 产 种 纯 度 不 低 于 9 6%。5.2 薯 块 病 虫5.2.1 病 毒 病：原 原 种 薯 的 带 毒 率 0，原 种 和 生 产 种 的 带 毒 率 不 能 超 过 2%、1 0%。5.2.2 其 它 病 虫 害：红 薯 黑 班 病、根 腐 病，原 原 种 带 病 率 为 0，原 种 和 生 产 种 带 病 率 不 能 超过 0.1%、1%。原 原 种、原 种、生 产 种 的 茎 线 虫 病、根 结 线 虫 病 的 带 病 率 均 为 0。5.3 其 它5.3.1 薯 块 整 齐 度：是 指 种 薯 重 1 0 0 5 0 0 g 的 薯 块 占 总 量 的 百 分 比；整 齐 度 不 低 于 8 5%。即原 种、生 产 种 薯 块 要 求 每 块 重 1 0 0 5 0 0 g。5.3.2 不 完 整 薯 率：机 械 损 伤、自 然 干、畸 形 薯 所 占 比 率 为：原 原 种 不 超 过 1%、原 种 不 超过 3%、生 产 种 不 超 过 6%。6 脱 毒 红 薯 试 管 苗 繁 育 技 术 标 准6.1 脱 毒 红 薯 茎 尖 苗 的 培 育利 用 植 物 茎 尖 顶 部 分 生 组 织 不 带 或 很 少 携 带 病 毒 的 原 理，在 无 菌 条 件 下 切 取 红 薯 茎 尖 分生 组 织，并 在 特 定 的 培 养 基 上 进 行 离 体 培 养，就 能 够 再 生 出 不 带 有 病 毒 的 茎 尖 脱 毒 苗。即：选 则 具 有 该 品 种 特 征 特 性 的 无 病 红 薯 苗 茎 顶 部 3 厘 米 长 的 芽 段，用 7 0%酒 精、3%漂 白 粉 液 分别 消 毒，在 超 净 工 作 台 内 解 剖 镜 下 剥 离 茎 尖。将 剥 离 的 长 0.2-0.5 毫 米（一 般 带 1-2 个 叶 原基）的 茎 尖 接 种 在 附 加 1-2 m g 每 升 6-b a 的 m s 培 养 基 上，2 6-2 8 温 度 下 补 光 培 养，茎 尖 膨大 变 绿 后 转 入 无 激 系 的 m s 培 养 基 上 培 养 成 茎 尖 试 管 苗。待 苗 长 至 5-6 片 叶 时 移 到 营 养 钵 内进 行 病 毒 检 测。一 般 来 讲，从 剥 茎 尖 到 诱 导 出 5-7 片 叶 的 茎 尖 苗 至 少 要 用 6 0-9 0 d。利 用 分生 组 织 和 外 殖 体 培 养 诱 导 红 薯 茎 尖 苗 是 红 薯 脱 毒 的 技 术 关 键。6.2 病 毒 检 测茎 尖 分 生 组 织 培 养 得 到 的 茎 尖 苗 并 不 都 是 脱 毒 苗，只 有 部 分 苗 不 含 病 毒，是 脱 毒 苗；茎尖 苗 必 须 经 过 严 格 的 病 毒 检 测 确 认 不 带 病 毒 后 才 是 脱 毒 茎 尖 苗。茎 尖 苗 的 检 测 一 般 首 先 采 取目 测 法 淘 汰 弱 苗 和 显 症 苗，然 后 再 用 血 清 学 方 法 或 分 子 生 物 学 方 法 进 行 筛 选。经 血 清 学 或 分子 生 物 学 方 法 检 测 呈 阴 性 的 样 品 再 进 行 指 示 植 物 嫁 接 检 测。6.3 优 良 株 系 评 选红 薯 的 芽 变 率 比 较 高，茎 尖 分 生 组 织 培 养 再 生 的 茎 尖 苗 株 系 间 在 形 态 和 产 量 方 面 往 往 存在 较 大 差 异。因 此，经 病 毒 检 测 确 认 的 脱 毒 苗 必 须 进 行 优 良 株 系 评 选，淘 汰 变 异 株 系，保 留优 良 株 系。株 系 评 选 的 方 法 是：将 脱 毒 苗 株 系 每 系 5-1 0 株 栽 种 到 防 虫 网 室 内，以 同 品 种 普通 带 毒 薯 为 对 照，进 行 形 态、长 势、产 量 等 多 方 面 的 观 察 评 定，选 出 若 干 既 符 合 品 种 特 性 又高 产 的 最 优 株 系，混 合 繁 殖。