ICS 65.020.40B 64黑 龙 江 省 地 方 标 准DB23DB23/T 232420192019-03-19发布 2019-04-18实施黑龙江省市场监督管理局发 布山杨幼化技术规程 DB23/T 23242019前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。本标准由黑龙江省林业与草原局提出并归口。本标准由黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省森林植物园。本标准主要起草人：卢慧颖、白卉、张妍妍、李静、田新华、谢雷、张建瑛、王艳敏、李正华、张文达、李京、李长海、黎莉、赵明、于晓杰、于腊梅、黄俊杰、李念森、毛洪波。DB23/T 232420191 山杨幼化技术规程 1范围 本标准规定了山杨（Populus davidiana）的根萌幼化技术、组织培养幼化技术及生产档案。本标准适用于山杨幼化。2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6001育苗技术规程 LY/T 1000-2013容器育苗技术 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 DB23/T 961-2005山杨无性繁殖配套生产技术 3根萌幼化技术 3.1取材时间与材料选择 每年的春秋两季，植株停止生长之后、萌动前，采集粗度为 3cm左右山杨树根。3.2储存条件 山杨根应沙藏，储藏温度为 0 5，湿度 60%，应适时通风。3.3埋根条件 土壤温度稳定在10 以上时进行埋根。3.4根萌基质及消毒 基质宜为草炭土，厚度 10 cm15 cm，基质装入规格 50 cm 30 cm 20 cm 育苗盘后，用 800 倍的 40%多菌灵可湿性粉剂喷淋灭菌。3.5灭菌处理 将山杨根用多菌灵清洗干净。3.6埋根方法 截取长度15 cm30 cm根段平放于草炭土表面，然后封土，达到完全覆盖根系即可。3.7幼化管理 DB23/T 232420192 封土后浇足水，敷上塑料薄膜。待根萌苗长到1 cm2 cm，撤去塑料薄膜，苗期水分管理按照GB/T 6001规定执行。3.8根萌苗移栽与管理 待根萌苗长出新根后，长到5 cm10 cm高，截断新根周围的老根，移栽至育苗容器中。容器苗期栽培管理按照 LY/T 10002013中5.5执行。4组织培养幼化技术 4.1外植体选择及保存 外植体应选择无病虫害生长健壮的枝条，采集时间为每年的 12 月至翌年 3 月。贮存方式应为低温封存。低温存放温度为 0以下，湿度 50%60%。接种前 10 d15 d 将枝条常温水培，隔日换水，待休眠芽萌动后，即可接种。4.2诱导方式选择 选取腋芽或叶片诱导胚性愈伤，待愈伤生成不定芽 1 cm2 cm 进行继代培养，每 25 d30 d 继代一次，即可保证苗木的幼化。选取腋芽诱导方式，腋芽应培养出丛生芽，应继代 3次5次。4.3外植体消毒 按DB23/T 961-2005中5.2规定执行。4.4培养配制 按照LY/T 1882的规定执行。4.5培养条件 按DB23/T 961-2005中5.5规定执行。4.6无菌苗接种 4.6.1叶片诱导不定芽 在超净工作台中，将灭菌处理的叶片，置于无菌滤纸上吸干水分,切成1 cm21.5 cm2 的方形，平铺于培养基表面，每瓶3枚5枚。接种培养基为以NT6-BA1.0 mg/L+KT0.3 mg/L的初始诱导培养基。置于培养室光照培养10 d20 d后形成不定芽。4.6.2腋芽诱导丛生芽 选取萌动后2 cm左右的腋芽，在超净工作台中灭菌处理后，置于无菌滤纸上吸干水分,腋芽下部插于培养基内0.5 cm左右，每瓶5个8个芽，接种培养基为以1/2MS为基本培养基，附加激素6-BA1.0 mg/L的初始诱导培养基，在10 d20 d后形成丛生芽。4.7继代增殖培养 将丛生芽，转移至1/2MS6-BA1.0 mg/L+NAA0.02 mg/L的增殖培养基。培养30d后，不定芽基部可平均生长出4.5个不定芽。4.8生根培养和植株再生 DB23/T 232420193 将丛生不定芽分离开，挑选高度1.0cm以上的单株转接到以1/2MSIBA1.0 mg/L+NAA0.02 mg/L的生根培养基上，培养25d左右获得完整再生植株。4.9炼苗与驯化 在移栽前，组培苗应敞开封口在自然光下进行抗性锻炼3 d5 d，洗掉根上附着的培养基，将根蘸入2%的高锰酸钾溶液中灭菌后，栽入装有已灭菌蛭石的规格50 cm 30 cm 20 cm育苗盘内，3 d5 d内覆膜保持湿度，5 d10 d后逐渐揭去塑料膜。移栽后第2 d和第7 d分别施全营养叶面肥，在施肥后的2d喷1000倍40%多菌灵可湿性粉剂。4.10移栽与管理 在苗木长出新根后连同附着在上面的蛭石一起植入育苗容器内，育苗容器内基质应提前灭菌并淋透，移栽后3 d内应扣膜保湿并避免阳光直射。栽培管理按照 LY/T 10002013中5.5执行。5生产档案 应建立生产档案，内容包括：山杨根萌技术、组织培养技术、炼苗与驯化、移栽与管理等。