ICS 65.150CCS B 5254西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T 03282024 巨须裂腹鱼 2024-04-09发布 2024-05-09实施西藏自治区市场监督管理局发 布DB54/T 03282024I目 次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 主要形态结构特征.14.1 外部形态特征.14.2 内部结构特征.25 生长与繁殖.35.1 生长.35.2 繁殖.46 遗传学特征.46.1 细胞遗传学特征.46.2 生化遗传学特征.57 检测方法.57.1 抽样.57.2 性状测定.57.3 年龄鉴定.57.4 染色体检测.67.5 肾细胞醇脱氢酶（ADH）同工酶检测.68 检验规则与结果判定.6附录 A（资料性）生长方程、体长和体重关系式.7A.1 体长和体重生长方程.7A.2 体长与体重关系式.7附录 B（规范性）同工酶试剂的配制.8B.1 凝胶制备.8B.2 加样指示剂.8B.3 电极缓冲液.8B.4 染色液的配制.8DB54/T 03282024II前 言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由西藏自治区农业农村厅提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。本文件起草单位：西藏自治区畜牧总站、华中农业大学、四川律贝生物技术有限公司。本文件的主要起草人：林少卿、覃剑晖、霍斌、邵俭、马宝珊、谢从新、马徐发、尼玛群宗、拉巴次仁、央珍、边巴卓玛、杨君辉、程方方、次仁卓嘎、格桑达瓦、尼玛次仁、苏中华、党发发、马娇林、袁齐涛、孙锋博、于航、乐地、郭荣明、王润锦、吴海彬、石彬、邹雨婷、廖吕、张鑫崴、胡程鹏。DB54/T 032820241巨须裂腹鱼1范围本文件给出了巨须裂腹鱼（Schizothorax macropogon）的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性以及检测方法。本文件适用于巨须裂腹鱼的种质检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18654.1 养殖鱼类种质检验 第1部分：检验规则GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分：性状测定GB/T 18654.4 养殖鱼类种质检验 第4部分：年龄与生长的测定GB/T 18654.6 养殖鱼类种质检验 第6部分：繁殖性能的测定GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析GB/T 18654.13 养殖鱼类种质检验 第13部分：同工酶电泳分析3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1学名巨须裂腹鱼（Schizothorax macropogon）。3.2地方名胡子鱼。3.3分类位置硬骨鱼纲（Osteichthyes），鲤形目（Cypriniformes），鲤科（Cyprinidae），裂腹鱼亚科（Schizothoracinae），裂腹鱼属（Schizothorax）。4主要形态结构特征4.1外部形态特征4.1.1外形DB54/T 032820242体延长，稍侧扁，头锥形。吻端略宽扁。口下位，呈弧形。下颌角质不形成锐利锋缘。左右两侧叶细狭，表面具乳突。唇后沟中断。须2对，发达；上颌须末端后伸达前鳃盖骨之后，口角须末端后伸可达胸鳍基部。体鳞细小，胸部在接近鳃峡的一小部分区域裸露无鳞。背鳍刺强壮，其后侧缘具锯齿。腹鳍起点稍前于背鳍起点之下方。体背呈青灰色，体侧青黑色，腹部浅黄色，体侧有少数暗斑。巨须裂腹鱼的外形见图1。图1巨须裂腹鱼的外形图4.1.2可数性状4.1.2.1背鳍鳍式D.iii-784.1.2.2臀鳍鳍式A.iii-54.1.2.3第一鳃弓鳃耙数外侧鳃耙数：1524；内侧鳃耙数：2027。4.1.2.4鳞式9231332326v1014.1.3可量性状巨须裂腹鱼可量性状实测比例见表1.表1巨须裂腹鱼可量性状比例值比例性状 平均值（范围）比例性状 平均值（范围）体长/体高 4.5（4.14.9）头长/吻长 2.8（2.73.1）体长/头长 4.4（4.24.8）头长/眼径 5.8（5.66.2）体长/尾柄长 5.1（4.65.6）头长/眼间距 3.0（2.53.3）体长/尾柄高 9.2（8.610.4）尾柄长/尾柄高 1.7（1.52.0）4.2内部结构特征DB54/T 0328202434.2.1鳔鳔分两室。后室细长，其长度为前室长的2.53.1倍。4.2.2下咽齿下咽齿3行，235/532或234/432。下咽齿细圆，顶端尖而稍钩曲，咀嚼面凹入呈匙状。4.2.3脊椎骨脊椎骨总数：4850。4.2.4腹膜腹膜黑色。5生长与繁殖5.1生长雌鱼最大年龄24龄，雄鱼最大年龄27龄。依据664尾样本估算的不同年龄组的鱼体长和体重实测值见表2。生长方程和体长与体重关系式参见附录A。表2巨须裂腹鱼各年龄组的体长和体重实测值雌鱼 雄鱼龄组龄体长(平均 S.D.)mm体重(平均 S.D.)g体长(平均 S.D.)