7 高 级 脱 毒 试 管 苗 速 繁利 用 茎 尖 分 生 组 织 培 养 获 得 脱 毒 苗 后，要 获 得 大 田 生 产 利 用 的 足 够 脱 毒 苗，快 速 繁 殖 技术 起 着 决 定 性 作 用。脱 毒 红 薯 茎 尖 苗 的 大 量 繁 殖，可 以 采 用 试 管 苗 单 叶 节 快 繁 或 温 网 棚 繁 殖2 种 方 式 来 完 成。7.1 高 级 脱 毒 苗 试 管 快 繁 脱 毒 苗 试 管 快 繁 具 有 以 下 优 越 性：（1）繁 殖 速 度 快。在 合 适 的 培养 条 件 下（温 度 2 5，每 天 光 照 1 8 小 时），1 个 茎 节 1 个 月 内 即 可 长 成 具 5-6 片 叶 的 小 植 株，以 继 代 1 次 增 殖 5 株 计 算，其 繁 殖 系 数 为 5 n。（2）避 免 病 毒 再 侵 染。脱 毒 苗 的 试 管 快 繁 是D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 84在 严 格 的 无 菌 条 件 下 进 行 的，即 没 有 病 毒 源 也 没 有 传 播 媒 介。（3）继 代 繁 殖 成 活 率 高。除 极少 数 由 于 操 作 不 慎 造 成 试 管 苗 污 染 外，单 茎 叶 成 苗 率 达 1 0 0%。（4）不 受 季 节、气 候 和 空 间限 制，可 以 进 行 工 厂 化 生 产。7.1.1 脱 毒 苗 试 管 快 繁 采 用 不 加 任 何 激 素 的 M S 培 养 基。7.1.2 将 待 繁 的 高 级 脱 毒 试 管 苗 在 无 菌 条 件 下 切 成 一 叶 一 节 的 切 段，扦 插 在 无 激 素 的 M S 培养 基 上，在 2 6-2 8、1 4-1 6 h 光 照 条 件 下 离 体 培 养，2 5-3 0 d 左 右 即 可 长 成 5-7 片 叶 大 小 的幼 苗，即 又 可 进 行 下 一 轮 切 段 快 繁。繁 殖 系 数 呈 几 何 级 数 增 加。7.2 高 级 脱 毒 试 管 苗 的 田 间 快 繁7.2.1 脱 毒 试 管 苗 的 田 间 快 繁 采 用 防 蚜 塑 料 大 棚 设 备 或 防 蚜 竹（木）大 棚 设 备。7.2.2 隔 离 措 施 5 0 0 米 内 无 普 通 带 毒 红 薯 空 间 隔 离，繁 殖 棚 加 盖 4 0 目 防 蚜 网。7.2.3 苗 床 培 养 土 用 林 间 表 层 细 土 加 经 高 温 发 酵 过 筛 的 生 物 有 机 肥，土、肥 比 例 6：4或 7：3，充 分 混 匀 即 为 苗 床 营 养 土，苗 床 营 养 土 厚 度 1 0-1 5 c m。7.2.4 脱 毒 红 薯 试 管 苗 防 蚜 塑 料 大 棚 快 繁在 3 月 上-中 旬 将 5-7 片 叶 的 脱 毒 试 管 苗 打 开 瓶 口，室 温 下 加 光 照 炼 苗 5-7 d。栽 前 头 天下 午 在 棚 内 苗 床 上 撤 上 用 1 0 0 g 5 0%辛 硫 硫 乳 油 兑 水 2.5-5 k g 稀 释 后 与 1 5-2 5 k g 干 饵 料 拌 成 的毒 饵，以 消 灭 地 下 害 虫。然 后 按 5 5 c m 行 株 距 栽 种 在 覆 盖 防 虫 网 的 塑 料 大 棚 内，浇 足 水 后加 盖 一 层 小 拱 棚，把 温 度 控 制 在 2 5 摄 氏 度 左 右。待 苗 长 至 1 5-2 0 c m 时 剪 下 蔓 头 苗 继 续 栽 种、快 繁。采 用 这 种 双 膜 育 苗 方 法 繁 殖 系 数 可 以 达 到 1 0 0 倍 以 上。但 要 注 意 小 水 勤 浇，通 风 通 气，保 证 温 度 既 不 能 低 于 1 0，也 不 能 高 于 3 0。