ICS 11.220 B 41 备案号：47057-2015 DB63 青海省地方标准 DB63/T 13912015 家畜棘球蚴病 流行病学调查及监测技术规范 2015-06-30发布 2015-09-30实施青海省质量技术监督局 发布 DB63/T 13912015 1 前 言 本规范的编写符合GB/T 1.1-2009给出的规则。本规范由青海省农牧厅提出并归口。本规范由青海省动物疫病预防控制中心起草。本规范主要起草人：李静、沈艳丽、赵全邦、蔡金山、马睿麟、胡广卫、马占全、王晓润、郭春兰、张晓英、曾占豪、保万秀。DB63/T 13912015 2 家畜棘球蚴病流行病学调查及监测技术规范 1 范围 本规范规定了家畜棘球蚴病流行病学调查的内容、方法及棘球蚴病的监测等技术要求。本规范适用于家畜棘球蚴病流行病学调查和监测。2 规范性引用文件 下列文件对于本规范的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。NY/T 1466 动物棘球蚴病诊断技术 DB63/T 457 棘球蚴病防治技术 3 定义和术语 下列术语和定义适用于本标准。3.1 棘球蚴病 由寄生于犬科动物小肠的棘球绦虫中绦期幼虫-棘球蚴感染中间宿主而引起的一种人畜共患病，又名包虫病。3.2 流行病学调查 对疫病或其他群发性疾病的发生、频率、分布、发展过程、原因及自然和社会条件等相关影响因素进行的系统调查，以查明疫病发展趋向和规律，评估防治效果。3.3 现场调查 兽医技术人员对所报告的动物疫情的范围、发病动物、人间患病情况、防治情况和自然及社会因素进行调查。3.4 棘球绦虫 成虫寄生于终末宿主的小肠段，终末宿主是犬、狼等犬科的食肉动物，中间宿主是羊、牛等草食动物和人。主要以幼虫的形式危害中间宿主，引起严重的棘球蚴病。DB63/T 13912015 3 3.5 监测 对某种疾病的发生、流行、分布及相关因素进行系统的长时间的观察与检测，以把握该疾病的发生发展趋势。3.6 阳性率 在科学实验或检测当中，出现阳性结果的百分率叫做阳性率。3.7 感染率 特定时间内，某疫病感染动物的总数在被调查（检查）动物群体样本中所占的比例。3.8 感染强度 是表示宿主遭受某种寄生虫感染数量大小的一个标志，有最小值和最大值。4 棘球蚴病流行病学调查 4.1 回顾性调查 4.1.1 家畜感染情况调查 收集近五年内调查地区家畜感染棘球蚴病的资料，并填写棘球蚴病流行情况回顾性调查表，见附录A。4.1.2 犬感染情况调查 收集近五年内调查地区犬棘球绦虫感染情况的资料，并填写棘球蚴病流行情况回顾性调查表，参见附录A。4.1.3 自然环境与社会状况调查 以调查问卷形式为主填写 棘球蚴病基本情况调查表，见附录B,收集近五年内调查地区住房条件、人口状况，家犬数量、拴养与定期驱虫情况，家畜饲养数量，家畜屠宰管理与屠宰卫生状况、家畜驱虫情况、人对棘球蚴病认识情况及棘球蚴病防治情况等，具体操作按DB63/T 457的要求进行。4.2 现场调查 4.2.1 准备 4.2.1.1 人员准备 DB63/T 13912015 4 主要由流行病学、实验室、临床等方面的专业技术人员组成调查组，调查组应明确分工，并指定负责人，组织协调整个调查组在现场的调查工作。调查组应该明确调查的目的和任务，做好现场调查的准备。4.2.1.2 物资准备 调查工作组在现场调查前，应准备必要的资料和物品，至少应包括：a）现场调查表若干份；b）采样器械和物品；c）照相机；d）个人防护设备，包括防护服、鞋、手套、口罩、帽子等；e）现场联系资料，包括联系人及联系方式。