ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 31912018 饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法 Determination of Tiamulin Fumarate in feed High performance liquid chromatography method 文稿版次选择 2018-08-08发布 2018-09-08实施安徽省质量技术监督局发布 DB34/T 31912018 I 前言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、宁国市金鼎家庭农场、宁国市金东坊农业开展有限公司、合肥市动物卫生监督所、阜阳市动物卫生监督所、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省水产技术推广总站。本标准起草人：吴昊、刘发全、李东风、宋亚伟、吴兵、方芳、郭恒心、徐月清、龙中原、胡群芳、张利亚、郑新勇、钱昌银、程扬、郑举、潘孝成、孙德祥、何为俊、王群、汪百才、石翠芳。DB34/T 31912018 1 饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定。本标准定量限为 1.0 mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 原理 试样中的延胡索酸泰妙菌素经甲醇溶液超声提取，过滤后经色谱柱分离，用高效液相紫外检测器检测，外标法定量。4 试剂和材料 除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合 GB/T 6682 中一级用水的规定。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 乙腈：色谱纯。4.3 碳酸铵。4.4 高氯酸。4.5 高氯酸水溶液：取高氯酸 8.5 mL，加水至 100 mL。4.6 碳酸铵缓冲液溶液：取碳酸铵 10 g，加水 800 mL 使溶解，加高氯酸水溶液（4.6）24 mL，加水至 1000 mL。4.7 流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比 492823（V/V/V）。4.8 延胡索酸泰妙菌素标准品：纯度98.0。4.9 延胡索酸泰妙菌素标准溶液的制备 4.9.1 延胡索酸泰妙菌素标准溶液贮备液：精确称取 20 mg 延胡索酸泰妙菌素标准品(精确至 0.01 mg)于 200 mL 容量瓶中，用流动相（4.8）超声溶解，冷却，此溶液浓度为 100 g/mL。置于 4冰箱中保存，有效期 60 天。4.9.2 延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液：分别吸取贮备液（4.10.1）1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL于 100 mL 容量瓶中，用流动相溶液（4.8）定容，标准工作溶液系列浓度分别为 1 g/mL、2 g/mL、5 g/mL、10 g/mL、20 g/mL。DB34/T 31912018 2 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪（配紫外检测器）。5.2 分析天平：感量 0.1 mg、0.01 mg。5.3 离心机：3000 r/min。5.4 超声波仪。5.5 分析筛：孔径 0.42 mm。5.6 粉碎机。5.7 微孔滤膜：孔径 0.45 m 尼龙滤膜。6 试样的制备 按 GB/T 14699.1 的规定采样，选取饲料样品 500 以上，四分法缩减至 100，磨碎，全部通过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7 分析步骤 7.1 提取 7.1.1 称取试样适量（配合饲料 5.0 g、浓缩饲料 3.0 g、预混合饲料 1.0 g），精确至 0.001g，置于50 mL 容量瓶中，用甲醇溶液（4.2）准确定容，置于超声波仪（5.4）超声提取 30 min。7.1.2 将试样提取液（7.1.1）转移至离心管，3000 r/min，离心 10 min，取离心上清液用 0.45 m尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。7.2 测定 7.2.1 高效液相色谱条件 色谱柱：C18型柱，长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m，或相当性能 C18柱；检测波长：212 nm；流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比 492823（V/V/V）；流速：1.0 mL/min；柱温：25；进样体积：20 L。7.2.2 上机测定 延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液和试液（上机液）分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。参见附录A。7.3 结果的计算与表述 7.3.1 计算公式 结果按公式(1)计算：DB34/T 31912018 3.(1)式中：X 试样中延胡索酸泰妙菌素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C 试液色谱峰对应的延胡索酸泰妙菌素浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m 试样质量，单位为克（g）；V 定容体积，单位为毫升（mL）；f 稀释倍数。7.3.2 结果表示 平行测定结果用算术平均值表示，计算结果保留 3 位有效数字。8 精密度 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于 10。DB34/T 31912018 4 A A 附 录 A（资料性附录）延胡索酸泰妙菌素标准图谱 图A.1 延胡索酸泰妙菌素标准溶液色谱图 _