7.2.5 脱 毒 红 薯 试 管 苗 防 蚜 竹（木）网 棚 快 繁在 3 月 下 旬 至 4 月 上 旬 将 经 过 锻 炼 的 5-7 片 叶 的 脱 毒 试 管 苗 或 在 塑 料 大 棚 内 剪 下 的 试 管蔓 头 苗（按 每 苗 2-3 片 叶），栽 植 于 防 蚜 虫 大 棚 内 营 养 土 苗 床 上，行 株 距 1 0 8 c m。栽 前 仍用 药 剂 处 理 苗 床 防 治 地 下 害 虫。栽 后 勤 施 肥 水，温 度 控 制 在 2 5-3 0，待 苗 长 至 1 5 厘 米 左右 时 摘 心，以 促 进 其 分 枝。以 后 待 分 枝 苗 长 至 5 片 叶 时 继 续 剪 苗 快 繁，或 直 接 用 于 繁 殖 原 原种。7.2.6 繁 苗 过 程 中 传 毒 再 侵 染 的 防 止。从 栽 植 苗 之 日 计 每 隔 7-1 0 d 定 期 对 苗 床 上 栽 植 的 红 薯试 管 苗 喷 洒 防 治 蚜 虫 药 剂，以 防 止 蚜 虫 带 毒 传 播。8 脱 毒 红 薯 原 原 种 繁 育 技 术 标 准8.1 原 原 种指 在 防 蚜 虫 网 棚 内 无 病 原 土 壤 上 栽 种 的 高 级 脱 毒 试 管 苗 或 用 棚 内 脱 毒 试 管 苗 繁 育 的 茎蔓 苗 生 产 的 种 薯。用 原 原 种 薯 在 防 蚜 虫 条 件 下 育 出 的 薯 苗 叫 原 原 种 苗。8.2 脱 毒 红 薯 原 原 种 繁 育 必 须 具 备 的 条 件8.2.1 栽 种 的 种 苗 必 须 是 高 级 脱 毒 试 管 苗 或 用 高 级 脱 毒 试 管 苗 在 防 蚜 条 件 下 繁 育 的 茎 蔓 苗。8.2.2 必 须 在 防 虫 网 棚 内 生 产 原 原 种。防 虫 网 棚 是 繁 育 原 原 种 的 重 要 条 件 之 一，所 用 防 虫 网的 网 眼 必 须 在 4 0 目 以 上，这 样 的 网 目 蚜 虫 才 不 能 通 过，可 以 较 大 限 度 地 减 少 蚜 虫 传 播 病 毒的 机 会。8.2.3 网 棚 内 所 用 地 块 必 须 是 无 病 原 土 壤，最 好 是 多 年 未 栽 种 过 红 薯 的 土 壤。8.2.4 在 繁 育 原 原 种 的 整 个 过 程 中，要 始 终 贯 穿 防 止 病 毒 再 侵 染 的 意 识 以 及 防 止 再 侵 染 的 措施。8.2.5 在 网 棚 内 每 隔 5-1 0 米 种 植 5 株 以 上 的 指 示 植 物，并 在 原 原 种 生 产 过 程 中 定 期 逐 株 观D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 85察 是 否 有 病 毒 症 状，一 旦 发 现 病 株，须 对 全 棚 进 行 普 查，要 坚 决 拔 除 带 毒 病 株。如 果 网 棚 内所 栽 植 的 指 示 植 物 表 现 病 毒 症 状，整 个 棚 内 繁 殖 的 种 薯 应 降 级 使 用。8.2.6 每 隔 1 0-1 5 d 喷 洒 一 次 杀 虫 药 剂，防 治 蚜 虫，以 防 传 毒，药 剂 应 轮 换 使 用，避 免 产 生抗 药 性，达 不 到 防 蚜 效 果。8.3 技 术 工 艺 流 程隔 离 条 件 土 地 选 择 土 壤 消 毒 生 物 有 机 肥 加 复 合 肥（基 肥）单 行 起 垄 移栽 5 0 0 0 株/6 6 7 m2密 度 夏 薯 栽 培 多 次 灭 蚜（成 活 后 每 1 0 d 一 次）提 蔓 管 理 适 时 采 收 分 级 包 装 入 窖。8.4 技 术 及 经 济 指 标种 薯 纯 度 9 9%种 薯 大 小 1 0 0 g-5 0 0 g，每 6 6 7 m2种 薯 产 量 1 0 0 0 k g,无 病 虫 率 9 9%8.5 材 料（以 6 6 7 m2计）种 苗 5 0 0 0 株、生 物 有 机 肥 2 0 0 k g、复 合 肥 2 5 k g，5 0%硫 酸 钾 2 0 k g、土 壤 消 毒 剂、灭 蚜剂 等。