饲料中硒的测定 原子荧光法DB34／T 814-2023.pdf

ICS 65.120 CCS B 46 34 安徽省地方标准 DB34/T 8142023 代替 DB34/T 814-2008 饲料中硒 的测定 原 子荧光法 Determination of selenium in feeds by atomic fluorescence method 2023-10-07 发布 2023-11-07 实施 安徽省市 场监督 管 理局 发 布 DB34/T 814 2023 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。本文件代 替 DB34/T 814-2008 饲料中 硒的测 定 原 子荧光法，与 DB34/T 814-2008 相 比，除结构性 调整 和编 辑性 改动 外，主 要技 术变 化如 下：a)修改了5.8 条，试剂 中增 加 了硼氢 化钾（见5.8，2008 版的4.7）；b)增加了“检 测方 法的 灵敏 度、准 确度 和精 密度”（见第10 章）。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由 安 徽省 兽药 饲料 监察所 提出。本文件 由 安 徽省 农业 农村 厅归口。本文件 起草 单位：安 徽省 兽药饲 料监 察所、合 肥中 龙神力 动物 药业 有限 公司、安徽 农业 大学、安 徽省农业 科学 院畜 牧兽 医研 究所、萧 县孙 圩子 镇畜 牧 兽医站、萧县 动物 疫病 预 防和控 制中 心、芜 湖市 弋 江区农业 服务 中心。本文件 主要起 草人：丁在 亮、马 心玲、高翔、刘红 云、邢 丽、宋 亚伟、付艳 伟、宋 祥军、马瑞 钰、赵士朝、王 梦云、陈 婷霞。本文件 所代 替文 件的 历次 版本发 布情 况为：2008 年 首次 发布 为 DB34/T 814-2008；本 次为 第一 次修 订。DB34/T 814 2023 1 饲 料中硒 的测定 原 子荧光 法 1 范围 本文件 规定 了原 子荧 光法 测定饲 料中 硒的 原理、试 剂、仪 器、分析 步骤、结 果处理 与表 述、检 测 方法的灵 敏度、准 确度 和精 密度。本文件 适用 于饲 料中 硒的 测定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 20195 动 物饲 料 试样的 制备 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 原理 试样经 酸加 热消 解后，在 6 mol/L 盐酸(HCl)介 质中，将试样 中的 六价 硒（Se6+）还 原成四 价硒（Se4+），用硼氢化钠(NaBH4)或硼氢化钾(KBH4)作还 原剂，将四价硒（Se4+）在盐酸介质中还原成硒化氢(H2Se)，由载气(氩气)带入 原子化 器中进 行原子 化，在硒 特 制空心 阴极灯 照射 下，基 态硒原 子被激 发至 高能 态，在去活 化回 到基 态时，发 射出特 征波 长的 荧光，其 荧光强 度与 硒含 量成 正比。与标 准系 列比 较定 量。5 试剂 实验室 用水 应符 合 GB/T 6682 中 二级 用水 的规 格，使用的 试剂 除另 有说 明外，应为 分析 纯。5.1 硝酸(HNO3)，优 级纯。5.2 高氯酸(HClO4),优级 纯。5.3 盐酸(HCl)，优 级纯。5.4 6 mol/mL 盐酸 溶液：取 500 mL 用水 稀释 至 1000 mL，摇 匀。5.5 混合酸:硝酸+高 氯酸(4+1)混合酸。5.6 氢氧化 钠溶 液：称取 10.0 g 分 析纯 氢氧 化钠（NaOH）用水 溶解，然 后稀 释至 1000 mL，摇匀。5.7 硼氢化 钾（或硼 氢化钠）溶液(8 g/L):称取 8.0 g 硼氢 化钠(NaBH4)或 硼 氢化钾(KBH4)，溶于 5.8 氢氧化 钠溶 液（5.7）中，然后用 氢氧 化钠 溶液（5.7）稀释 至 1000 mL。铁氰化 钾(100 g/L):称取 10.0 g 铁 氰化 钾(K3Fe(CN)6),溶于 100 mL 水 中，混匀。5.9 硒标准 储备 液:精确 称取 100.0 mg 硒(光 谱纯)，溶 于 10 mL 硝酸 中，加 2 mL 高氯 酸（5.3），5.10 置水浴 中加 热 3 h4 h，冷却至 室温 后再 加 8.4 mL 盐酸（5.4），然后 置沸 水浴中 2 min，冷却 至室DB34/T 814 2023 2 温后，稀释至 1000 mL，此储备 液浓度 为每 毫升相 当于 100 g 硒。贮存 于 0 4 冰箱 中，备用。或 者有 证的 商品 标准 储备溶 液。硒标准 工作液:取 100 g/mL 硒 标准储 备液 1.0 mL，稀释 至 100 mL，此 标 准 工作液 浓度为 1 5.11 g/mL，此 标准 工作 液现 配现用。6 仪器 原子荧 光光 度计。6.1 分析天 平 分度 值 0.0001 g。6.2 自动控 温消 化炉（室 温1000）。6.3 电热板（3000 W）或 可调 温电炉（600 W）。