ICS 65.020.20 CCS B 05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 3532 2024 甜菜单胚 雄性不 育 系及保持 系鉴定规 程 Code of practice for identifying of monogerm male sterile line and maintainer line in sugar beet 2024-06-28 发布 2024-07-28 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 3532 2024 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本 文件 由内 蒙古 自治 区农 牧厅提 出。本 文件 由内 蒙古 自 治 区农 业标准 化技 术委 员会(SAM/TC 20)归口。本 文件 起草 单位：内 蒙古 自治区 农牧 业科 学院、托 克托县 古城 镇综 合保 障和 技术推 广中 心。本 文件 主要起 草人：付增 娟、张 自强、鄂圆 圆、赵 尚敏、王良、张惠 忠、张 辉、韩 平安、张必 周、李晓东、郑 文哲、张 立华、吕艳 霞、肖强、周 晓华、孙梦 媛、索宁 宁、张国 雄。DB15/T 3532 2024 1 甜 菜单胚 雄性不育 系及保 持系表型 鉴定 规程 1 范围 本文件 规定 了甜 菜单 胚雄 性不育 系及 保持 系鉴 定的 鉴定圃 要求、鉴 定要 求、鉴 定方法 与评 价指 标 等技术要 点。本文件 适用 于二 倍体 甜菜 单胚雄 性不 育系 及保 持系 花期育 性、胚数 性、表型 的鉴定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 19176 糖用 甜菜 种子 DB15/T 2895 糖用 甜菜 单 胚雄性 不育 杂交 种生 产技 术规程 3 术语和 定义 DB15/T 2895 界 定的 以及 下 列术语 和定 义适 用于 本文 件。单胚种 genetic monogerm seed 通过遗 传获 得的 种球 内只 含有一 个种 胚的 种子。来源:DB15/T 2895-2023，3.1 雄性不 育系 male sterile line 雌雄同 株植物 中，雄蕊发 育不正 常，不 能产 生或者 释放遗 传上可 育的 花粉，但它的 雌蕊发 育正 常，能接受 正常 花粉 而授 精结 实，并 能将 雄性 不育 性遗 传给后 代的 植物 品系。保持系 O type line 当作为 父本 与不 育系 杂交 时，能 使其F1 保 持雄 性不 育性的 甜菜 品系。甜菜二 倍体 diploid sugar beet 甜菜细 胞核 内有 两组 染色 体称为 二倍 体或 双倍 体（2n=2X=18）。DB15/T 3532 2024 2 开花期 duration of flowering 鉴定群 体开 花种 株数 达到75%的日 期。花粉败 育 pollen abortion 植株 花 药中 无花 粉或 产生 的花粉 不能 正常 发育 而失 去活力 的现 象。花粉败 育率 pollen abortion rate 不育花 粉数 占总 花粉 数的 百分比。镜检 microscopic examination 通过显 微镜 观察 花粉 待检 标本育 性的 检查 方式。4 缩略语 下列缩 略语 适用 于本 文件。TTC：2，3，5 三 苯基 氯 化四氮 唑，一种 脂溶 性光 敏感复 合物，可 作为 一种 氧化还 原指 示剂，可用来检 测花 粉、种子 等活 力(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride)5 鉴定圃 要求 栽植环 境 鉴定现 场生 态环 境和 栽培 条件应 与生 产条 件相 近，周围环 境10 km 不能 有其 它 甜菜花 粉污 染源。栽植时 间 甜菜母 根栽 植适 宜条 件是 土壤表 土解 冻25 cm 或5 cm 土层处 平均 地温 达4 5 为 宜。在内 蒙古中西部 地区 甜菜 母根 栽植 时间一 般在3月 底或4 月上 中旬，寒冷 地区 栽植 时间 可延迟 至4 月底。栽植株 数 5.3.1 不育系 除未抽 薹无 效株 外，待鉴 定不育 系株 数不 少于60株。5.3.2 保持系 除未抽 薹无 效株 外，待鉴 定保持 系株 数不 少于60株。6 鉴定要 求 DB15/T 3532 2024 3 鉴定人 员 从事作 物遗 传育 种、分子 育种、种子 管理、种 子检 验等专 业人 员3 名以 上。鉴定时 期 6.2.1 花期 在甜 菜 种株 生长60 d 左右，甜菜 种株 刚要 开花 前进 行育性、胚 数性 观察 鉴定，盛花 期进 行花 粉量 和种株株 型鉴 定。6.2.2 种子成 熟期 进行不 育率、可 育率、单 胚率、发芽 率鉴 定。种子 质量满 足GB 19176 要 求。