ICS 67.120.30 B 50 DB37 山东省地方标准 DB37/T 20952012 水产品中乙酰甲喹残留量的测定 液相色谱法 Detemination of Mequindox Residues in Fishery Products by HPLC 2012-03-21 发布 2012-05-01 实施山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 20952012 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省海洋与渔业厅提出。本标准由山东省海洋渔业标准化专业技术委员会归口。本标准起草单位：山东省海洋水产研究所、山东省水产品质量检验中心。本标准主要起草人：宫向红、邹荣婕、徐英江、张世娟、李佳蔚、任传博、张华威。DB37/T 20952012 1 水产品中乙酰甲喹残留量的测定 液相色谱法 1 范围 本标准规定了水产品中乙酰甲喹残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于水产品中乙酰甲喹残留量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品用二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶液提取，正己烷去脂，用高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。4 试剂和材料 4.1 所用试剂除另有规定外，均为分析纯。4.2 试剂和材料主要包括：试验用水：应符合 GB/T 6682 中一级水的规定；二氯甲烷；乙酸乙酯；甲醇：色谱纯；正己烷；二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液：二氯甲烷体积分数为 75%；乙酰甲喹标准品：纯度99%；乙酰甲喹标准贮备溶液：准确称取 0.01 g（精确至 0.000 1 g）乙酰甲喹，用甲醇溶解并定容至 100 mL，配成浓度为 100 g/mL 的标准贮备液，置 4冰箱保存，保存期不超过 3个月；乙酰甲喹标准工作液：取乙酰甲喹标准贮备液，用流动相稀释成浓度范围为 0.05 g/mL1 g/mL 的标准工作液。5 仪器和设备 主要包括：高效液相色谱仪，配有紫外检测器；旋转蒸发仪；离心机：7000 r/min；DB37/T 20952012 2 分析天平：感量 0.000 01 g；天平：感量 0.01 g；超声波清洗器；旋涡混合器；具塞玻璃离心管：10 mL；100 mL 梨形瓶；50 mL 塑料离心管；微孔滤膜：有机系，0.45 m。6 试样测定 6.1 样品的制备 虾类去头、壳、肠线，贝类、蟹类去壳，鱼类去骨、内脏。取可食部分用高速分散匀质机匀浆，备用。如不能及时检测，-18 以下冷冻保存备用。6.2 样品的提取 称取匀浆后的样品5 g（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加20mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液，振摇混匀，超声提取15 min，4 000 r/min离心10 min，将提取液移至100 mL梨形瓶中，残渣用15 mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液重复提取1次，合并上清液于上述梨形瓶中，40 旋转蒸发至近干。6.3 样品的净化 向蒸发至近干的梨形瓶中加入1.00 mL流动相，漩涡溶解残渣，转移至10 mL具塞离心管中，加入5 mL正己烷，漩涡混合1min，4 000 r/min离心10 min，弃去上层正己烷，下层溶液过0.45 m微孔滤膜后，供液相色谱分析。6.4 测定 6.4.1 色谱条件 主要包括以下几项：a)色谱柱：MG C18 柱,250 mm4.6 mm（i.d.），5 m；或性能相当者；b)流动相：甲醇-水（甲醇体积分数为 50%）；c)流速：0.8 mL/min；d)检测波长：373 nm；e)柱温：30；f)进样量：20 L。6.4.2 标准曲线绘制 取乙酰甲喹标准贮备液，用流动相稀释成适当浓度的系列标准工作液。分别取20L进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算线性方程。6.4.3 液相色谱测定 在6.4.1色谱条件下对样品溶液进行测定，响应值应在仪器检测线性范围内。标准品保留时间参考值为：5.632 min(见附录A)。DB37/T 20952012 3 7 空白试验 除不加试样外，均按6进行测定。8 结果计算 试样中乙酰甲喹残留量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值，结果保留三位有效数字。1000=mV CX.(1)式中：X 试样中乙酰甲喹残留量，g/kg；C 试样溶液中乙酰甲喹的浓度，g/mL；V 试样溶液最终体积，mL；M 试样质量，g。9 灵敏度 本方法检出限为10g/kg；定量限为20 g/kg。10 准确度 本方法添加浓度为20g/kg200g/kg时，回收率为70%90%。11 精密度 批内相对标准偏差10%，批间相对标准偏差15%。12 方法的线性范围 本方法的线性范围为50 g/L1 000 g/L。DB37/T 20952012 4 A A 附 录 A（资料性附录）色谱图 5.632AU0.00000.00050.00100.00150.00200.00250.0030分分0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 图A.1 200 g/L乙酰甲喹标准溶液色谱图 AU-0.0010-0.00050.00000.00050.00100.00150.0020分分0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 图A.2 鲤鱼空白色谱图 乙乙乙 乙-5.622AU-0.00020.00000.00020.00040.00060.00080.00100.00120.00140.00160.00180.00200.00220.0024分分0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 图A.3 鲤鱼加标色谱图（添加量为 20 g/kg）_