4.2.1.3 人员防护及对环境污染的处理 人员防护及对环境污染的处理，应符合以下要求：a)参与调查的人员必须注意个人防护，防护服、胶靴、手套、帽子、口罩等检查用品用后严格高压消毒处理或焚烧处理；b)将病犬粪便、内脏、染病家畜内脏采取无害化处理；c)粪便收集完后，将犬继续固定12小时，排出的粪便深埋。所有地面上粪便清除干净，扔入废坑，撒入石灰，并用土埋实；d)所有实验用具用甲醛或者焚烧处理；e)实验区地面进行消毒处理；f)所有参与工作的人员用肥皂和清水反复洗手。g)要严密注视实验的每一个环节，发现问题及时处理,严禁外人进入场地，消毒必须彻底。4.2.2 调查内容 4.2.2.1 家畜感染情况调查 主要调查区域内家畜棘球蚴病感染率、流行情况，感染棘球蚴病的类型及防疫现状。4.2.2.2 犬感染情况调查 主要调查区域内犬棘球绦虫感染率、流行情况及防疫现状和犬的管理。4.2.2.3 自然与社会因素调查 主要调查区域内自然地理、气候；动物群体种类、数量、性别、年龄、免疫、分布、生活习惯，及地区区划（牧区、半农半牧区、农区）、畜牧制度、饲养管理、人口资料等环境条件的调查。4.2.3 调查方法 4.2.3.1 家畜棘球蚴病调查 4.2.3.1.1 采样数 调查地区采集调查样本数，牛 100头，羊 150只，生猪养殖集中地区调查猪 50 头。4.2.3.1.2 包囊检查 DB63/T 13912015 5 屠宰高峰期，在屠宰场检查家畜肝、肺包囊。检查每叶肝、肺的表面，触摸脏器实质内有无囊状物或硬结，对发现的囊状物或硬结进行剖检和鉴别，记录棘球蚴囊的数量，计算感染率和感染强度。4.2.3.1.3 血清学检查 按附录C操作规程进行，计算阳性率并统计。4.2.3.2 犬棘球绦虫调查 4.2.3.2.1 采样数 根据家养犬和流浪犬（野犬），按 7:3 的比例进行调查。调查 1 岁犬和成年犬各占二分之一。每年4 月份6 月份，在调查地区随机抽取 5 个乡乡镇，每乡镇随机抽取 1 个行政村，每个村抽取 20 户养犬户，每户取 1 份犬粪样，共 20 份，不足 20 份者在临近村补足。4.2.3.2.2 犬粪抗原检测 按附录D操作规程进行，通过犬粪抗原检测（ELISA）方法调查犬棘球绦虫阳性率并统计。5 调查总结与报告 调查结束后，及时撰写回顾性调查和现场调查的总结报告。调查报告至少应该包括以下几个部分：a)调查的基本情况。b)分析评估棘球蚴病损失，研究分析流行风险因子。c)评估家畜棘球蚴病引致的公共卫生风险。d)分析和总结。根据回顾性调查和现场调查获得的信息，分析提出具体的、有针对性的防控措施，并提出意见和建议。6 棘球蚴病监测 6.1 监测对象 监测对象包括中间宿主家畜感染棘球蚴病，以及终末宿主犬感染棘球绦虫的监测。6.2 监测频次 根据棘球蚴病的生活史、流行特点、监测目的等因素合理安排，每年进行一次。6.3 监测内容 6.3.1 家畜棘球蚴病监测 6.3.1.1 屠宰现场监测 选择监测地区屠宰季节的1至2个屠宰场进行监测，家畜棘球蚴病监测数量按4.2.3.1.1的规定执行，调查步骤按附录E进行，并填写家畜棘球蚴病调查登记表，格式参见附录F。DB63/T 13912015 6 6.3.1.2 血清学监测 采集监测地区家畜的血清，采集血清时了解该地区疫苗注射和驱虫情况，应用ELISA方法进行家畜棘球蚴病监测，具体操作按NY/T 1466的要求进行。