ICS 67.050 X04 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3322 2018 蔬菜中甲拌磷等 7 种农药及代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 2018-06-12 发布 2018-07-12 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 3322 2018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省农业厅提出。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业环境保护和农村能源总站。本标准主要起草人：吴成、王蕾、赵志强、任海雷。DB37/T 3322 2018 1 蔬菜中甲拌磷等 7 种农药及代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了菠菜、豇豆、番茄、甘蓝、黄瓜和韭菜中甲拌磷等7种农药及代谢物(参见附录A)残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于菠菜、豇豆、番茄、甘蓝、黄瓜和韭菜中甲拌磷等7种农药及代谢物残留量的测定，其它蔬菜可参照执行。2 规范性引用 文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用乙腈匀浆提取，盐析离心后，取上清液，过滤后用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。4 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.1 试剂 a)乙腈(CH3CN，75-05-8)。b)甲醇(CH3OH，67-56-1)。c)甲酸(CH2O2，64-18-6)。d)醋酸铵(C2H7NO2，631-61-8)。e)氯化钠(NaCl，7647-14-5)，分析纯，140 烘烤 4 h。4.2 溶液配制 0.1%甲酸+5 mmol/L醋酸铵水溶液：准确移取1 mL甲酸和称取0.385 g醋酸铵于1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，现配现用。4.3 标准品 7种农药及代谢物标准品：纯度95%，标准品信息参照附录A。DB37/T 3322 2018 2 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶 液 分别准确称取适量（精确至0.1 mg）农药及代谢物标准品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成100 mg/L的标准储备溶液(或购买有证标准储备溶液)，0 4 保存，保存期为6个月。4.4.2 中间标准溶 液 准确吸取适量的标准储备溶液，用甲醇稀释配制成10 mg/L的7种农药及代谢物中间标准溶液，0 4 保存，保存期为1个月。4.4.3 混合标准工 作溶液 准确吸取适量的中间标准溶液，用甲醇稀释配制成所需浓度的混合标准工作溶液，现用现配。4.5 材料 微孔过滤膜：有机系，0.22 m。5 仪器和设备 a)液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；b)分析天平：感量 0.0001 g 和 0.01 g；c)组织捣碎机；d)旋涡混合器；e)均质器：转速不低于 15000 r/min；f)离心机：转速不低于 5000 r/min；6 试样制备 蔬菜样品取样部位按照GB 2763附录A执行，将样品切碎、混匀、均一化，制成匀浆，制备好的试样均分成两份，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。应将试样于-18 冷冻保存。7 分析步骤 7.1 提取 称取15 g试样（精确至0.01 g）于100 mL离心管中，加入30 mL乙腈，用均质器在12000 r/min匀浆提取2 min，加入 6 g氯化钠，再匀浆提取1 min，3500 r/min离心5 min，取上清液约2 mL，用0.22 m滤膜过滤，待测。7.2 测定 7.2.1 液相色谱 串联质谱 参考条件 a)色谱柱：Shim-pack XR-ODS色谱柱，50 mm 2.0 mm（i.d.），1.6 m，或相当者；b)流动相：A 为 0.1%甲酸+5 mmol/L 醋酸铵水溶液按 4.2 配制的溶液，B 为甲醇，梯度洗脱程序参照表 1，流速：0.35 mL/min；DB37/T 3322 2018 3 c)柱温：40；d)进样体积：10.0 L；e)扫描方式：正/负离子模式；f)检测方式：多反应监测(MRM)，多反应监测条件参照附录 B；g)加热块温度：400；h)脱溶剂管(DL)温度：250；i)干燥气（N2）流速：15.0 L/min，纯度99.999%；j)雾化气（N2）流速：3.0 L/min，纯度99.999%；k)电喷雾正离子源(ESI+)接口电压：4.5 kV，电喷雾负离子源(ESI-)接口电压：-3.5 kV；l)检测器电压：1.74 kV。表1 梯度洗脱程 序 时间/min A/%B/%0.5 90 10 2.0 50 50 5.0 50 50 9.0 5 95 11.5 5 95 13.0 90 10 注1：非商业性说明：以上质谱条件是在 SHIMADZU LCMS-8040 质谱仪上完成的，列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。7.2.2 定性测定 进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比进行比较，其允许偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在该农药及代谢物。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。