ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 828 2024 代替DB15/T 828-2015 亚麻籽木 酚素含量 的测定 高效 液相色谱 法 Determination of lignan in selected flax seeds High performance liquid chromatography 2024-08-20 发布 2024-09-20 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 828 2024 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件 替代DB15/T 828-2015 亚 麻品 种选 育 亚麻 籽 中木酚 素含 量的 测定 高 效 液相色 谱法，本文件与DB15/T 828-2015 相 比，除 结构 调整 和编 辑性 改动外，主 要技 术变 化如 下：a)增加了 方法 的定 量限（见 第 1 章）；b)更改了 提取 由回 流提 取更 改为超 声波 提取（见 7.2.1，2015 年 版的5.2.1）；本文件 由内 蒙古 自治 区农 业标准 化技 术委 员会（SAM/TC 20）归 口。本文件 起草 单位：内 蒙古 自治区 农牧 业科 学院、内 蒙古农 业大 学。本文件 主要 起草 人：冯小 慧、乔 慧蕾、张 立华、董 泰音、王雪 娇、庞杰、李 强、李 国银、莎 娜、连海飞、高凤 云、周宇、何 瑞超。本文件 及其 所代 替文 件的 历次版 本发 布情 况为：2015 年首 次发 布为 DB15/T 828-2015；本次为 第一 次修 订。DB15/T 828 2024 1 亚 麻籽木 酚素含量 的测定 高效 液相色 谱 法 1 范围 本文件 规定 了亚 麻籽 木酚 素含量 的高 效液 相色 谱测 定方法。本文件 适用 于亚 麻籽 木酚 素含量 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 原理 试样经 无水 乙醚 脱脂，乙 醇溶液 超声 波加 热提 取，纯化，高效 液相 色谱 仪紫 外检测 器测 定，外标 法定量。5 试剂和 材料 试剂 5.1.1 无水乙 醚（CH3CH2OCH2CH3）。5.1.2 无水乙 醇(CH3CH2OH)。5.1.3 氢氧化 钠（NaOH）。5.1.4 盐酸（HCl）。5.1.5 甲醇（CH3OH）：色 谱纯。注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682 规定的一级水。试剂配 制 5.2.1 60%乙 醇溶 液：取 600 ml 乙醇（5.1.2），用 水定 容 至1000 ml。5.2.2 1.8 mol/L 氢氧 化钠 溶液：准确 称 取 72.00 g 氢氧 化钠（5.1.3），用 水定 容 至1000 ml。5.2.3 甲醇水 溶液（40+60）：取400 ml 甲醇（5.1.5），加 到600 ml 水中，混 匀。标准品 DB15/T 828 2024 2 木酚素（C32H46O17）（CAS 158932-33-3）：纯度 98.0%。标准溶 液配 制 5.4.1 木酚素 标准 储备 液（1500.00 g/mL）：准 确称 取 木酚素 标准 品 15 mg，加 适量甲 醇溶 解并 定容至10 ml，配 制成 浓度 为 1500 g/ml 的 木酚 素 标准储 备液，-20 贮存，有效 期 1 年。5.4.2 木酚素 标准 工作 溶液：分 别准确 吸 取0.50 ml、1.00 ml、2.00 ml、5.00 ml、8.00 ml 木 酚素标准储 备液，用甲醇 水溶 液（5.2.3）定容 至100 ml，工 作曲线 浓度 为7.5 g/ml、15 g/ml、30 g/ml、75 g/ml、120 g/ml，根 据样品 实际 含量 可增 减曲 线点，标准 曲线 临用 现配。材料 5.5.1 有机系 微孔 滤膜：0.45 m。5.5.2 塑料离 心管：50 mL。6 仪器和 设备 液相色 谱仪：配 紫外 检测 器。电子天 平：感 量0.0001 g 和0.01 g。高速离 心机，6000 r/min 转速，配50 mL 离 心管。旋转蒸 发器，配250 mL 茄 形瓶。高速万 能粉 碎机。超声波 发生 器。恒温水 浴振 荡器。电热鼓 风干 燥箱。索氏提 取器。7 分析步 骤 试样制 备 将亚麻 籽用 高速 万能 粉碎 机磨碎，低 温避 光保 存。试样提 取 7.2.1 提取 准确称 取样 品1.00 g 于 滤 纸筒内，置于索 氏提 取器 中，用无 水乙醚 浸 泡 12 h 后，再用 索氏提 取器加热回 流提 取至 脱脂 完全。取出 样品(连 同滤 纸筒)，在室 温通 风条 件下 放 置5 h，在 105 5 下烘 2 h 后，取出，放 入干 燥器 中，冷 却至 室温。打 开滤 纸筒，将样 品置 于50 ml 试管中，加 入15 ml 60%乙醇溶液，在50 条 件下 超声波 提 取 15 min。以 6000 r/min 离心 10 min，取 上清液，向 残渣 中加 入 15 ml 60%乙醇 溶 液，重 复上 述操作 一次，合 并上 清液，待纯 化处 理。同时 做空 白试验。7.2.2 纯化 向提取 液中 加 入1.8 mol/l 氢氧 化钠 溶液10 ml，在40 条件 下碱 解 40 min。用盐 酸（1+1）调pH 至 4 6，过 滤，将滤 液 移入茄 形瓶 中，45 真 空 浓缩至 近干。用 甲醇 水溶 液（40+60）溶 解并 定容至25 ml，可根 据样 品含 量适当 稀释，摇 匀，过 0.45 m 有机 系微 孔滤 膜，待上机 分析。DB15/T 828 2024 3 仪器参 考条 件 7.3.1 色谱柱：C18 柱，柱 长 250 mm，内 径 4.6 mm，粒径5 m，或等 效色 谱柱。7.3.2 流动相：甲 醇+水=40+60。7.3.3 流速：1.0 mL/min。7.3.4 检测波 长：290 nm。7.3.5 进样量：20 L。7.3.6 柱温：35。标准曲 线的 制备 将混合 标准 系列 工作 溶液 浓度由 低到 高依 次注 入液 相色谱 仪中，测 定相 应的 峰面积，以 混合 标准 系列工作 溶液 的质 量浓 度为 横坐标，以 峰面 积为 纵坐 标，绘 制标 准曲 线。标准 谱图参 见附 录 A 中图 A.1。测定 将试样 溶液 注入 液相 色谱 仪中，保留 时间 定性，变 化范围 应在 2.5%，峰面 积定量，待 测液 浓度 应在曲线 范围 内。8 分析结 果的 表述 试样中 木酚 素的 含量 按下 式计算：=（0）10 6 100（1）式中：X 样品 中木 酚素 的含 量，单位 为克 每百 克（g/100 g）；C 样液 中木 酚素 的检 出 浓度，单位 为微 克每 毫升（g/mL）；C0 空白 溶液 中木 酚素 的检出 浓度，单 位为 微克 每毫升（g/ml）；V 定容 体积，单 位为 毫 升（ml）；F 稀释 倍数；10-6 含 量单 位 g 变为g；m 称样 量，单位 为克（g）。注：计算结果保留3 位有效数字。9 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值 的10%。10 其他 按取样 量1.00 g，定容 至200 ml 时，木 酚素 的检 出 限均 为0.01 g/100 g，定 量限均 为0.03 g/100 g。DB15/T 828 2024 4 A A 附录A（资料 性）木酚素 标样、样 品色 谱图 木酚素 标样、样 品色 谱图 见图A.1。图A.1 木酚 素标 样、样品 色谱 图