ICS 65.020.40 B 61 DB51 四川省地方标准 DB51/T 18992014 千层金组培快繁育苗技术规程 2014-11-11发布 2014-12-01实施四川省质量技术监督局 发布 DB51/T 18992014 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 场地要求.1 4 培养基配制.2 5 组织培养.2 6 炼苗移栽.3 7 出圃.4 附录 A（资料性附录）MS 培养基配制表.5 附录 B（规范性附录）千层金组培瓶苗的质量分级.6 附录 C（规范性附录）千层金组培出圃苗的质量分级.7 DB51/T 18992014 II 前 言 本标准按GB/T1.1-2009标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由四川省林业厅提出并归口。本标准由四川省林业厅负责解释。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：巴中七彩林业科技有限公司 本标准主要起草人员：马建华、王小辉、沈香兰、朱晓菲、吴佳川、栗丹、晏强、罗丽君、罗雪梅、黄丽。DB51/T 18992014 1 千层金组培快繁育苗技术规程 1 范围 本标准规定了千层金（Melaleuca bracteata）组培快繁技术规程，包括千层金组培快繁的场地要求、培养基配制、组织培养、炼苗移栽及出圃等。本标准适用于千层金的组培快繁育苗。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6001-1985 育苗技术规程 LY/T 1882-2010 林木组织培养育苗技术规程 DB33/T 752-2009 植物种苗组培快繁技术规程 DB51/T 1605-2013 千层金观赏苗木扦插培育技术规程及质量分级 3 场地要求 3.1 组培室 3.1.1 操作时间 操作间主要进行培养基和培养母液的配制及培养基灭菌工作。可细分为储藏室，称量室，操作室，灭菌室，培养基储藏室。所需的仪器设备为高压灭菌锅，电子天平，电磁炉，净水器，恒温干燥箱，空调，可调移液枪，电子分析天平，培养基自动定量灌装机，酸度计，摇床，蒸馏水发生器，纯水机，玻璃仪器，晾瓶架，组培瓶等。配制培养基所需化学试剂为附表1所列各化学元素及NaOH，HCl，蔗糖，琼脂等化学试剂。3.1.2 缓冲间 是从外部环境到内部洁净环境的过度空间。包括风淋室和操作人员的清洗、换衣设备。所需的仪器设备为风淋室。3.1.3 接种室 组培材料的灭菌、接种和继代工作。仪器主要有超净工作台、空调、臭氧发生器、空气自净器、接种器械灭菌器、酒精灯、各种枪形镊、直剪、弯剪。要求无菌环境。3.1.4 培养间 主要进行植物材料的培养。设备主要有光照培养箱、光照培养架、照度计。要求能控温控湿，并控制光培养和暗培养的时间，为无菌洁净空间。DB51/T 18992014 2 3.2 炼苗区 是植物材料移栽前的过度空间。搭建荫棚，有遮阴喷水设施。保持温度2530，湿度85%以上，光照3000Lux的半封闭状态。3.3 苗圃 栽植床排水良好，栽植床采用深沟高畦，畦宽1.6m2.0m，沟深20cm30cm，宽20cm，沟与沟之间相连，利于排水。应有定时喷灌设施，排水设施，降温设施，增温设施，补光设施。大田苗床须搭建小拱棚，保持温度2530，湿度85%以上。苗圃的建设按照GB/T 6001-1985的相关标准执行。4 培养基配制 4.1 培养容器和接种器械的清洗 培养容器和接种器械先用洗涤剂浸泡过夜，后用清水冲洗至无泡沫。干燥后备用。4.2 培养基配制 4.2.1 培养基母液的配制 培养基采用MS基本培养基，所需各元素见附录1。配制方法按照LY/T 1882-2010的相关标准执行。4.2.2 激素母液配制 激素采用6-BA和NAA。激素母液的配制方法按照DB33/T 752-2009的相关标准执行。4.2.3 初代培养基的配制 初代培养基配方为MS+0.5mg/L6-BA。用1mol/L氢氧化钠调节PH值为6.5.分装至240ml组培瓶中。配制方法按照LY/T 1882-2010的相关标准执行。4.2.4 继代培养基的配制 继代培养基配方为MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA。用氢氧化钠调节PH值为6.5.分装至240ml组培瓶中。配制方法按照LY/T 1882-2010的相关标准执行。4.2.5 生根培养基的配制 生根培养基配方为1/2MS+0.2mg/LNAA。用1mol/L氢氧化钠调节PH值为6.5.分装至240ml组培瓶中。配制方法按照LY/T 1882-2010的相关标准执行。4.3 培养基灭菌 将分装好的培养基放入灭菌筐中，在121，0.5 MPa的环境中灭菌25min后，冷却凝固后，保存在无菌环境中备用。