ICS 65.150 CCS B50 43 湖南省地方标准 DB 43/T 27932023 渔业水体底泥中氯硝柳胺的测定 液相色谱-串联质谱同位素内标法 Determination of niclosamide in sediment from fishery waters by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry isotope internal standard method 2023-11-09 发布 2024-02-09 实施 湖南省市场监督管理局 发 布 DB 43/T 27932023 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 方法 原理.1 5 试 剂与 材料.1 6 仪 器与 设备.2 7 样品.2 8 测定 步骤.3 9 结 果计 算与 表达.4 10 方法 的灵 敏度、准 确度、精 密度.4 附录A（资 料性）氯硝 柳胺 选择 反应 监测（SRM)色 谱图.6 DB 43/T 27932023 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.12020 标准 化工 作导则 第1 部 分：标准 化文 件的 结构 和起 草规 则的 规定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能 涉及 专利。本 文件的 发布 机构 不承 担识 别专 利的 责任。本文件 由湖 南省 农业 农村 厅提 出。本文件 由湖 南省 农业 标准 化技 术委 员会 归口。本文件 起草 单位：湖南 省水 产科 学研 究所、农业农 村部 渔业 产品质 量监 督检 验测 试中心（长沙）、衡阳市 畜牧 水产 事务 中心。本文件 主要 起草 人：李 小玲、索 纹纹、陈湘 艺、张 光洁、刘 伶俐、杨霄、万 译文、肖维、曾春 芳、何咏、谢仲 桂、黄向 荣、黄华 伟、洪波、尹 升福、谢玉 昆、雷琴。DB 43/T 27932023 1 渔业水体底泥中氯硝柳胺的测定 液相色谱-串联质谱同位素内标法 1 范围 本文件 规定 了渔 业水 体底 泥中 氯硝 柳胺 的液 相色谱-串 联质 谱同 位素 内标 法测 定方 法。本文件 适用 于渔 业水 体底 泥中 氯硝 柳胺 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的 规范 性引 用而 构成本 文件 必不 可少 的条 款。其 中，注日 期的 引用文 件，仅 该 日期 对应 的版 本适 用于 本文 件；不注 日期 的 引用 文件，其 最新 版本（包 括所 有的 修改 单）适用 于本文件。GB/T 6682 分析 实验 室用 水规 格和 试验 方法 GB 17378.5 海洋 监测 规范 第5 部分：沉 积 物分析 HJ 494 水质 采样 技术 指导 底部 沉积 物采集 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和 定义。4 方法原 理 底 泥 中的 氯硝 柳胺，经氨 化乙 腈提 取，C18 吸附 剂 净化，用带 有电 喷雾 离子 源的 液相 色谱 串 联质 谱仪负离 子模 式测 定，内标 法定 量。5 试剂与 材料 除另有 规定 外，所有 试剂 均为 分析 纯；水应 为符合GB/T 6682规 定的 一级 水。试剂 5.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱 纯。5.1.2 氨水（NH3H2O）。溶液配 制 5.2.1 2%氨化 乙腈 溶液：取 乙腈70 mL，加入2 mL 的氨水，用 乙腈 稀释 定容 至100 mL。5.2.2 70%乙 腈水 溶液：取 乙腈 70 mL，加入 30 mL 水，混 匀。标准品 5.3.1 氯硝柳 胺（Niclosamide，C13H8Cl2N2O4，CAS 号：50-65-7），含量 96.0%。5.3.2 氯硝柳 胺-13C6-水 合 物（Niclosamide-13C6-hydrate，13C6C7H8Cl2N2O4，CAS 号：1325808-64-7），含量99.0%。DB 43/T 27932023 2 标准溶 液 5.4.1 标准储 备溶 液（100 g/mL）：取 氯硝 柳胺标 准 品约10 mg，精 密称 定，于100 mL 棕色容 量 瓶中，加 乙腈 10 mL，超 声溶 解后 恢复 至室 温，用乙 腈稀 释定 容至 刻度，配制 成浓 度为100 g/mL 的标 准储备溶 液。-18 避 光保 存，有效 期3 个月。5.4.2 内标储 备溶 液（100 g/mL）：取 氯硝 柳胺-13C6-水 合物 标准 品约 10 mg，精 密称 定，于 100 mL棕色容量瓶中，加乙腈 10 mL，超声溶解后恢复至室温，用乙腈稀释定容至刻度，配制成浓度为100 g/mL的内标 储备 溶液。-18 避光 保存，有 效期3 个月。5.4.3 标准中 间溶 液（1.0 g/mL）：精密 量取 标准 储备溶 液 1 mL，于 100 mL 棕色 容量 瓶中，用乙腈稀释定 容至 刻度，配 制成 浓度 为1.0 g/mL 标准中 间溶 液。-18 避 光保 存，有效 期30 天。5.4.4 混合标 准工 作溶 液：根 据需 要，临用 时吸取 一定量 的氯 硝柳 胺标准 中间 溶液 和氯 硝柳胺 内标 储备溶液，用70%乙腈 水溶 液稀 释配 制成 适当 系列浓 度的 混合 标准 工作 溶液，每毫 升该 混 合标准 工作 溶液含有氯 硝柳 胺-13C6-水合 物10 ng。4 避光保 存，有 效期 7 天。