6.3.2 犬感染棘球绦虫监测 6.3.2.1 氢溴酸槟榔碱泻下法检查犬棘球绦虫 在监测地区选择犬，按附录G进行犬棘球绦虫感染情况的监测，并填写犬棘球绦虫感染调查统计表见附录H。6.3.2.2 棘球绦虫犬粪抗原检查 在监测地区采集犬粪，犬棘球绦虫监测数量按4.2.3.2.1的规定执行，并填写犬粪样及户主信息登记表见附录I。6.4 监测方法 6.4.1 中间宿主的监测方法 6.4.1.1 监测范围 适用于家畜的监测，如牛、羊、猪等。6.4.1.2 剖检法 在监测地区根据附录E进行操作，对屠宰的中间宿主各脏器采用肉眼观察和仔细触摸的方法确定棘球蚴病囊肿，病变脏器带回实验室解剖观察并记录囊肿的大小、数量、部位及性质等。6.4.1.3 酶联免疫吸附试验 在监测地区采集中间宿主血清，根据附录C进行操作，并记录结果。6.4.2 终末宿主的监测方法 6.4.2.1 监测范围 适用于犬科动物的监测。6.4.2.2 氢溴酸槟榔碱泻下法 在监测地区选择犬，投喂氢溴酸槟榔碱，等待30分钟60分钟，犬泻下绦虫，检查虫体，收集虫体，统计结果。具体按附录G操作。6.4.2.3 剖检法 在监测地区选择未驱虫犬，解剖，取小肠，用肉眼观察方法检查虫体，沉淀法收集虫体，统计结果。6.4.2.4 棘球绦虫粪抗原-ELISA法 在监测地区采集犬粪，采集的犬粪必须了解犬的驱虫情况。将犬粪冷冻处理或高温处理后，具体按附录D进行监测,统计结果。6.5 统计分析 DB63/T 13912015 7 包括棘球蚴病阳性率、感染率、种群年龄结构、种群性别等。7 监测数据的整理与上报 监测调查的数据在进行统计分析后必须进行必要的整理与分析，总结中包含预测预报部分，根据种群年龄结构以及气候、环境、生活史等综合因素分析预测发生的高峰期。归纳总结成报告及时反馈给相关部门。DB63/T 13912015 8 A A 附 录 A（规范性附录）棘球蚴病流行情况回顾性调查表 表A.1 给出了棘球蚴流行情况回顾性调查的填写要素。表 A.1 棘球蚴病流行情况回顾性调查 省 地区（市）县（市）牧区 农区 半农办牧区 年度：乡镇发病率（%）：村/场发病率（%）：户发病率（%）：内容 种类 饲养量头(只)发病数 检测方法/检测阳性率（%）免疫数 疫苗驱虫治疗数 驱虫药物 手术治疗率（%）牛 羊 猪 犬 DB63/T 13912015 9 B B 附 录 B（规范性附录）棘球蚴病基本情况调查表 表B.1 棘球蚴病基本情况调查 1 村基本情况调查 1.1 调查对象：省（自治区）市 县 乡、镇（场）村 1.2 村户数 其中：农业户 牧业户 半农半牧户 1.3包虫病病人：户数：；人数：；确诊医院：；手术次数：1.4家畜饲养数量：牛 头 其中：母畜 公畜；0-24月龄 羊 只 其中：母畜 公畜；0-12月龄 1.5家畜饲养方式：圈养 放养 其他请填写具体数量，圈养，放养 2 家畜来源及其淘汰情况 自繁自养 从外购入 部分自繁、部分从外购入 2.1 如果购入，其来源地 2.2 家畜淘汰原因 发生传染病 发生代谢病 老、弱 当年羔羊出栏 其他 2.3 每年大概淘汰家畜数量 头（只）；年龄段 岁 3 家畜预防性驱虫或用药 否 是，请列出药物种类 4家畜免疫情况 否 是，请列出疫苗名称 5 牲畜屠宰情况 自宰 自宰数量 定点屠宰点 过去五年曾见过家畜包虫病 患病内脏处理 6 患病畜内脏处理情况 直接掩埋 无害化处理后掩埋 出售 自己食用或出售其肉品 7 本县是否有村级防疫人员 有 没有 8 家牧犬饲养情况 8.1 品种：；数量：；8.2 用途：护院，数量 条；放牧，数量 条；宠物，数量 条；出售，数量 条。