5 组织培养 DB51/T 18992014 3 5.1 外植体来源 选用观赏价值高的优良单株上的枝条。5.2 外植体准备 5.2.1 采集 外植体的采集时间为春夏季节的晴天早上。选用生长健壮、无病虫害、品种纯正母株的枝条，去除多余叶片，剪成3cm左右的带芽茎段。5.2.2 预处理 将切好的外植体先用洗涤剂浸泡15min，再在流水下冲洗30min120min，直至去除多余泡沫。用干纱布吸水滤干备用。5.2.3 表面消毒 将处理好的外植体在超净工作台上，用75%的酒精处理30s，无菌水清洗两遍，再用0.1%升汞处理20min,无菌水清洗5遍后，用无菌滤纸吸干多余水分备用。5.3 初代培养 在超净工作台上，将灭菌好的外植体垂直插入初代培养基中。使腋芽芽点位于培养基之上。在光照2000Lux，光培养/暗培养为16h/8h,温度24，湿度70%的培养室中培养20d30d。5.4 继代培养 待萌发的腋芽长至 3cm5cm,在超净工作台上将萌发的腋芽从原外植体切下，然后切割成一叶一段后转接至继代培养基中进行继代增殖培养。选用240ml的组培瓶进行继代增殖，每瓶培养基20ml30ml，接种密度为 15 株/瓶，增殖周期 60d,增殖系数达 8 以上。培养条件同 5.3 的规定。5.5 生根培养 待增殖后的丛生芽单芽长至3cm5cm时，在超净工作台上切割单芽转接于生根培养基上。培养条件同5.3的规定，培养10d20d。6 炼苗移栽 6.1 炼苗 选取高度7cm左右生根组培苗，单株根系数和叶片数均为5以上的组培苗进行炼苗。组培瓶苗的质量分级见附录B。在炼苗区放置4d7d后，拧松组培瓶盖，再次放置1d2d后，完全打开瓶盖，放置7d左右。期间保持适当湿度，注意遮阳，防止高温灼伤。6.2 移栽 取出组培苗，用清水洗去基部培养基，用1000ppm多菌灵浸泡3s5s后移栽至苗床或育苗容器中。移栽后喷足定根水，遮阴保湿，防止前期高温灼伤，后期逐渐放宽温光条件，使其与外界环境一致。每隔5d7d用800ppm的多菌灵或1000ppm代森铵或600ppm百菌清等喷洒防病。6.3 后期管理 DB51/T 18992014 4 6.3.1 水分管理 移栽前期保持土壤湿润，不可偏干。夏季应在早晚浇水，入秋后土壤稍干为宜，冬季尽量减少水分。6.3.2 施肥管理 移栽前期避免施肥，移栽一月后可视苗木情况适当施肥。夏季以氮肥为主，秋季以磷、钾混合肥为主。每隔30d45d淋施一次。6.3.3 病虫害管理 按照DB51/T 1605-2013 的相关规定执行。7 出圃 7.1 出圃要求 7.1.1 苗高 12cm 以上，具 10 条以上白嫩粗壮完整根，根长 3cm 以上。7.1.2 要求苗生长健壮，无病虫害，无黄叶、烂叶，不徒长，根系粗壮不老化。7.1.3 出圃苗移栽时须保护好根系。7.2 出圃苗质量分级 出圃苗的质量分级见附录C。DB51/T 18992014 5 A A 附 录 A（资料性附录）MS培养基配制表 表A.1 MS培养基所需各物质含量表 名称 工作液浓度（mg/L）母液浓度（g/L）1L 培养基取用量NH4NO3 1 650 16.5 KNO3 1900 19 MgSO47H2O 370 3.7 CaCl2H2O 440 4.4 大量元素（10X）KH2PO4 1 7 0 1.7 100ml KI 0.83 0.083 H3BO3 6.2 0.62 MnSO44H2O 22.3 2.23 ZnSO47H2O 8.6 0.86 Na2MnO42H2O 0.25 0.025 CuSO45H2O 0.025 0.0025 微量元素（100X）CoCl26H2O 0.025 0.0025 10ml FeSO47H2O 27.8 2.78 铁盐（100X）Na2-EDTA2H2O 37.3 3.73 10ml 肌醇 100 10 烟酸 0.5 0.05 盐酸吡哆醇（维生素 B6）0.5 0.05 盐酸硫胺素（维生素 B1）0.1 0.01 有机成分（100X）甘氨酸 2 0.2 10ml MS培养基按表1进行配制。DB51/T 18992014 6 B B 附 录 B（规范性附录）千层金组培瓶苗的质量分级 表B.1 千层金组培瓶苗的质量分级 I级 II级 III级 根数（条）9 7 5 苗高（cm）9 8 7 叶片数（片）11 7 5 茎粗（mm）1.2 0.8 0.5 污染情况 完全无污染 根部轻微染菌，面积5%根部少量污染，面积10%整体感 全株健壮，色泽翠绿，根部无愈伤组织附着 全株健壮，少量黄叶片，根部无愈伤组织附着 全株健壮，少量黄叶，根部少量愈伤组织附着 DB51/T 18992014 7 C C 附 录 C（规范性附录）千层金组培出圃苗的质量分级 表C.1 千层金组培出圃苗的质量分级 I级 II级 III级 根数（条）15 13 10 株高（cm）30 20 12 地径（mm）4 2 1 _ DB51/T 18992014