养殖水体中丁香酚的测定 气相 色谱-质谱法DB35／T 1657-2017.pdf

ICS 67.050 Z 50 DB35 福建省地方标准 DB35/T 16572017 养殖水体中丁香酚的测定 气相 色谱-质谱法 Determination of Eugenol in aquaculture water by Gas Chromatography Mass Spectrometry 2017-05-0 5发布 2017-08-05实施 福建省质量技术监督局 发布 DB35/T 16572017 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则编写。本标准由福建省海洋与渔业厅提出并归口。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准起草单位：福建省水产研究所、福建省渔业环境监测站、农业部渔业产品质量监督检验测试中心（厦门）。本标准主要起草人：刘海新、罗冬莲、余颖、姜琳琳、位绍红、王丽娟、叶玫、罗方方。DB35/T 16572017 1 养殖水体中丁香酚的测定 气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了养殖水体中丁香酚含量测定的气相色谱-质谱法。本标准适用于养殖水体中丁香酚含量的检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 用正己烷萃取水样中丁香酚，萃取液经无水硫酸钠脱水、减压浓缩后，硅胶固相萃取柱净化，气相色谱-质谱检测，内标法定量。4 试剂和材料 以下所用的试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682-2008规定的一级水。4.1 丁香酚标准品：纯度99%。4.2 甲基丁香酚标准品：纯度99%。4.3 正己烷：色谱纯。4.4 乙酸乙酯：色谱纯。4.5 无水硫酸钠：经 650 灼烧 4 h，冷却后干燥器中贮存备用。4.6 氯化钠：经 650 灼烧 4 h，冷却后干燥器中贮存备用。4.7 硅胶固相萃取柱：2 g/6 mL，或性能相当者。4.8 标准储备液：称取丁香酚（4.1）10.0 mg（精确至 0.1 mg）于 100 mL 棕色容量瓶中，乙酸乙酯（4.4）溶解并稀释至刻度，配制成 100 g/mL 的溶液备用，8 以下冷藏避光保存，有效期 3 个月。4.9 内标储备液：称取甲基丁香酚（4.2）10.0 mg（精确至 0.1 mg）于 100 mL 棕色容量瓶中，乙酸乙酯（4.4）溶解并稀释至刻度，配制成 100 g/mL 的溶液备用，8 以下冷藏避光保存，有效期 3个月。4.10 标准中间液：移取 100 g/mL 标准储备液（4.8）1.00 mL于 10 mL 棕色容量瓶中，用乙酸乙酯（4.4）稀释至刻度，配制成 10.0 g/mL 的溶液备用，8 以下冷藏避光保存，有效期 15 天。4.11 内标中间液：移取 100 g/mL 内标准储备液（4.9）1.00 mL于 10 mL 棕色容量瓶中，用乙酸乙酯（4.4）稀释至刻度，配制成 10.0 g/mL 的溶液备用，8 以下冷藏避光保存，有效期 15 天。4.12 内标使用液：移取 10.0 g/mL 内标中间液（4.11）0.40 mL于 10 mL 棕色容量瓶中，用乙酸乙酯（4.4）稀释至刻度，配制成 0.40 g/mL 的溶液，使用时现配现用。DB35/T 16572017 2 4.13 标准工作液：准确移取适量 10.0 g/mL 丁香酚标准中间液（4.10）和10.0 g/mL内标中间液（4.11），用乙酸乙酯（4.4）稀释成 5.00、10.0、50.0、100、150、500、1000 g/L 的标准工作液，内标物浓度均为 100 g/L，使用时现配现用。5 仪器与设备 5.1 气相色谱-四极杆质谱联用仪（GC-MS）：配备电子轰击电离源（EI）。5.2 分析天平：感量 0.1 mg和 0.01 g。5.3 旋涡混合器。5.4 旋转蒸发仪。5.5 氮吹仪。5.6 水相尼龙滤膜：0.45 m。5.7 有机相针式过滤器：0.22 m。5.8 固相萃取装置。5.9 三角瓶：100 mL。5.10 鸡心瓶：100 mL。5.11 分液漏斗：100 mL。5.12 玻璃刻度试管。6 样品的采集与保存 现场采集的200 mL水样装入小口棕色玻璃瓶中，盖紧、标明标记，冷藏避光运输，8 以下冷藏避光保存，7 天内检测。7 样品测定 7.1 样品萃取 水样经滤膜（5.6）抽滤。移取过滤后的水样20.0 mL于三角瓶（5.9）中，加入氯化钠（4.6）1.5 g2 g，振荡溶解。将水样转入100 mL的分液漏斗中，加入20 mL的正己烷（4.3），剧烈振荡2 min后静置5 min，收集上层有机相于另一个三角瓶（5.9）中。用15 mL的正己烷（4.3）重复提取一次，合并两次萃取有机相。加入4 g5 g的无水硫酸钠（4.5），旋涡振荡10 s后，转入100 mL的鸡心瓶（5.10）中。用5 mL的正己烷（4.3）洗涤无水硫酸钠，合并正己烷于鸡心瓶(5.10)中。于37 减压浓缩至8 mL10 mL，用于固相萃取。7.2 固相萃取净化 硅胶固相萃取柱（4.7）预先用3 mL正己烷（4.3）活化，上样，控制流速约为每秒1滴，弃去流出液。4 mL正己烷（4.3）淋洗，乙酸乙酯（4.4）8 mL洗脱，收集洗脱液于玻璃刻度试管（5.12）中，40 氮吹至1.5 mL，加入0.40 g/mL内标使用液（4.12）0.50 mL，乙酸乙酯（4.4）定容到2 mL，混匀，有机相针式过滤器（5.7）过滤，供气相色谱-质谱仪测定。