8.3 饲养方式 拴养，数量 条；散养，数量 条。8.4 驱虫情况 否，数量 条；1次/年,数量 条；2次/年，数量 条；2次以上/年，数量 条。8.5 犬粪便处理：掩埋，数量 条；乱扔，数量 条；随处，数量 条。9 被调查人家庭人患包虫病情况 家庭人口；发病人数：；确诊医院：；手术次数：10 被调查人包虫病知晓情况 通过什么传播途径 动物能否传播给人 家犬如何驱虫 病畜内脏如何处理 被调查人姓名：电话：调 查 人姓名：电话：DB63/T 13912015 10 附 录 C（规范性附录）家畜棘球蚴病 ELISA监测方法 C.1材料 C.1.1 采集调查地区家畜血清，根据年龄分配比例采集。C.1.2 96孔酶标反应板、酶联免疫检测仪、微量加样器、恒温箱 C.2方法 C.2.1 编号 将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照两孔，阳性对照两孔，空白对照1孔。（空白对照不加样品机酶标试剂）C.2.2加样 分别在阴、阳性对照空中加入阴性对照、阳性对照50 l.然后加入待测样品10 l，轻轻晃动均匀。C.2.3温育 用封板膜封板后置37 温育30分钟。C.2.4配液 将30倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600 ml后备用。C.2.5洗涤 小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。C.2.6加酶 每孔加酶标试剂50 l，空白孔除外。C.2.7温育 用封板膜封板后置37 温育30分钟。C.2.8洗涤 小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。C.2.9显色 每孔县加入显色剂A50 l，再加入显色剂B50 l，轻轻震荡均匀，37避光显色15分钟。C.2.10终止 每孔加终止液50 l，终止反应。C.2.11测定 以空白孔调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15分钟内进行。DB63/T 13912015 11 C C 附 录 D（规范性附录）犬粪抗原（ELISA）监测方法 D.1 材料 D.1.1采集被检犬粪进行编号。D.1.2试剂 包虫抗体检测试剂盒、酶结合物、洗涤剂、样本稀释液、底物、显色剂、阳性对照品、阴性对照品、终止液,均由新疆牧科所提供。D.1.3器械 反应板、微量加样器、微量振荡器、恒温培养箱、加样槽。D.1.4在当地采集1岁以上当地成年犬（小型宠物犬除外）新鲜粪便2克每条，置带盖50ml尖底塑料离心管中，-20 保存。填写犬粪样及其户主相关信息登记表。D.2方法 D.2.1样品的处理：灭活样品-70，冻存一周以上；或者70 干烤12小时（注意用电安全）。D.2.2称量样品。D.2.3PBST稀释样品（按质量比1:1）。D.2.4离心（静止过夜），取上清，检测备用，使用前将试剂盒室温避光解冻，取出酶标板，在干净的纱布上轻拍几下，除去解冻的水汽，方可使用，其它试剂4 保存备用。D.2.5 4孔加入标准阳性粪抗原，100微升每孔，4孔加入标准阴性粪抗原，剩余孔先加入样品稀释液8微升每孔，然后加入检测样品上清，20微升每孔，轻轻吹打混合均匀。