ICS 65.020.20 B 39 DB51 四川省地方标准 DB51/T 18662014 灵芝菌种 2014-11-11发布 2014-12-01实施四川省质量技术监督局 发布 DB51/T 18662014 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 要求.2 5 抽样.5 6 试验方法.5 7 判定规则.6 8 标签、标志、包装、运输、贮存.6 附录 A（规范性附录）母种常用培养基及其配方.8 附录 B（规范性附录）原种和栽培种常用培养基及其配方.9 DB51/T 18662014 II 前 言 本标准按GB/T 1.12009给出的规则进行编写。本标准附录A、附录B为规范性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省食用菌菌种场、四川省农业科学院食用菌开发研究中心负责起草。本标准主要起草人：姜邻、唐利民、杨俊辉、王蓓、贾定洪、谢丽源、贾英。DB51/T 18662014 1 灵芝菌种 1 范围 本标准规定了灵芝菌种的术语和定义、要求、抽样、试验方法、判定规则及标签、标志、包装、运输、贮存。本标准适用于灵芝母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 191 包装储运图示标志 GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。GB/T 12728术语和定义2.5.7 3.2 原种 mother culture 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。GB/T 12728术语和定义2.5.8 3.3 栽培种 spswn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。GB/T 12728术语和定义2.5.9 3.4 拮抗现象 antagonism DB51/T 18662014 2 具有不同遗传基因的菌落间产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。GB/T 12728术语和定义2.3.21 3.5 角变 sectoring 因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。GB/T 12728术语和定义2.5.17 3.6 锁状联合 clamp connection 双核菌丝体进行细胞分裂时产生的一种锁状桥接的菌丝结构，常发生在菌丝顶端，开始时在细胞上产生突起，并向下弯曲，与下部细胞连接，形如锁状。3.7 高温抑制线 high-temperatured line 食用菌菌种在培养过程中受高温的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗、菌丝变稀弱的现象。3.8 生物学效率 biological efficiency 单位质量（风干重，w）的培养料所培养产生出的子实体质量（鲜重，m）之间的比率，常用百分数表示（m/w100%）。3.9 种性 characters of variety 灵芝的品种特性。一般包括生理特性、农艺性状和商品性状。4 要求 4.1 菌种分级 灵芝菌种按繁育程序分为母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）三类。4.2 菌种生物学要求 各级菌种生物学要求应符合表1规定。表1 菌种生物学要求 项目 要求 菌丝生长状态 白色后变黄色至褐色、浓密 锁状联合 有 杂菌 无 害虫 无 4.3 母种 DB51/T 18662014 3 4.3.1 容器及规格 应符合 NY/T 528 规定。4.3.2 感官要求 应符合表 2规定。表2 母种感官要求 项目 要求 容器 洁净、完整、无破损 棉塞（梳棉或化纤棉）或硅胶塞 干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求 培养基斜面长度 顶端距棉塞（4050）接种量（接种块大小）（35）（35）菌丝生长量 占斜面 2/3以上至长满斜面 菌丝体表面特征 白色至黄色，后期变褐色或顶端菌丝有褐色线、浓密、无角变 菌丝分泌物 无 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀、无暗斑 杂菌菌落 无 菌种外观 拮抗现象 无 子实体原基 无 气味 有灵芝菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 4.3.3 菌丝生长速度 在 PDA 培养基上，25的温度条件下培养，菌丝长满斜面（斜面长度 10 左右）的时间为 12 d15d。4.3.4 母种栽培性状 灵芝母种需经出芝试验，确证其农艺性状和商品性状等种性合格后，方可用于扩大繁殖或出售。4.4 原种 4.4.1 容器及规格 应符合 NY/T 528 规定。4.4.2 感官要求 应符合表 3规定。表3 原种感官要求 项目 要求 容器 洁净、完整、无破损 棉塞、无棉塑料盖或膜 干燥、洁净、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离 30mm5mm 接种量（每支母种接原种数，接种块大小）（46）瓶（袋），1215 DB51/T 18662014 4 项目 要求 菌丝生长量 占容器 2/3以上至长满容器 菌丝体特征 白色后期瓶口变黄色、均匀、致密，无角变 培养基及菌丝体 紧贴瓶（袋）壁，无明显干缩 培养物表面分泌物 无 高温抑制线 无 杂菌菌落 无 虫（螨）无 拮抗现象 无 菌种外观 子实体原基 无或少量 气味 有灵芝菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 4.4.3 菌丝生长速度 在适宜培养基上，2325的温度条件下培养，菌丝长满容器（750ml 菌种瓶）的时间为 45d50d。4.5 栽培种 4.5.1 容器及规格 应符合 NY/T 528 规定。4.5.2 感官要求 应符合表 4规定。