7.3 仪器参考条件 7.3.1 色谱条件 DB35/T 16572017 3 7.3.1.1 石英毛细管柱：14%氰丙基苯基（其中7%氰丙基7%苯基）86%二甲基聚硅氧烷，30 m0.25 mm0.25 m。7.3.1.2 进样口温度：250。7.3.1.3 进样方式：不分流进样。7.3.1.4 进样量：1 L。7.3.1.5 色谱柱升温程序：初始温度为 80，保持 2 min；10/min升温至 185；20/min 升温至250 保持4 min。7.3.1.6 载气：氦气（纯度99.999%），流速：1.0 mL/min。7.3.2 质谱参数 7.3.2.1 电离模式：电子轰击电离源（EI），能量为 70 eV。7.3.2.2 离子源温度：250，传输线温度：250，溶剂延迟 10 min。7.3.2.3 离子检测方式：选择离子检测（SIM），丁香酚检测离子为：103、131、149、164，定量离子164；甲基丁香酚检测离子：103、147、163、178，定量离子 178。7.4 样品的定性测定和定量测定 7.4.1 定性测定 7.4.1.1 为保证分析的选择性和灵敏度要求，丁香酚和甲基丁香酚的色谱峰应基线分离，同时采用不同时间窗口检测丁香酚和甲基丁香酚特征离子。7.4.1.2 在相同测试条件下，样液中丁香酚色谱保留时间和内标物保留时间的比值，即相对保留时间，应与标准工作液中丁香酚的相对保留时间偏差在0.5%以内，且目标物中检测到定性离子的相对丰度，与浓度相当的标准工作液中定性离子相对丰度进行比较，若偏差不超过表 1 规定的范围，则可认为试样中存在对应的待测物。表 1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（%）允许偏差（%）50 10 2050（不含20）15 1020（不含10）20 10 50 7.4.2 定量测定 采用内标法单离子定量，选定浓度与样液相近的标准工作液，以峰面积比计算。标准工作溶液和样液中的丁香酚和甲基丁香酚响应值均应在仪器线性范围内。上述仪器条件下，丁香酚和甲基丁香酚的选择离子流图见附录A。7.5 空白实验 除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。8 结果计算 试样中丁香酚残留量按下式计算，计算结果均需扣除空白值：DB35/T 16572017 4 m ss sV B AB V C AX.(1)式中：X 试样中丁香酚含量，g/L；A 样液中丁香酚的峰面积；Cs 标准工作液中丁香酚的浓度，g/L；Bs 标准工作液中甲基丁香酚的峰面积；B 样液中甲基丁香酚的峰面积；As 标准工作液中丁香酚的峰面积；Vm 试样体积，mL；V 试样定容体积，mL。注：测定结果用平行测定后的算术平均值表示，保留三位有效数字。9 方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 本方法的检测限为0.5 g/L，定量限为1 g/L。9.2 准确度 本方法在添加浓度1 g/L50.0 g/L时，回收率为70%120%。9.3 精密度 本方法的相对标准偏差15%。A DB35/T 16572017 7 B B 附 录 A（资料性附录）丁香酚和甲基丁香酚选择离子流图 A.1 丁香酚标准溶液及加标空白水样选择离子流图 丁香酚标准溶液选择离子流图见图A.1。a 注：丁香酚浓度为：100ng/mL;甲基丁香酚浓度为：100ng/mL 图 A.1 丁香酚标准溶液选择离子流图 A.2 加标空白水样选择离子流图 空白水样选择离子流图见图A.2。丁香酚甲基丁香酚 RT:9.00-12.009.0 9.2 9.4 9.6 9.8 10.0 10.2 10.4 10.6 10.8 11.0 11.2 11.4 11.6 11.8 12.0Time(min)102030405060708090100102030405060708090100Relative AbundanceRT:11.18AH:48191RT:11.38AH:148625NL:4.88E4m/z=163.50-164.50 F:+c SIM ms 102.50-103.50,130.50-131.50,148.50-149.50,163.50-164.50 MS ICIS data08NL:1.49E5m/z=177.50-178.50 F:+c SIM ms 102.50-103.50,146.50-147.50,162.50-163.50,177.50-178.50 MS ICIS data08DB35/T 16572017 8 b 注：丁香酚添加浓度为：1g/L 图 A.2 加标空白水样选择离子流图 _ RT:9.00-12.009.0 9.2 9.4 9.6 9.8 10.0 10.2 10.4 10.6 10.8 11.0 11.2 11.4 11.6 11.8 12.0Time(min)102030405060708090100102030405060708090100Relative AbundanceRT:11.17AH:9773RT:11.37AH:250109NL:1.04E4m/z=163.50-164.50 F:+c SIM ms 102.50-103.50,130.50-131.50,148.50-149.50,163.50-164.50 MS ICIS data42NL:2.51E5m/z=177.50-178.50 F:+c SIM ms 102.50-103.50,146.50-147.50,162.50-163.50,177.50-178.50 MS ICIS data42丁香酚 甲基丁香酚 DB35/T 16572017 福建省地方标准 养殖水体中丁香酚的测定 气相色谱-质谱法 DB35/T 16572017*2017年 6月第一版 2017年 6月第一次印刷