详细记录检测样品信息（包括编号、日期等），加完样品后，贴上PVC膜，37 密闭孵育30 min。D.2.6配制洗涤工作液：用去离子水或双蒸水将浓缩洗涤液K做10倍稀释，调PH 7.0-7.4，定溶至500 ml。D.2.7将酶标板拍干，再用洗涤工作液洗涤酶标板，300微升每孔，洗涤3次，拍干。D.2.8加入显色液A和B显色10分钟，加终止液读数。D.2.9仪器判断：以空白对照调零用酶标仪于450 nm（620 nm作参比波长）读取od值，根据od值的大小判定阴阳性。DB63/T 13912015 12 D D 附 录 E（规范性附录）剖检法检查棘球蚴（包虫）病操作规程 E.1 检查用品 E.1.1 大搪瓷盘、刀、30 cm50 cm的切菜板、单面刀片、平皿、水桶。E.2 被检牛、羊先登记、编号 E.3剖检 E.3.1 内脏检查 取出剖检牛、羊胃、肠等消化器官，仔细检查体腔内心、肝、肺、肾及脾等脏器外表面，有无包囊或小白点形的囊状物。将带包囊和小白点状物的脏器从体腔内取出，用清水冼去血污，置入瓷盘上。E.3.2检囊 首先肉眼逐区观察脏器表面，对于表层明显可见的包囊先切开，看其结构。然后，用手逐区触摸脏器，发现脏器实质内囊状物时，切开深层囊，观其结构。幼年动物包囊处于发育初期，其形态和大小不同于成年羊包囊，呈小白点状，囊径小于0.5 cm，不易观察，生长在脏器表面和内部。检查办法应先肉眼仔细逐区观察脏器表面，将表面所有可疑小白点囊状物“#”字型切下，放入平皿。然后，将被检脏器按顺序切成2 mm5 mm的薄片，逐片用手触摸，肉眼检查，发现囊状物，用“#”字型切下，放入平皿。E.4包囊判定 E.4.1包囊位于脏器的实质内，周围由宿主结缔组织包围，呈灰白色，有半透明感。E.4.2囊壁粉皮样白色，切开囊壁，可见囊腔，囊液透明无色。含囊砂(原头蚴)和子囊或无。E.4.3幼龄动物大多形成0.5 cm以下小白点状的包囊。E.4.3.1小囊外观呈珠状，表面光泽，位于脏器包膜之下，有很强的触感，质地坚韧有弹性。E.4.3.2将囊沿中轴切开，具明显囊腔，其内含少量透明囊液，壁白色。E.5包囊计数 根据上述特征结构，按不同脏器进行包囊计数，测囊径范围，登记。E.6 处理 被检脏器查完后煮沸或焚烧做无害化处理。DB63/T 13912015 13 附 录 F（规范性附录）家畜棘球蚴病调查登记表 表F.1 给出了家畜棘球蚴病调查所填写的具体内容。表F.1家畜棘球蚴病调查登记 调查地点：县 屠宰场 畜种：调查时间：年 月 日 调查人：肝包囊 肺包囊 序号 品种 年龄 性别 无 荷囊数 囊径范围 无 荷囊数 囊径范围肾、心及其它感染情况 血清样品编号 备注 注：钙化包囊及脓肿请填写在备注。DB63/T 13912015 14 附 录 G（规范性附录）氢溴酸槟榔碱泻下法检查犬棘球绦虫操作规范 G.1 检查区的选择与设置 要求远离人群和交通要道、土质较硬、有利于粪便收集。在检查区内要将铁钎安置牢固，铁钎之间间距3 m，避免犬互相撕咬。在检查区边挖一废坑，坑深1 m，宽0.5 m，将所有粪便及废弃物倒入坑内。G.2 检查人员分工 最少4人相互协作。主要工作有负责对犬一般情况进行调查与登记编号，并对安全防护进行监督、实施灌药、负责保定及对所有犬排泄物进行检查。G.3检查用品 G.3.1药品配制 1、5g氢溴酸槟榔碱粉末、100 ml水、15 g20 g砂糖、混匀，配成1.5溶液，装入清洁注射液瓶内备用。