5.4.5 内标工作溶液（0.1 g/mL）：精密量取适量氯硝柳胺内标储备溶液，用乙腈配制成0.1 g/mL 内标工作 溶液。4避 光保 存，有效 期15 天。材料 5.5.1 C18 吸附 剂：粒径40 m 60 m，或相 当者。5.5.2 微孔有 机滤 膜：0.22 m。6 仪器与 设备 液相色 谱-串联 质谱 仪，配有 电喷 雾离 子源。分析天 平：感量0.01 g 和感 量 0.0001 g。冷冻干 燥机。涡旋混 合器。高速离 心机：转 速8000 r/min。超声波 清洗 器。旋转蒸 发仪。7 样品 样品采 集 样品采 集应 符合HJ 494 的要 求。试样制 备 将 采 集的 底泥 样品（一 般不 少于500 g）混匀 后用四 分法 缩分 至约100 g，将 样品 冷冻 干燥后，剔除石块和 植物 体等 异物，用 研钵 研磨 后过60 目（孔径0.25 mm）网 筛，混匀 后装 入样 品袋 内，在0 4 避光保 存。试样含 水率 测定 应符合GB 17378.5 的要 求。DB 43/T 27932023 3 空白试 样制 备 选取不 含氯 硝柳 胺的 底泥 样品，按 照7.2的 方法制 备。8 测定步 骤 样品前 处理 称取5 g（精确 至0.02 g）试 样于50 mL 具塞 离 心管 中，加 入100 L氯硝 柳胺 内标 工作溶 液，加入2%氨化 乙腈 溶液20 mL，涡 旋混 合1 min，超声 提 取10 min，6000 r/min离心8 min，取 上清液 转移 至茄形瓶中，于45 下 减压 浓缩 至近 干，加入1.00 mL 70%乙腈 水溶 液涡 旋振 荡溶 解残 留物，再 加入C18 吸附剂200 mg涡旋 振荡30 s，8000 r/min离心5 min，取 上清 液过0.22 m 微孔 有机 滤膜 后，供 液 相色 谱仪-串联 质谱 测定。测定 8.2.1 液相色 谱参 考条 件 液相色 谱参 考条 件如 下：a)色谱柱：C18(1502.1 mm，粒 径3 m)，或 相当者；b)流动相：A 为乙 腈，B 为 水，梯度 洗脱 条件见 表1；c)进样量：10 L；d)流速：0.30 mL/min；e)柱温：35。表1 流动相 梯度 洗脱 条件 时间 min A%B%0 50 50 2.0 50 50 3.0 90 10 6.5 90 10 6.51 50 50 7.50 50 50 8.2.2 质谱参 考条 件 质谱参 考条 件如 下：a)离子源：电 喷雾 离子 源；b)扫描方 式：负离 子扫 描；c)检测方 式：选择 反应 监测（SRM）；d)喷雾电 压：-3.0 kV；e)离子传 输毛 细管 温度：300；f)选择反 应监 测定 性母 离子、子 离子 和碰 撞能 量见表2。DB 43/T 27932023 4 表2 母离子、子 离子 和碰 撞能 量 目标化合物 母离子 m/z 子离子 m/z 碰撞能量 eV 氯硝柳胺 324.9 289.0a 19 171.1 28 氯硝柳胺-13C6-水合物 331.0 294.9 19 a 定量离子。8.2.3 定性测 定 在 相同 测试 条件 下，试样 中待 测物 的保 留时 间与 标准 工作 液中 待测 物的 保留 时间 一致，偏 差在2.5%以内；且试样中待测 物定性离子 的相对丰 度与浓度相当 的标准溶液 对应的定性离子的 相对丰度一致，其允 许最 大偏 差应 符合 表3的要 求。表3 定性确 证时 相对 离子 丰度 的最 大允 许偏 差 相对离子丰度K K50%20%K 50%10%K 20%K 10%允许的相对偏差 20%25%30%50%8.2.4 定量测 定 按8.2.1和8.2.2设 置仪 器条 件，将标 准工 作溶 液、试 样溶 液、空白 试样 溶液 等体 积进 样测 定，内标法 定 量。标准 工作 溶液 和试 样中 目标 物的 响应 值 均应 在仪 器检 测线 性范 围内。氯硝 柳胺的 选 择反 应监 测（SRM）色谱图 参见 附录A，氯 硝柳 胺标 准溶液 的 选择 反应 监测（SRM）色 谱图见 附录A中图A.1，空白试样的选 择反 应监 测（SRM）色 谱图见 附录A中图A.2，空白试 样中 添加 氯硝 柳胺标 准溶 液 的选择 反应 监测（SRM）色 谱图 见附 录A 中图A.3。空白实 验 按照与 上述 测定 步骤 相同 的条 件进 行空 白试 样（见7.4）的 测定。9 结果计 算与 表达 试样中 待测 物含 量按 下列 公式 计算。计 算结 果须扣 除空 白值，保 留两 位有 效数 字。=(1)(1)式中：试样 中待 测物 的含 量，单位 为微 克每 千克（g/kg）；从 标准 工作 曲线 得到 的待 测物 溶液 浓度，单位 为微 克每 升（g/L）；试样 最终 定容 体积，单 位为 毫升（mL）；试样 质量，单 位为 克（g）；试样 含水 率，单位 为质 量分 数（%）。10 方法的 灵敏 度、准确 度、精密 度 DB 43/T 27932023 5 灵敏度 本方法 氯硝 柳胺 的检 出限 为0.2 g/kg；定量 限 为0.5 g/kg。准确度 本方法 添加 浓度 为0.5 g/kg 20 g/kg时回 收 率为70%120%。精密度 本方法 的批 内相 对标 准偏 差10%，批 间相对 标 准偏 差15%。DB 43/T 27932023 6 A A 附录A（资料 性）氯硝柳 胺选 择反 应监 测（SRM)色 谱图 图A.1 氯硝 柳胺 标准 溶液（5.00 g/L）的 选择反 应 监测（SRM）色 谱图 图A.2 空白 泥样 试样 的选 择反 应监 测（SRM）色 谱图 DB 43/T 27932023 7 图A.3 空白 试样 添加 样品（1 g/kg）的选 择反应 监 测（SRM）色 谱图