ICS 65.020.20 B 05 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1648 2019 蒙桑组织 培养育苗 技术规程 Tissue culture technical regulation of Morus mongolica 2019-05-20 发布 2019-08-20 实施 内 蒙 古 自 治 区 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB15/T 1648 2019 I 目 次.II 1.1 2.1 3.1 4.1 5.2 6.3 7.4 8.4 9.4 10.5 11.6 A MS.7 DB15/T 1648 2019 II 前 言 GB/T1.1-2009 DB15/T 1648 2019 1 蒙桑组织 培养育 苗技术规 程 1 范围 Morus mongolica 2 规范性 引用 文件 LY/T 1882-2010 3 术语和 定义 LY/T 1882-2010 4 环境及 器具 灭菌 4.1 准备 室 消毒 灭菌 4.2 接种室 消毒 灭菌 30 min 40 min 20 min 4.3 培养室 消毒 灭菌 4.4 超净工 作台 消毒 灭菌 30 min 40 min 40 min 70%4.5 器具消 毒灭 菌 DB15/T 1648 2019 2 4.5.1 接种器 具消 毒灭 菌 121 30 min 20 s 4.5.2 污染瓶 消毒 灭菌 5 培养基 配制 5.1 基本 培 养基 选择 MS 5.2 母液配 制和 保存 5.2.1 母液的 配制 MS A 20 B C 100 D 200 E 50 A 1.0 mg/mL 5.2.2 母液的 保存 4 5.3 培养基 制备 5.3.1 准备 pH 5.3.2 琼脂融 化 700 mL/L 5.5 g/L 6.0 g/L 5.3.3 糖溶解 20 g/L 30 g/L 5.3.4 加母液 A B C D E 50 ml/L 10 ml/L 5 ml/L 5 ml/L 10 ml/L A B C D E 25 ml/L 10 ml/L 5 ml/L 5 ml/L 10 ml/L IBA 0.5 mg/L 6-BA 1.0 mg/L IBA 0.5 mg/L GA3 0.5 mg/L IBA 0.3 mg/L DB15/T 1648 2019 3 5.3.5 定容 5.3.6 pH 值 测定 和调 节 pH pH 1 mol/L HCl 1 mol/L NaOH pH 5.8 6.0 5.3.7 分装 240 ml 50 ml 350 ml 65 ml 5.3.8 封口 5.3.9 灭菌 121 20 min 30 min 5.3.10 冷却 5.3.11 贮存 4 6 外植体 选取 及灭 菌 6.1 外植体 采集 20 7 3 6.2 外植体 灭菌 6.2.1 表面清 洗 2 4 30 min 75%6.2.2 酒精和 升汞 灭菌 75%40 s 3 1%15 min 5 6.3 外植体 制备 0.3 cm 0.5 cm DB15/T 1648 2019 4 7 初代培 养 7.1 初代培 养基 MS+IBA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L 7.2 初代接种 3 1 mm 2 s 7.3 培养方法 7.4 培养环 境 25 2 70 80 1500 lx 2000 lx 12 h/d 7.5 培养期 20 d 3 cm 5 cm 8 继代培 养 8.1 继代 培 养基 1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+GA3 0.5 mg/L 8.2 继代转 接 2 cm 3 cm 2 s 3 8.3 培养方 法 8.4 培养环 境 25 2 70 80 2000 lx 3000 lx 16 h/d 8.5 培养期 30 d 9 生根培 养 DB15/T 1648 2019 5 9.1 生根 培 养基 1/2MS+IBA 0.3 mg/L 9.2 生根转 接 2.0 cm 3.0 cm 8 10 3.0 mm 5.0 mm 9.3 培养方法 9.4 培养环 境 25 2 70 80 1500 lx 2000 lx 14 h/d 9.5 培养期 20 d 40 d 10 炼苗 与 培养 10.1 瓶苗炼 苗 3 5 5 cm 6 cm 2 25 2 1500 lx 2000 lx 1 1 d 2 d 1 d 2 d 10.2 温室穴 盘炼苗 10.2.1 基质=3 2 1 800 24 h 10.2.2 穴盘栽 植 8 cm 8 cm 10.2.3 温湿度 管理 80 90 20 25 6 1 10.3 容器培 育 DB15/T 1648 2019 6 10.3.1 容器移 栽 1 18 cm 20 cm 10.3.2 水肥管 理 4 d 5 d 1 2 1 20 d 0.2%0.3%1 3 g/m2 5 g/m2 10.4 大田培 育 1 2 80%11 病虫害 防治 11.1 炼苗期 5 d 7 d 1 800 1 3 4 11.2 容器培 育期 30 30 min 30 3%6 g/m2 9 g/m2 2%4000 6000 50%800 1 2 3 15%500 7 d 2 3 DB15/T 1648 2019 7 A A 附 录 A（资料 性附 录）MS 培 养基 母液 配制 表 表A.1 MS 培 养基 母液 配制 表 mg/L mg mL mL/L A NH4NO3 1650 20 33000 1000 50 KNO3 1900 20 38000 CaCl2 2O 440 20 8800 MgSO4 2O 370 20 7400 KH2PO4 170 20 3400 B FeSO4 2O 27.8 100 2780 1000 10 Na2 2O 37.3 100 3730 C MnSO 4H2O 22.3 100 2230 500 5 ZnSO4 2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 100 83 Na2MoO4 2O 0.25 100 25 CuSO4 2O 0.025 100 2.5 CoCl2 2O 0.025 100 2.5 D 2 200 400 1000 5 B1 0.1 200 20 B6 0.5 200 100 0.5 200 100 E 100 50 5000 500 10 _