8.6 繁 种 移 栽 时 间6 月 上 旬 至 中 旬8.7 种 薯 收 获 时 间1 0 月 下 旬 至 1 1 月 初9 脱 毒 红 薯 原 种 繁 育 技 术 标 准9.1 原 种指 利 用 原 原 种 苗 在 具 备 5 0 0 m 以 上 隔 离 条 件（即 5 0 0 m 内 没 有 种 植 普 通 带 毒 红 薯）而 且土 壤 无 病 原 的 田 块 生 产 的 种 薯。由 原 种 在 防 蚜 条 件 下 育 出 的 薯 苗 叫 原 种 苗。9.2 原 种 繁 育 必 须 具 备 的 条 件9.2.1 所 用 薯 苗 为 原 原 种 苗；9.2.2 具 有 5 0 0 m 内 无 普 通 带 毒 红 薯 种 植 的 空 间 隔 离 条 件；9.2.3 所 用 田 块 至 少 3 年 以 上 没 种 过 普 通 带 毒 红 薯，且 为 无 茎 线 虫 病、根 腐 病、黑 斑 病 等。原 种 繁 殖 时 要 密 切 注 意 防 止 病 毒 再 侵 染。要 在 繁 殖 田 内 每 隔 1 5-2 0 米 种 植 一 些 指 示 植物，每 1 5 d 定 期 喷 洒 防 蚜 虫 药 剂，以 防 蚜 虫 传 毒。收 获 前 要 观 察 病 毒 发 病 情 况，及 时 拔 去 病株。收 获 时 严 把 质 量 关，不 符 合 质 量 要 求 的 薯 块 坚 决 不 入 窖。9.3 技 术 工 艺 流 程种 薯 加 温 育 苗 隔 离 条 件 土 地 选 择 土 壤 消 毒 生 物 有 机 肥 加 复 合 肥（基肥）单 行 起 垄 移 栽 密 度 6 0 0 0 株/6 6 7 m2 夏 薯 栽 培 灭 蚜 提 蔓 喷 施 矮壮 素 适 时 采 收 分 级 包 装 入 窖。9.4 技 术 及 经 济 指 标种 薯 纯 度 9 9%种 薯 大 小 1 0 0-5 0 0 g，6 6 7 m2种 薯 产 量 1 2 0 0-1 5 0 0 k g，无 病 虫 率 9 9%9.5 材 料（以 6 6 7 m 2 计）原 原 种 薯 5 0 k g、育 苗 生 物 增 温 剂 1 包（2 5 k g）；移 栽 用 生 物 有 机 肥 2 0 0 k g、复 合 肥 2 5 k g；5 0%硫 酸 钾 2 0 k g；土 壤 消 毒 剂、灭 蚜 剂、育 苗 用 薄 膜。9.6 种 薯 育 苗 时 间 及 方 法种 薯 于 3 月 下 旬 至 4 月 上 旬 播 种 育 苗，采 用 网 室 大 棚 增 温 育 苗 法，每 5 0 k g 种 薯 可 出 壮苗 6 0 0 0 8 0 0 0 株。D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 869.7 移 栽 时 间6 月 中 旬 至 下 旬9.8 种 薯 收 获 时 间1 0 月 下 旬 至 1 1 月 初1 0 脱 毒 红 薯 生 产 种 繁 育 技 术 标 准1 0.1 生 产 种指 利 用 原 种 苗 在 普 通 无 病 留 种 田 块 生 产 的 种 薯。由 生 产 种 在 防 蚜 条 件 下 培 育 的 苗 叫 生 产种 苗。1 0.2 生 产 种 繁 育 必 须 具 备 的 条 件1 0.2.1 必 须 用 原 种 苗 进 行 繁 育。1 0.2.2 所 用 田 块 应 为 无 病 留 种 田，无 茎 线 虫 病、根 腐 病、黑 斑 病 等。1 0.2.3 在 整 个 繁 育 过 程 中，每 隔 1 5 d 定 期 喷 洒 防 蚜 虫 药 剂，以 防 止 蚜 虫 传 毒，保 证 生 产 种质 量。