G.3.2防护用品 口罩、帽子、连体工作服、胶靴、乳胶手套、线手套、喷灯、汽油、酒精、大塑料袋若干个、铁锹、石灰。G.4固定犬用品 钢筋制铁钎、拴犬铁链、铁制犬保定钳。G.5投药及检虫用品 登记表、铁制连续注射器、30 cm20 cm黑底搪瓷盘、1L搪瓷杯、水壶、自制木片、挑虫针、平皿、放大镜、硫酸阿托品注射液。G.6投药 按每公斤体重0.5 ml剂量，从犬口腔内注入药液，投药前禁食12小时。将犬拴好，固定好犬头部，以免其咬人，用注射器将药液注入口腔，在药未注完及注射器没有从犬嘴拿出以前，抓犬的人员绝不能放开犬头。或：投约前禁食12小时。按0.5 ml/kg剂量，将药物注入馒头或其它食物中喂犬。G.7 粪样的收集 服药后40分钟60分钟，被检犬在排出大量正常粪便后，会排出标准粪样(无内容物的粘性液体)，收取约三分之一，置于黑底搪瓷盘中。收集正常粪便5 g左右，-20 保存。如超过60分钟，被检犬还未排出标准粪样，可第二次投药。投药剂量为第一次的一半。G.8 虫体检查 用75%酒精溶液清洗搪瓷盘中标准粪样，沉淀片刻，弃上清，晃动盘，肉眼判定有无虫体，发现虫体吸入平皿，逐条计数、登记，75%酒精固定保存。检完后，认真清洗粪检盘，避免重检。G.9 感染强度 分三级。I轻度10条以下，中度10条100条，强度100条以上。G.10 用药反应 DB63/T 13912015 15 少量犬服药后发生反应，如心博过速、抽搐、虚脱等症状，这些症状一般在短时间内会自行消失，但反应严重时，应使用硫酸阿托品治疗，剂量为0.05 mgkg1 mgkg。G.11 消毒处理 G.11.1粪便收集完后，将犬继续固定12小时，排出的粪便深埋。所有地面上粪便清除干净，扔入废坑，撒入石灰，并用土埋实，以免小孩或犬将坑内废弃物弄出造成污染。G.11.2凡被犬粪接触的地面、铁锹、铁钎、铁链等一律用喷灯焚烧。G.11.3防护服、胶靴、手套、帽子、口罩等检查用品用后按无污染解脱法，分别装入结实塑料袋中(每袋体积不能大于高压锅所能容纳的体积)，严格高压消毒处理。G.11.4所有参与工作的人员用肥皂和清水反复洗手。G.11.5此项工作危险性很大，为了自己和当地居民、家畜安全自开始至结束，要严密注视每一个环节，发现问题及时处理；严禁外人进入场地，消毒必须彻底。DB63/T 13912015 16 附 录 H（规范性附录）犬棘球绦虫感染调查统计表 表H.1 给出了犬棘球绦虫调查所填写的各个要素。表 H.1 犬棘球绦虫感染调查 调查地点：县 乡 村 调查时间：年 月 日 调查人：犬主 犬 况 体型 饲养方式 棘球绦虫数量及感染强度 备注 姓名 民族 职业 犬 号 年龄 品种 毛色 大 中 小 栓养 散养检查方式+注1：体型：大：20 kg以上；中：10 kg20 kg之间；小：10 kg以下。注2：检查方式：氢溴酸槟榔碱下泻法；剖检法。注3：棘球绦虫感染强度：-表示阴性；+表示100条以下；+表示1 000 条以上；+表示10 000条以上，并在备注中注明虫体数量。DB63/T 13912015 17 附 录 I（规范性附录）犬粪样采集及户主信息登记表 表I.1 给出了犬粪样采集及户主信息的内容。表 I.1 犬粪样采集及户主信息登记 调查地点：县 乡 村 调查时间：年 月 日 调查人：家牧犬 有 蹄 家 畜（头、只）序 号 户主姓名 族别 人口数 品种毛色 年龄 雄性 雌性绵羊山羊黄牛牦牛骆驼马驴骡 猪 合计 备 注 共页，第页 _