体重(平均 S.D.)g3 172.314.3 84.713.04 207.012.8 136.523.1 211.015.7 151.134.35 240.320.3 222.849.0 233.323.0 195.049.66 257.918.4 279.855.5 248.129.5 244.590.77 286.029.8 383.9127.8 288.638.1 401.9145.38 291.026.0 401.2101.2 300.828.0 453.4140.59 314.632.5 514.8145.4 317.139.8 533.5159.310 333.428.0 610.1131.9 361.327.5 785.2159.711 346.519.5 689.911.8 352.035.4 795.7269.412 348.722.4 721.5136.5 372.325.8 829.0159.013 351.223.6 721.0143.9 382.121.7 922.5136.914 362.525.0 803.6162.0 391.116.8 1031.5107.315 365.418.1 857.8177.3 397.523.4 1052.7141.616 378.722.4 876.8150.4 401.224.8 1092.988.517 360.412.8 808.9108.3 408.213.8 1225.0192.918 373.823.0 832.9141.0 415.719.7 1295.8166.419 384.011.3 1174.9236.8 425.920.6 1368.194.8DB54/T 03282024420 356.513.5 741.283.0 417.519.1 1374.958.321 421.0 985.8 422.823.7 1173.5223.422 388.0 1002.4 396.049.1 1187.1200.223 427.327.1 1366.9217.224 408.0 1065.3 389.541.7 1720.654.125 474.0 1772.126 404.0 1355.627 441.0 1693.55.2繁殖5.2.1性成熟年龄雌鱼为9龄，雄鱼为6龄。5.2.2产类类型性腺一年成熟一次，一次性产出。5.2.3繁殖期繁殖期为1月2月。5.2.4怀卵量依据71尾样本估算不同年龄组个体怀卵量见表3。表3巨须裂腹鱼不同年龄组的个体怀卵量年龄组龄体重范围g怀卵量（均值标准差）粒/尾12 911.01192.6 9778547614 1106.01132.3 1009914616 1074.61098.9 1055565218 1277.41531.5 1407839076遗传学特征6.1细胞遗传学特征染色体数：2n=98，核型公式：20m+28sm+22st+28t，臂数（NF）：146。染色体核型见图2。DB54/T 032820245图2巨须裂腹鱼肾细胞染色体组型图6.2生化遗传学特征肾细胞醇脱氢酶（ADH）酶带扫描图见图3。图3巨须裂腹鱼肾细胞醇脱氢酶（ADH）酶带扫描图7检测方法7.1抽样按GB/T 18654.2的规定执行。7.2性状测定按GB/T 18654.3的规定执行。7.3年龄鉴定采用耳石鉴定年龄。方法按GB/T 18654.4的规定执行。DB54/T 0328202467.4染色体检测按GB/T 18654.12的规定执行。7.5肾细胞醇脱氢酶（ADH）同工酶检测7.5.1试剂及配制方法同工酶各试剂的配制见附录A。7.5.2样品的采集与制备从尾静脉抽取2ml血，于4、1000r/min离心6min，取上清备用。7.5.3制胶将混匀的7.0%分离胶液倒入模板，插好梳子，置于36左右，待凝胶聚合好后，置于冰箱中备用。7.5.4点样点样量为20L。吸取20L样与2L3L加样指示剂混匀，一起加到样孔中。7.5.5电泳分离1）采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。分离胶浓度7.0%。2）电极缓冲液：pH为8.3的Tris-甘氨酸。3）电泳：稳压280V（起始电流约1824mA）电泳0.5h后，将电压调到220V，继续电泳5h6h（溴酚蓝跑出胶后2h以上）。4）染色：电泳结束，放入预先配好并在37恒温箱中保温的同工酶染色液中染色。8检验规则与结果判定按GB/T 18654.1的规定执行。DB54/T 032820247A A 附 录 A（资料性）生长方程、体长和体重关系式A.1体长和体重生长方程雌性和雄性群体的体长和体重生长方程分别见式（A.1）、（A.2）、（A.3）和（A.4）：雌性：Lt=446.01-e-0.190(t-0.576)（A.1）Wt=1310.01-e-0.190(t-0.576)2.937（A.3）雄性：Lt=428.51-e-0.218(t-0.218)（A.2）Wt=1247.81-e-0.218(t-0.218)2.867（A.4）式中：Ltt 龄时鱼体体长，mm；Wtt龄时鱼体体重，g；e自然对数；t鱼的年龄。A.2体长与体重关系式雌性和雄性群体的体长与体重关系式见（A.5）和（A.6）：雌性：W=2.47610-5L 2.937（A.5）雄性：W=3.55110-5L2.867（A.6）式中：W鱼体体重，g；L鱼体体长，mm。DB54/T 032820248B B 附 录 B（规范性）同工酶试剂的配制B.1凝胶制备B.1.1凝胶制备溶液配制各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表B.1。表B.1 各种凝胶制备溶液配方溶 液 配 制 方 法凝胶缓冲液取 Tris 56.75g加 200mL蒸馏水，用浓盐酸调 pH 为 8.9，加蒸馏水到 250mL。4贮存。凝胶储液取丙烯酰胺 33.3g，N，N 亚甲基双丙烯酰胺 0.9g，四甲基乙二胺（TEMED）338L溶于蒸馏水中定容到 150mL。4贮存。AP取过硫酸铵 1.5mg溶解到 100mL蒸馏水水中。4贮存。B.1.2凝胶的制备7.0%聚丙烯酰胺垂直版凝胶配方见表B.2。表B.2 7.0%凝胶制备配方凝胶缓冲液,mL凝胶储液mLAP mL纯水mL总体积mL2.4 12.6 2.4 22.6 40B.2加样指示剂0.15%溴酚蓝-50%甘油：称取0.15g溴酚蓝溶于50mL蒸馏水，再加50mL甘油混匀。B.3电极缓冲液电极缓冲液配制方法：取甘氨酸28.80g溶于800mL水，用约6.00g的Tris调pH至8.3，加蒸馏水到1000mL。电泳时稀释10倍使用。B.4染色液的配制B.4.1染色用各溶液配制见表B.3。表B.3 染色用溶液配方溶 液 配 制 方 法氯化硝基四氮唑蓝（NBT）300mg辅酶 1（NAD）500mg吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）20mgA水（H2O）100 mLB 乙醇DB54/T 032820249B.4.2染色液配方取A液10mL，B液4mL，H2O136mL，混合均匀。