表2 定性时相对 离子丰度 的最大允 许偏差 相对离子丰度 50%20%至 50%10%至 20%10%允许相对偏差 20%25%30%50%7.2.3 定量测定 本方法采用外标法单定量离子对定量测定。为减少基质的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液。标准溶液浓度应与待测物浓度相近。在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物响应值均应在仪器测定的线性范围。本方法的甲拌磷等 7 种农药及代谢物标准物质多反应监测色谱图参照附录 A中图A.1，质谱图参照附录 C。7.3 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。7.4 平行试验 DB37/T 3322 2018 4 按以上步骤对同一试样进行平行测定。8 结果计算和 表述 液相色谱-串联质谱测定结果可由计算机按外标法自动计算，也可按式(1)计算：132SV A VA m V.(1)式中：质量分数，指试样中各农药及代谢物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；标准溶液中农药及代谢物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；A 样品溶液中农药及代谢物的峰面积；AS农药及代谢物标准溶液中农药及代谢物的峰面积；V1提取溶剂总体积，单位为毫升（mL）；m试样的质量，单位为克（g）；V2样品溶液进样体积，单位为微升（L）；V3标准溶液进样体积，单位为微升（L）；注1：计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字，含量超过1 mg/kg 时表示到三位有效数字。9 精密度 a)在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），按照附录 E。b)在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），按照附录 F。10 定量限和回 收率 10.1 定量限 本方法的定量限(LOQ)参照附录 A。10.2 回收率 当添加水平为 LOQ、2LOQ、20LOQ 时，添加回收率参照附录 D。DB37/T 3322 2018 5 A A 附 录 A（资料性附 录）甲拌磷等 7 种农药及 代谢物中 英文名称、分子式、CAS 号、保 留 时间、定 量限和标 准物质 色谱图 甲拌磷等7种农药及代谢物中英文名称、分子式、CAS号、保留时间和定量限，参照表A.1。标准物质色谱图参照图A.1。表A.1 甲拌磷等 7 种农药及 代谢物中 英文名称、分子式、CAS 号、保留 时间和定 量限 序号 中文名称 英文名称 分子式 CAS号 保留时间（min）定量限（mg/kg）1 甲拌磷亚砜 Phorate-sulfoxide C7H17O4PS2 2588-05-8 5.68 0.005 2 甲拌磷砜 Phorate-sulfone C7H17O4PS3 2588-04-7 6.08 0.005 3 氟甲腈 Fipronil-desulfinyl C12H4Cl2F6N4 205650-65-3 8.33 0.005 4 氟虫腈 Fipronil C12H4Cl2F6N4OS 120068-37-3 8.45 0.005 5 氟虫腈硫醚 Fipronil-sulfide C12H4Cl2F6N4S 120067-83-6 8.55 0.005 6 氟虫腈砜 Fipronil-sulfone C12H4Cl2F6N4O2S 120068-36-2 8.69 0.005 7 甲拌磷 Phorate C7H17O2PS3 298-02-2 8.91 0.005 1-甲拌磷亚砜 2-甲拌磷砜 3-氟甲腈 4-氟虫腈 5-氟虫腈硫醚 6-氟虫腈砜 7-甲拌磷 图A.1 甲拌磷等 7 种农药及 代谢物标 准物质色 谱图 DB37/T 3322 2018 6 B B 附 录 B（资料性附 录）甲拌磷等 7 种农药及 代谢物监 测离子对、碰撞气 能量和碎 裂电压 甲拌磷等 7 种农药及代谢物监测离子对、碰撞气能量和碎裂电压，参照表 B.1。表B.1 甲拌磷等 7 种农药及 代谢物监 测离子对、碰撞气 能量和碎 裂电压 序号 化合物名称 电离模式 母离子 子离子 Q1/V CE/V Q3/V 相对离子强度/%1 甲拌磷亚砜+277 97*-13-34-19 86.8 143-30-20-15 2 甲拌磷砜+310 97*-16-30-19 88.8 143-30-22-27 3 氟甲腈-387 351*10 15 23 14.4 282 11 31 29 4 氟虫腈-435 330*20 15 23 38.1 250 20 30 25 5 氟虫腈硫醚-419 383*10 11 12 84.9 262 10 35 10 6 氟虫腈砜-451 282*10 27 17 23.8 244 13 45 10 7 甲拌磷+261 75*-18-11-29 11.7 97-13-29-18 注1：“+”和“-”分别指正、负离子模式，“*”指定量离子，“Q1”和“Q3”分别指质谱仪碰撞池前端和后端四极杆预杆偏置电压，“CE”指碰撞池电压，“相对离子强度”指定性参考离子与定量离子强度比。DB37/T 3322 2018 7 C C 附 录 C（资料性附 录）甲拌磷等 7 种农药及 代谢物标 准物质多 反应监测（MRM）质 谱图 7 种农药及代谢物标准物质多反应监测（MRM）质谱图，参照图 C.1图 C.7。8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 9.2 9.3 9.4 min025000500007500010000010:甲拌磷 261.0097.00(+)CE:-29.010:甲拌磷 261.0075.00(+)CE:-1 1.010:甲拌磷 TIC(+)75.0 80.0 85.0 90.0 95.0 m/z0.00.51.01.52.02.5Inten.