1 0.3 技 术 工 艺 流 程种 薯 竹 拱 棚 加 温 育 苗 隔 离 条 件 土 地 选 择 土 壤 消 毒 生 物 有 机 肥 加 复 合肥（基 肥）单 行 起 垄 移 栽 密 度 6 0 0 0/6 6 7 m2 夏 薯 栽 培 灭 蚜 提 蔓 喷施 矮 壮 素 适 时 采 收 分 级 包 装 入 窖 提 供 农 户 大 田 用 种 薯。1 0.4 技 术 及 经 济 指 标种 薯 纯 度 9 6%种 薯 大 小 1 0 0-5 0 0 g，6 6 7 m2种 薯 产 量 1 5 0 0 2 0 0 0 k g、无 病 率 9 6%1 0.5 育 苗 方 法 及 时 间在 选 择 确 定 的 隔 离 区 内、采 用 大 田 竹 拱 棚 保 温、增 温 剂 苗 床 育 苗 法，每 5 0 k g 原 种 薯 可出 苗 6 0 0 0 8 0 0 0 株 种 苗。种 薯 于 3 月 中 旬-下 旬 播 种 育 苗。1 0.6 移 栽 时 间 和 收 获 时 间参 照 脱 毒 红 薯 原 种 繁 殖。1 1 脱 毒 红 薯 不 同 级 别 脱 毒 苗 的 病 毒 检 测 方 法1 1.1 红 薯 病 毒 病 的 症 状红 薯 病 毒 病 主 要 包 括：（1）叶 斑 型。主 要 有 紫 色 羽 状 斑、紫 斑、紫 环 斑、黄 色 斑 或 者 枯 斑（2）花 叶 型。苗 期 感 病 后，初 期 叶 脉 呈 网 状 透 明。后 沿 叶 脉 出 现 不 规 则 黄 绿 相 间 的 花 叶斑 纹。（3）卷 叶 型。叶 片 边 缘 上 卷，严 重 者 可 形 成 杯 状。（4）叶 片 皱缩 型。病 苗 叶 片 较 小，皱 缩，叶 缘 不 整 齐，甚 至 扭 曲 畸 形。（5）叶 片 黄 化 型。包 括 叶 片 黄 化 型 及 网 状 黄 脉。薯 块 上 的 症 状 主 要 是 产 生 黑 褐 色 龟 裂 纹。1 1.2 红 薯 不 同 级 别 脱 毒 苗 的 检 测 方 法由 于 红 薯 脱 毒 苗 在 繁 育 过 程 中 极 易 受 到 病 毒 的 再 侵 染，因 此，在 繁 种 过 程 中，除 根 据不 同 级 别 种 薯 的 繁 种 要 求 采 取 防 治 蚜 虫 等 必 要 措 施 外，还 应 加 强 病 毒 的 检 测，及 时 淘 汰感 病 种 薯 以 保 证 脱 毒 种 薯 的 质 量。根 据 不 同 级 别 种 薯 对 病 毒 感 染 率 的 要 求，可 采 取 不 同 的病 毒 检 测 方 法。D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 871 1.2.1 茎 尖 苗 的 检 测茎 尖 苗 的 检 测 可 首 先 采 取 目 测 法。由 于 脱 毒 茎 尖 苗 和 带 毒 茎 尖 苗 在 形 态、长 势 上 有 明 显差 异，前 者 生 长 快、叶 片 平 展、植 株 较 健 壮；后 者 长 势 弱，叶 片 上 常 出 现 花 叶、明 脉 和 褪 绿斑 等 症 状，因 此，可 先 用 目 测 法 淘 汰 弱 苗 和 显 症 苗。然 后 再 用 血 清 学 方 法 或 分 子 生 物 学 方 法进 行 筛 选，经 血 清 学 或 分 子 生 物 学 方 法 检 测 呈 阴 性 的 样 品 再 进 行 嫁 接。每 个 茎 尖 苗 一 般 嫁 接3-5 株，有 1 株 发 病 即 认 为 该 样 带 毒，对 于 都 不 发 病 的 样 品 应 再 重 复 嫁 接 1 次。