6.4 7 试样的 制备 按照 GB/T 20195 选取 有 代表性 的饲料 样品 不少于 1000 g，四分 法缩 减至 200 g，粉 碎，使全部通过 0.45 mm 筛，混匀，储存于 磨口 瓶中 阴凉 条件 下保存 备用。8 分析步 骤 试样制 备 8.1 8.1.1 配合饲 料、浓 缩饲 料、单 一饲料 的处理：称 取 0.5 g 2.0 g 样 品于 150 mL 高型烧 杯内，在通风橱 内加 10.0 mL 混合酸(5.6)及 几粒 玻璃 珠，盖 上表面 皿冷 消化，过夜。次日于 电热 板上 加热，并及时补 加混 合酸（使 烧杯 内溶液 不少 于 10.0 mL）。当溶液 变为 清亮 无色 并伴 有白烟 时，再继 续加 热 至剩余体 积 2 mL 左 右，切不 可蒸干。冷 却，再加 5 mL 6 mol/L 盐酸(5.5)，继 续 加热至 溶液 变为 清亮 无色 并 伴有 白烟 出现，以 完全 将 六价 硒（Se6+）还原 成四 价 硒（Se4+）。冷 却，转移 至 50 mL 容 量瓶 中，用水稀 释到 刻度。同 时做 空白试 验，处理 好的 待测 试样溶 液应 在 7 日 内测 定。8.1.2 高 含 量 硒样 品 的 处理（预混 合 饲 料、高 硒 功能 性 饲料）的 处理：对 于每 千 克饲 料 含 硒在 1 mg以上的 样品，按（8.1.1）处理后 再准 确取 一定 体积 溶液再 稀释 后（使 溶液 含 硒量0.2 g/mL）测 定；对于以 石粉 为载 体的 预混 料，称 取 1 g 5 g 样品（精确 到0.0001 g），于 150 mL 高型烧 杯中，在 通风橱内 加 10 mL 水 后再 逐 滴加入 10 mL 硝酸（5.2），煮 沸至 烧杯 中溶 液剩 下 5 mL 左 右时 再加 10.0 mL 混合 酸(5.6)及 几粒 玻 璃珠，盖上表 面皿 冷消化，过夜。再按（8.1.1）处 理后再 准确取 一定 体积溶液再稀 释后（使 溶液 含硒 量0.2 g/mL）测 定，处理好 的待 测试 样溶 液应 在7 日 内测 定。8.1.3 吸取 10 mL 处理好 的待测 试样溶 液 于 15 mL 离心管 中，加 6 mol/mL 盐酸(5.5)2 mL，铁 氰化钾溶 液(5.9)1 mL,混 匀 待测，处理 好的 待测 试样 溶液应 在 7 日内 测定。标准工 作液 的配 制 8.2 分别取0.0 mL,0.1 mL,0.2 mL,0.3 mL,0.4 mL,0.5 mL 硒 标 准工 作液（5.11）于 15 mL 离心 管中 用去离子 水稀释 至 10 mL,再 分别加 6 mol/mL盐酸(5.5)2 mL，铁氰 化钾(5.9)1 mL,混 匀，制 成标 准工作液，此标 准工 作液 配置 后 7 天内 使用。测定 8.3 8.3.1 仪器参 考条 件:负高 压:340 V；灯电 流:100 mA；原 子化温 度:800；炉高:8 mm；载气 流速:DB34/T 814 2023 3 500 mL/min；屏蔽 气流 速:1000 mL/min；测 量方 式:标准曲 线法；读数 方式:峰 面积；延迟时 间:1 s；读数时 间:15 s；加 液时 间:8 s；进 样体 积:2 mL。各实验 室可 根据 自己 的仪 器性能 调整 相应 的参 数。8.3.2 标准工 作液 的测 定：按照 8.3.1 的条 件设 定好 仪器，待炉 温升 高到 设定 温度 后，稳 定 10 min 20min 后开 始测 量。连 续用 标准工 作液（8.2）的 零浓 度管进 样，读 数稳 定之 后，转 入标 准工 作液 测量，绘制标 准曲 线，标准 曲线 的线性 系数 R299.5%，可以进 行试 样的 测定，否 则重新 测定。8.3.3 试样的 测定：绘制 标准曲 线后转 入试样 测定，先测 定试样 空白后，按 照设定 的进样 程序依 次 测定试样 消化 液（8.1.3），测定不 同的 试样 前都 应清 洗进样 器。试样 测定 结果 按 公式（1）计 算。9 结果计 算和 表述 结果计 算 9.1 试样中 硒的 含量 按公 式（1）计算。(1)式中：X 试样 中硒 的含 量，单位为 毫克 每千 克(mg/kg)；c 试样 消化 液测 定浓 度，单位 为纳 克每 毫升(ng/mL)；0c 试样 空白 消化 液测 定 浓度，单位 为纳 克每 毫升(ng/mL)；m 试样 质量(体积)，单 位为克(g)；V 试样 消化 液总 体积，单位为 毫升(mL)；1000 换算 系数；f 高含 量硒 样品 的稀 释倍数，未 稀释 的样 品f 值为 1。结果表 述 9.2 每个试 样平 行测 定两 次，以其算 术平 均值 作为 结果。计算 结果 精确 到 0.001 mg/kg（0.001 mg/L）。10 检测方 法的 灵敏 度、准确 度和精 密度 灵敏度 10.1 本方法 的检 测限 为 3 ng/kg，定 量限 为 10 ng/kg。准确度 10.2 本方法 在 0.01 mg/kg 0.5 mg/kg 添 加浓 度范 围内，回收 率为 80%110%。精密度 10.3 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的 20%。