(x100,000)75 图C.1 甲拌磷质谱 图 5.6 5.7 5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 min01000002000003000004000005000006:甲拌磷砜 310.00143.00(+)CE:-22.06:甲拌磷砜 310.0097.00(+)CE:-30.06:甲拌磷砜 TIC(+)100 110 120 130 m/z0.02.55.07.5Inten.(x100,000)97143 图C.2 甲拌磷砜质 谱图 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 6.0 min0250000500000750000100000012500005:甲拌磷亚砜 277.00143.00(+)CE:-20.05:甲拌磷亚砜 277.0097.00(+)CE:-34.05:甲拌磷亚砜 TIC(+)100 110 120 130 m/z0.000.250.500.751.001.25Inten.(x1,000,000)97 143 图C.3 甲拌磷亚 砜质谱图 DB37/T 3322 2018 8 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 min010000020000030000040000050000015:氟虫腈 435.00250.00(-)CE:30.015:氟虫腈 435.00330.00(-)CE:15.015:氟虫腈 TIC(-)250.0 275.0 300.0 m/z0.00.51.01.52.02.5Inten.(x1,000,000)330250 图C.4 氟虫腈质 谱图 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 min05000001000000150000014:氟甲腈 387.00351.00(-)CE:15.014:氟甲腈 387.00282.00(-)CE:31.014:氟甲腈 TIC(-)300.0 325.0 m/z0.01.02.03.04.05.0Inten.(x1,000,000)351282 图C.5 氟甲腈质谱 图 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 min02500005000007500001000000125000017:氟虫腈硫醚 419.00383.00(-)CE:1 1.017:氟虫腈硫醚 419.00262.00(-)CE:35.017:氟虫腈硫醚 TIC(-)275.0 300.0 325.0 350.0 m/z0.00.51.01.52.02.5Inten.(x1,000,000)383 262 图C.6 氟虫腈硫 醚质谱图 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 9.2 min02500005000007500001000000125000018:氟虫腈砜 451.00244.00(-)CE:45.018:氟虫腈砜 451.00282.00(-)CE:27.018:氟虫腈砜 TIC(-)250 260 270 m/z0.00.51.01.52.02.5Inten.(x1,000,000)282244 图C.7 氟虫腈砜质 谱图 DB37/T 3322 2018 9 D D 附 录 D（资料性附 录）甲拌磷等 7 种农药及 代谢物在 6 种蔬菜 中的添加 回收率 甲拌磷等 7 种农药及代谢物在 6 种蔬菜中的添加回收率，参照表 D.1。表D.1 甲拌磷 等 7 种农药及 代谢物 在 6 种蔬菜 中的添加 回收 率 化合物名称 添加水平（mg/kg）菠菜（%）豇豆（%）番茄（%）甘蓝（%）黄瓜（%）韭菜（%）甲拌磷亚砜 0.005 74112 74114 72104 78102 70106 76110 0.01 70103 77106 70100 75102 79107 72114 0.1 71109 82102 83109 80108 84104 78110 甲拌磷砜 0.005 78112 7698 76110 76110 74102 78106 0.01 83112 7596 73104 79106 79106 68107 0.1 81108 71109 79107 79109 84104 80108 甲拌磷 0.005 70104 68102 6896 7288 6092 60112 0.01 77101 6998 73104 7094 7490 79107 0.1 85111 79108 84105 78101 82103 80108 氟甲腈 0.005 78108 7490 68102 7294 70106 70110 0.01 82110 7192 75102 7398 79104 71108 0.1 83108 8599 89108 8298 82108 82109 氟虫腈 0.005 76108 7290 72108 74110 66110 70110 0.01 82101 7395 76103 77103 78109 68112 0.1 81107 7897 82108 79102 82105 79109 氟虫腈硫醚 0.005 74106 7694 72104 72104 66112 70106 0.01 77107 7193 75104 70105 79106 71107 0.1 77108 79102 86108 79108 82107 76107 氟虫腈砜 0.005 64110 7294 64114 7692 64106 70108 0.01 77104 7394 71103 7196 83102 75103 0.1 78109 85105 79107 81100 80111 84105 DB37/T 3322 2018 10 E E 附 录 E（规范性附 录）实验室内重 复性要求 被测组分含量（mg/kg）精密度（%）0.001 36 0.0010.01 32 0.011 22 0.11 18 1 14 DB37/T 3322 2018 11 F F 附 录 F（规范性附 录）实验室间再 现性要求 被测组分含量(mg/kg)精密度（%）0.001 54 0.0010.01 46 0.011 34 0.11 25 1 19 _