ICS 65.120 B 46 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 24622016 饲料添加剂 蛋氨酸的测定 Determination of methionine in feed additive 2016-05-31发布 2016-07-01实施吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 24622016 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1和GB/T 20001.4给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出。本标准由吉林省畜牧业管理局归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。本标准主要起草人：王洋、杨梅、庞博、李桂杰、杨阳、张九天。DB22/T 24622016 1 饲料添加剂 蛋氨酸的测定 1 范围 本标准规定了饲料添加剂蛋氨酸测定的原理、试剂与材料、仪器与设备、分析步骤、结果计算和表述、精密度。本标准适用于饲料添加剂蛋氨酸含量高于10 g/100 g的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 采用凯氏法测定试样中的含氮量，饲料中蛋氨酸在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，用硫酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋氨酸的含量。采用间接碘量法测定试样中含硫量，试样中先加入定量、过量碘滴定液，在酸性条件下，含硫基团与过量的碘作用，剩余碘用硫代硫酸钠滴定，由硫代硫酸钠溶液所消耗的量，间接求出硫含量。4 试剂与材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T 6682规定的一级水。4.1 磷酸二氢钾（KH2PO4）。4.2 磷酸氢二钾（K2HPO4）。4.3 碘化钾（KI）。4.4 碘（I2）。4.5 硫代硫酸钠（Na2S2O35H2O）。4.6 硫酸钾（K2SO4）。4.7 硫酸铜（CuSO45H2O）。4.8 浓硫酸（H2SO4）。4.9 硼酸（H3BO3）。4.10 甲基红（C15H15N3O2）。4.11 溴甲酚绿（C21H14Br4O5S）。4.12 盐酸（HCl）。4.13 重铬酸钾（K2Cr2O7）。DB22/T 24622016 2 4.14 碘化汞（HgI2）。4.15 可溶性淀粉。4.16 氢氧化钠（NaOH）。4.17 无水乙醇（C2H5OH）。4.18 6 mol/L 盐酸溶液：500 mL 盐酸（4.12）蒸馏水溶解定容至 1000 mL，即得浓度为 6 mol/L 盐酸溶液。4.19 碘溶液：称取 10 g 碘化钾（4.3）于烧杯中，加少量水，加入 6.4 g 碘（4.4），与碘化钾一起研磨，直至完全溶解，定量转移到 1000 mL 棕色容量瓶中，稀释到刻度，摇匀，即得 0.05 mol/L 碘溶液，置于暗处备用。4.20 淀粉指示剂：称取 0.5 g 可溶性淀粉（4.15），用少量水搅匀后，加入 100 mL 沸水中，搅匀冷却后，加入 0.1 g 碘化汞作防腐剂，制得浓度为 0.5%的淀粉溶液。4.21 混合催化剂制备：将 1000 g 硫酸钾(4.6)和 50 g硫酸铜(4.7)充分混合,并仔细研磨。4.22 氢氧化钠（30%）：称取30 g 氢氧化钠,用蒸馏水溶解定容至 100 mL，摇匀备用。4.23 硼酸溶液（20 g/L）：称取 20 g 硼酸，用蒸馏水溶解定容至 1000 mL，摇匀备用。4.24 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.10 g 甲基红（4.10）与0.50 g 溴甲酚绿（4.11）溶解于无水乙醇，定容至 100 mL，摇匀备用。4.25 0.1 mol/L 重铬酸钾标准溶液、0.1 mol/L 硫代硫酸钠标准溶液、0.1 mol/L 硫酸标准溶液均按GB/T 601 制备。5 仪器与设备 5.1 天平：感量 0.01 g；5.2 分析天平：感量 0.1 mg；5.3 干燥箱；5.4 凯氏定氮蒸馏装置；5.5 电炉；5.6 马弗炉。6 分析步骤 6.1 试样制备 将试样经多次缩分后取出100 g，用研磨器或研钵研磨至全部通过0.05 mm孔径筛，充分混匀，贮于洁净、干燥、磨口瓶中备用。6.2 试样处理与测定 6.2.1 碘量法 称取0.1 g样品（称准至0.0001 g）于 250 mL碘量瓶中，加入50 mL水、1 g磷酸二氢钾（4.1）、2 g磷酸氢二钾（4.2）和1 g碘化钾（4.3），轻轻摇匀使其完全溶解。再准确加入25.0 mL 0.05 molL碘溶液（4.19），塞好瓶塞，摇匀，放置暗处30 min，用少量水洗瓶内壁，立即用0.1 molL的硫代硫酸钠标准溶液（4.25）滴定剩余碘液，接近终点时加入l mL淀粉指示剂（4.20），滴至蓝色刚好消失为终点。DB22/T 24622016 3 6.2.2 凯氏定氮法 称取0.5 g样品（称准至0.0001 g）于 100 mL凯氏烧瓶中，加入3.5 g混合催化剂(4.21)和10 mL浓硫酸（4.8），在电炉上慢慢消化至透明，取下冷却，定量转入100 mL容量瓶，冷却后定容。移取该试液10.0 mL，移入蒸馏烧瓶，加入氢氧化钠10 mL（4.22），用凯氏定氮蒸馏装置进行蒸馏，蒸出液用 20 mL 2%硼酸溶液（4.23）吸收，加入2滴甲基红-溴甲酚绿混合指示剂（4.24），用0.1 molL硫酸标准溶液（4.25）滴至暗红色为终点。6.3 空白试验 各方法同时作试剂空白试验，不加试样，按6.2.1和6.2.2操作步骤进行。7 结果计算和表述 采用碘量法测定饲料添加剂中蛋氨酸含量的计算公式如下：()10010 06.7430=WV-V cX-.(1)式中：X 试样中蛋氨酸的含量，单位为克每百克（g/100 g）；c 硫代硫酸钠标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；0V 空白测定消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；V 样品测定消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；W 样品的质量，单位为克（g）06.741/2 C5H11NO2S的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）采用凯氏定氮法测定饲料添加剂中蛋氨酸含量的计算公式如下：()10010 10 21 14930=W.V-V cX-.(2)式中：X 试样中蛋氨酸的含量，单位为克每百克（g/100 g）；c 盐酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；0V 空白测定消耗的盐酸标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；V 样品测定消耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；W 样品的质量，单位为克（g）；DB22/T 24622016 4 21 149.1/2 C5H11NO2S的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）；10 稀释倍数。结果取两次测定结果的平均值，保留三位有效数字，并为公式（1）、（2）计算出蛋氨酸含量低者为最终测定结果。8 精密度 8.1 在重复性测定的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的 0.8%。8.2 在再现性测定的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的 1%。_