1 1.2.2 原 原 种 田 的 检 测脱 毒 原 原 种 的 繁 殖 一 般 在 防 虫 网 室 内 进 行，原 原 种 田 病 毒 的 检 测 方 法 是：首 先 在 原 原种 田 种 植 若 干 株 巴 西 牵 牛 植 物，定 期 观 察 巴 西 牵 牛 是 否 显 症、以 判 断 是 否 有 蚜 虫 传 毒；对原 原 种 田 还 要 进 行 定 期 普 查，及 时 淘 汰 显 症 株 和 变 异 株；另 外 对 原 原 种 田 要 定 期 取 样，用血 清 学 方 法 或 嫁 接 指 标 植 物 的 方 法 进 行 检 测，以 判 断 原 原 种 田 病 毒 的 感 染 情 况，对 于 病 毒感 染 率 超 标 的 繁 种 田 要 降 级 使 用。1 1.2.3 原 种 田 的 检 测脱 毒 原 种 的 繁 殖 要 在 有 一 定 隔 离 区 的 地 方 进 行，即 周 围 5 0 0 米 内 不 能 种 植 非 脱 毒 薯。原 种 田 的 病 毒 检 测 以 目 测 法 和 田 间 种 植 巴 西 牵 牛 为 主，必 要 时 田 间 取 样 用 血 清 学 方 法 检 测病 毒 的 感 染 率。1 1.2.4 生 产 种 田 的 检 测生 产 种 田 的 病 毒 检 测 以 目 测 法 为 主，就 是 要 定 期 对 生 产 种 田 的 发 病 率 进 行 调 查，必 要时 也 可 抽 样 用 血 清 学 方 法 检 测，当 发 病 率 超 过 一 定 标 准 时 就 不 能 再 作 为 种 薯 使 用。1 1.3 脱 毒 红 薯 病 毒 检 测 操 作 方 法1 1.3.1 目 测 法根 据 红 薯 叶 片 和 薯 块 上 出 现 的 典 型 症 状（见 本 标 准 9.1）来 判 断 红 薯 是 否 感 染 病 毒。但病 毒 病 的 症 状 可 因 病 毒 种 类、红 薯 品 种 以 及 环 境 条 件 等 因 素 的 影 响 而 改 变，因 此 根 据 目 测 法只 能 作 为 初 步 判 断。进 行 目 测 法 还 要 注 意 区 分 红 薯 品 种 特 性 以 及 由 于 土 壤 水 分 过 大，营 养 失调 等 原 因 造 成 的 生 理 病 害 与 红 薯 病 毒 病 症 状 之 间 的 区 别。1 1.3.2 指 标 植 物 法常 用 巴 西 牵 牛（I p o m o e a s e t o s a）作 指 示 植 物，几 乎 所 有 侵 染 红 薯 的 病 毒 都 能 感 染 巴 西牵 牛，因 此，将 薯 苗 嫁 接 在 巴 西 牵 牛 上，从 巴 西 牵 年 的 显 症 情 况 可 判 断 薯 苗 是 否 带 毒。具 体嫁 接 方 法 如 下：以 薯 苗 芽 尖 作 接 穗，将 芽 尖 削 成 楔 型，另 将 具 3-4 片 真 叶 的 巴 西 牵 牛 作 砧 木，在 其 茎 叶 部 切 一 斜 口 把 楔 形 接 穗 插 入，用 封 口 膜 扎 住，置 防 虫 网 室 内 遮 阴 保 湿 3-4 d，然 后在 自 然 光 照 下 观 察 记 载 牵 牛 的 显 症 情 况，一 般 嫁 接 后 2 5-3 0 d 左 右 开 始 出 现 症 状，显 症 初 期新 生 叶 出 现 系 统 性 明 脉，以 后 发 展 为 花 叶 或 皱 缩 等 症 状。1 1.3.3 红 薯 病 毒 的 血 清 学 检 测常 用 的 血 清 学 检 测 方 法 为 酶 联 免 疫 吸 附 法（E L I S A）或 在 此 基 础 上 改 变 的 斑 点 酶 联 免疫 吸 附 法（D o t-B l o t E L I S A）等。D o t-B l o t E L I S A 具 有 快 速 和 可 检 测 大 量 样 品 的 特 点，在大 量 检 测 样 品 时 经 常 应 用。具 体 检 测 方 法 如 下：（1）样 品 处 理：取 直 径 约 为 1 c m 的 样 品 叶 片（约 0.1 g），加 入 1 m l 抽 提 缓 冲 液，迅 速研 磨，置 小 离 心 管 中，取 上 清 液 供 检 测 用。