7 鉴定方 法与 评价 指标 种株表 型一 致性 鉴定 7.1.1 现场鉴 定 以鉴定 种株 群体 为观 测对 象，鉴 定性 状包 括株 高、株型、叶色、结 实密 度等，根据 主枝 和侧 枝的 多少确定 种株 株型。单茎型：种 株仅 有一 个明 显的主 枝，侧枝 不发 达，在主枝 上生 有第 一次 分枝，第一 次分 枝再 生第 二次分枝。且 要求 单茎 型种 株占总 抽薹 种株70%以上。多茎型：种 株具 有多 数健 壮的侧 枝，主枝 不明 显或 没有主 枝，总分 枝数 量多。且要 求多 茎型 种株 占总抽薹 种株70%以上。混合型：种株 具有 发育 健 壮的主 枝和 相当 数量 的侧 枝，并有 密集 的第 一次 和 第二次 分枝。且要 求单茎型种 株占 总抽 薹种 株70%以下或 多茎 型种 株占 总抽 薹种株70%以下。7.1.2 公式结 果计 算 表型一 致性 计算 按公 式（1）。100=TTZZ ZC(1)式中：C 表型 一致 性，单位 为 百分比（%）；ZT 观察样 本总 数，单 位为株；Z 杂株 数，单位 为株。计算结 果精 确到 小数 点后 一位 7.1.3 评价指 标 种株表 型一 致性 90.0%。花粉活 力鉴 定 7.2.1 田间取 样 在花期 的晴 天8:00 10:00 进行花 粉取 样。DB15/T 3532 2024 4 7.2.2 镜检 染色制 片：每 株取2 3 个 花朵分 别制 片，把 适量 的 成熟花 粉放 在载 玻片 之上，每 个样 品添 加1 2滴 0.%TTC 溶 液，盖上 盖玻 片，在37 黑暗 条件 下培 养15 min。红色越 深表 明活 性越 强，不能染 色的 花粉 为不 育花 粉。镜检：制片 在低 倍镜 下观 察，每 片取5个 视野，共 统 计100 粒，计算 花粉 的活 力 百分率。7.2.3 评价指 标 雄性不 育系 的花 粉活 力 10.0%。同型保 持系 的花 粉活 力90.0%。花粉量 鉴定 7.3.1 鉴定内 容 在甜菜 种株 进入 花期 后，以整个 鉴定 群体 种株 为观 测鉴定 对象，采 用目 测的 方法观 察甜 菜种 株开 花期间雄 蕊的 发育 情况 以及 当日开 放的 花药 纵裂、花 粉散落 的程 度。7.3.2 评价指 标 4级花 粉量 评价 指标 见表1。表1 甜菜花 粉量 级别 与花 粉量 评价表 花粉育 性鉴 定 7.4.1 育性表 型鉴 定 甜菜雄 性不 育系，雄 蕊花 药色浅、空 瘪、花粉 没有 生活力，而 雌蕊 发育 正常；保持 系的 花药 大而 饱满，颜 色发 黄，花粉 生活 力强。甜菜花 粉育性 鉴定 一般按 完全不 育型(W)、半 不育 型(G)、半不 育II型(Ys)、可育型（Yn)等四 种类型进 行鉴 别。完全不 育型(W)：花 药色 泽 为白色 或绿 色；花药 不开 裂；花 粉败 育，花粉 败育 率为100%。半不育 型(G)：花 药色 泽 为淡黄 色；花药 不开 裂；花粉无 生活 力。半不育II型(Ys)：花 药色 泽为橙 色；花药 基本 不开 裂；花 粉粒 有花 粉膜，可 以看见 花粉 孔，虽然 花粉粒存 在较 多但 其直 径仅 为正常 的2/3，无授 精能 力；花粉 无生 活力。可育型（Yn)：花药 色泽 为 黄色；花药 开裂；花 粉粒 正常；花粉 生活 力强。7.4.2 公式结 果计 算 不育率 计算 按公 式（2）。花粉量级别 花粉量多少 花药颜色 花药状态 0 级 无 白色或翠绿色 花药干瘪不开裂，无花粉散落 1 级 少 淡黄色 花药开后有很少花粉散落 2 级 中 黄色 花药裂开后有相当一部分花粉散落 3 级 多 黄色 花药裂开后有大量成熟的花粉散落 DB15/T 3532 2024 5 100=TTKK KB(2)式中：B 不育 率，单位 为百 分 比（%）；KT 鉴定 样本 总数，单 位为株；K 可育 株数，单 位为 株。计算结 果精 确到 小数 点后 一位 7.4.3 评价指 标 雄性不 育系 的不 育率 90.0%。同型保 持系 的不 育率=0。胚数性 鉴定 7.5.1 鉴定内 容 以种株 成熟 收获 的所 有种 子为鉴 定对 象，种子 不应 经过任 何机 械或 药物 处理，鉴定 种子 量要 控制 在500 g 以上，观 测甜 菜种 球 内种胚 的数 量。单胚种：种 球内 只含 有1 个 种胚的 种子。双胚种：种 球内 含有2个 种 胚的种 子。多胚种：种 球内 含有3个或3个以 上种 胚的 种子。7.5.2 公式结 果计 算 在检测 的样 品中 随机 取样，4次 重复，每 个重 复200 粒种子，观 测鉴 定单 胚型 种子的 数量。单胚率 计算 按公 式（3）。100200=NM(3)式中：M 单胚 率，单位 为百 分 比（%）；N 单胚 种数，单 位为 粒；200 鉴 定样 本总 数，单 位为粒。计算结 果精 确到 小数 点后 一位 7.5.3 评价指 标 单胚 雄 性不 育系 的单 胚率 90.0%。单胚同 型保 持系 的单 胚率 90.0%。