表4 栽培种感官要求 项目 要求 容器 洁净、完整、无破损 棉塞或无棉塑料盖（膜、纸）干燥、洁净、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离 3 0 mm5mm 接种量（每瓶原种接栽培种数）（4050）瓶（袋）菌丝生长量 占容器 2/3以上至长满容器 菌丝体特征 白色后期瓶口变黄色、均匀、致密，无角变 培养基及菌丝体 紧贴瓶（袋）壁，无明显干缩 培养物表面分泌物 无 高温抑制线 无 杂菌菌落 无 虫（螨）无 拮抗现象 无 菌种外观 子实体原基 无或少量 气味 有灵芝菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 4.5.3 菌丝生长速度 在适宜培养基上，2325的温度条件下培养，菌丝长满容器（750ml 菌种瓶）的时间为 40d 左DB51/T 18662014 5 右。5 抽样 5.1 编号 母种按品种、接种时间分批编号，原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。按批随机抽取被检样品。5.2 抽样量 母种、原种、栽培种的抽样量分别为该批菌种量的 10%、5%、1%。但每批抽样数量不得少于 10支（瓶、袋）；抽样量超过 100 支（瓶、袋）的，可进行两级抽样。6 试验方法 6.1 菌种生物学要求 6.1.1 菌丝生长状态、锁状联合和害虫检验 菌丝生长状态用肉眼观察，锁状联合用光学显微镜对培养物的水封片进行观察，害虫用放大镜观察，必要时用显微镜观察。6.1.2 杂菌检验 6.1.2.1 细菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 GB/T4789.28 中 4.7 规定的营养琼脂培养基中，2528培养 2d3d，观察培养基表面是否有细菌菌落长出，有细菌菌落长出者为有细菌污染，必要时用显微镜检查。6.1.2.2 真菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 PDA 培养基上，25培养 3d5d，培养基上出现非灵芝菌丝形态菌落的、或有异味者为受真菌污染，必要时进行水封片镜检。6.2 感官要求 感官要求试验方法按表 5 逐项进行。表5 感官要求试验方法 检验项目 检验方法 检验项目 检验方法 容器 肉眼观察 母种、原种 肉眼观察 棉塞、无棉塑料盖（膜）、硅胶塞 肉眼观察 接种量栽培种 检查生产记录 母种斜面长度 肉眼观察 菌种外观各项（杂菌菌落除外）肉眼观察 母种斜面背面外观 肉眼观察 杂菌菌落 肉眼观察，必要时用 5倍放大镜观察 培养基上表面距离瓶（袋）口的距离 肉眼观察或测量 气味 鼻嗅 DB51/T 18662014 6 6.3 菌丝生长速度 6.3.1 母种 附录 A 中规定的配方任选其一，在 25的温度条件下培养，记录菌丝长满斜面的天数。6.3.2 原种和栽培种 附录 B 中规定的配方任选其一，在 2325的温度条件下培养，记录菌丝长满容器的天数。6.4 母种栽培中的农艺性状和商品性状 将被检母种制成原种。在附录 B 中任选一个配方，制作菌袋（或用短段木）45 袋。接种后平均分三组进行常规管理，根据表 6 所列项目，做好栽培记录，统计检验结果。同时将该母种的出发菌株（选育单位提供的原始菌株）设为对照，亦做同样处理。对比二者的检验结果，以时间计的检验项目中，被检母种的任何一项时间较对照菌株推迟 5d 以上者，为不合格；产量显著低于对照菌株者，为不合格；灵芝外观形态与对照明显不同或畸形者，为不合格。表6 母种栽培性状检验记录 检验项目 检验结果 检验项目 检验结果 母种长满所需时间，d 总产，kg 原种长满所需时间，d 平均单产，kg 栽培种长满所需时间，d 生物学效率，%菌袋长满所需时间，d 灵芝外形 出第一潮芝所需时间，d 菌盖、菌柄色泽 第一潮芝产量，kg 菌盖直径、柄长、柄直径，6.5 留样 各级菌种要留样备查，留样的数量应每个批号取 3 支（瓶、袋）于 04下贮存，贮存至使用者在正常生产条件下该批菌种出第一潮灵芝。7 判定规则 判定规则按要求指标进行。检验项目全部符合要求指标时，为合格菌种。8 标签、标志、包装、运输、贮存 8.1 标签 8.1.1 产品标签 每支（瓶、袋）菌种要贴有清晰注明以下要素的标签：a）产品名称；b）品种名称；c）生产单位；d）接种日期；DB51/T 18662014 7 e）执行标准。8.1.2 包装标签 每件菌种要贴有清晰注明以下要素的包装标签：a）产品名称、品种名称；b）厂名、厂址、联系电话；c）出厂日期；d）贮存条件、保质期；e）数量；f）执行标准；g)菌种生产经营许可证编号。8.2 储运图示标志 按 GB/T 191 规定注明以下图示标志：a）小心轻放标志；b）防水、防潮、防冻标志；c）防晒、防高温标志；d）防止倒置标志；e）防止重压标志。8.3 包装 8.3.1 母种外包装采用木盒或有足够强度的纸箱，内部用棉花、碎纸、报纸等具有缓冲作用的轻质材料填满。8.3.2 原种、栽培种外包装采用纸箱或编织袋，并留有通气孔，内附产品合格证和使用说明（包括菌种种性、培养基配方及适用范围）。8.4 运输 8.4.1 不得与有毒、有害、有污染、有异味的物品混装、混运，不得挤压。8.4.2 在低于 30条件下运输。8.4.3 运输过程中应有防震、防晒、防雨淋、防冻、防杂菌污染的措施。8.5 贮存 8.5.1 母种在 04条件下贮存，贮存期不超过 60d。8.5.2 原种、栽培种菌丝长满后应尽快使用，若短期不用，应置于低温干燥、通风避光、清洁卫生的室内贮存。DB51/T 18662014 8 A A 附 录 A（规范性附录）母种常用培养基及其配方 A.1 PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH值自然。A.2 PDA麦麸培养基 马铃薯200g，麦麸50 g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH值自然。A.3 马铃薯蛋白胨培养基 马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，琼脂20g，水1000ml，pH值自然。DB51/T 18662014 9 B B 附 录 B（规范性附录）原种和栽培种常用培养基及其配方 B.1 木屑培养基 阔叶树木屑78%，麦麸20%，糖1%，石膏1%，含水量60%65%。B.2 木屑培养基 阔叶树木屑73%，玉米粉7%，麦麸13%，糖1%，石膏1%，含水量60%65%。B.3 棉籽壳木屑培养基 棉籽壳40%，阔叶树木屑40%，麦麸18%，糖1%，石膏1%，含水量60%65%。_ DB51/T 18662014