（2）点 样：将 N C 膜 在 T B S（2 0 m M T r i s-H C L,p H 7.5，1 5 0 m M N a C l,）中 充 分 湿 润，然后 放 在 一 张 干 燥 滤 纸 上，让 其 稍 干 燥，用 铅 管 作 好 记 号，用 微 量 取 样 器 进 行 点 样，点 样 后 让N C 膜 自 然 干 燥。（3）反 应：（a）封 闭：将 点 样 后 的 N C 膜 转 入 封 闭 液（T B S T+5%脱 脂 奶 粉）中 封 闭 1 小 时 或 4 封闭 过 夜。D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 88（b）第 一 抗 体 反 应：封 闭 后 的 N C 膜 用 T B S T（2 0 m M T r i s-H C L,p H 7.5，1 5 0 m M N a C l,0.0 5%T w e e n-2 0）漂 先 2-3 次，每 次 5-1 0 分 钟，加 入 用 T B S T 稀 释 的 病 毒 专 化 抗 血 清（1：2 0 0 0）3 7 保 温 1 h，再 用 T B S T 洗 膜 3 次，每 次 5-1 0 m i n。（c）第 二 抗 体 反 应：加 入 T B S T 稀 释 的 碱 性 磷 酸 脂 酶 标 记 的 羊 抗 兔 I g G（1：5 0 0 0），3 7 保 温 1 h，T B S T 洗 膜 3 次，每 次 5-1 0 m i n。（d）显 色：避 光 条 件 下，将 N C 膜 置 于 含 3 3 0 u g/m l N B T 和 1 6 5 u g/m l B C I P 的 碱 性 磷 酸脂 酶 缓 冲 液（1 0 0 m M T r i s-H C L,p H 9.5，1 0 0 m M N a C l,5 m M M g C l2）中 显 色 至 样 点 清 晰，将 膜放 入 蒸 馏 水 中 漂 洗，终 止 显 色 反 应。取 出 晾 干，拍 照。1 1.3.4 分 子 生 物 学 方 法 检 测随 着 分 子 病 毒 学 的 发 展，一 些 红 薯 病 毒（例 如 S P F M V、S P L V 等）的 核 苷 酸 序 列 已 经 清 楚，根 据 已 知 的 核 酸 序 列，设 计 特 异 引 物，利 用 R T-P C R 可 快 速 检 测 红 薯 病 毒 和 病 毒 的 不 同 株 系。也 可 利 用 核 酸 探 针，通 过 核 酸 杂 交 的 方 法 检 测 病 毒 的 存 在。1 2 脱 毒 红 薯 不 同 级 别 脱 毒 苗 的 质 量 标 准根 据 不 同 级 别 脱 毒 苗 对 病 毒 感 染 率 的 不 同 要 求，初 步 制 定 以 下 判 断 标 准，病 毒 感 染 率 超过 一 定 标 准 的 应 降 级 使 用。红 薯 脱 毒 苗 病 毒 检 测 方 法 及 标 准（试 行）种苗级别 检测方法 取样方法 检样数量 重复次数 判断依据 检测标准 备注试管苗a.血清法b.指示植物法试管苗 3 株/株系 2a.血清学检测阴性b.嫁接所有重复均不显症显症率为 0原原种苗a.目测法b.血清法c.指示植物法5 点样方取样目测普查1 0 0 株/亩5 0 株/亩2嫁接不显症或血清反应阴性目测显症率为 0；血清及指标植阳性率小于 0.1%目测显症率大于 0.1%者可降级为原种使用原种苗a.目测法b.血清法c.指示植物法5 点样方取样多点普查1 0 0 株/亩5 0 株/亩2嫁接不显症或血清反应阴性目测显症率小于0.1%；血清及指示植物阳性率小于 1%显症率大于 1%者可降级为生产种使用生产种苗a.目测法b.血清法随机多点取样1 0 0 株/点 3-5 依症状判断 目测显症率小于 1%D B 5 2 0 6/T 8 5-2 0 1 89附 录 A(规 范 性 附 录)斑 点 酶 联 免 疫 检 测 法(D O T-I S A)A 1 试 剂所 用 化 学 试 剂