ICS 67.080 C 53 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 35342019 水中11 种除草剂及 代谢物残 留量的测 定 液相色谱-质谱/质 谱法 Determination of 11 herbicides and metabolites residues in water Liquid chromatography-mass spectrometry 2019-03-21 发布 2019-04-21 实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 35342019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 原理.1 4 试 剂与 材料.1 4.1 试剂.1 4.2 溶液 配制.1 4.3 标准 品.1 4.4 标准 溶液 配制.1 4.5 材料.2 5 仪 器和 设备.2 6 试样 制备.2 7 分析 步骤.2 7.1 提取 和净 化.2 7.2 定容.2 7.3 测定.2 7.4 平行 试验.3 7.5 空白 试验.3 8 结果 计算.3 9 精 密度.4 10 定量 限和 回收 率.4 10.1 定 量限.4 10.2 回 收率.4 附 录 A（资料 性附 录）质谱 仪参 数.5 附 录 B（资料 性附 录）11 种除 草剂 及代 谢物 中英文 名称、监 测离 子对、碰撞 电压 和保 留时 间 6 附 录 C（资料 性附 录）11 种除 草剂 及代 谢物 多反应 监测（MRM）色 谱图.7 附 录 D（规范 性附 录）实验 室重 复性 限（r）数据表.11 附 录 E（规范 性附 录）实验 室再 现性 限（R）数据表.12 附 录 F（资料 性附 录）11 种除 草剂 及代 谢物 添加水 平和 回收 率数 据.13 DB37/T 35342019 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.12009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 农业 农村 厅提出 并监 督实 施。本标准 由山 东省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山 东省 农药检 定所。本标准 主要 起草 人：周力、韩帅 兵、张耀 中、李向 阳、姜 士聚、吴 亚玉、迟 归兵、鞠易 明、杨 扬、林得平、于 淼。DB37/T 35342019 1 水中11 种除 草剂及 代谢物 残留量的 测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准 规定 了水 中11 种除 草剂及 代谢 物残 留量 的液 相色谱-质谱/质谱 检测 方法。本标准 适用 于地 表水 和地 下水中 莠去 津、脱乙 基莠 去津、脱异 丙基 莠去 津、羟基莠 去津、苯 磺 隆、苄嘧磺 隆、吡嘧 磺隆、异 噁草松、甲 草胺、乙 草胺 和丁草 胺残 留量 的测 定。2 规范性 引用 文件 下 列 文件 对于 本文 件的 应用 是 必不 可少 的。凡是 注日 期 的引 用文 件，仅所 注日 期 的版 本适 用于本文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分析 实验 室用水 规 格和 试验 方法 3 原理 水样中 残留 的除 草剂 及代 谢物经 聚合 物亲 水固 相萃 取小柱 富集，然 后用 有机 溶剂洗 脱，浓缩 定 容，用液相 色谱-质谱/质 谱仪 检测，外标 法定 量。4 试剂与 材料 除另有 规定 外，所有 试剂 均为分 析纯，水 为符 合GB/T 6682 中规 定的 一级 水。4.1 试剂 甲醇（CH3OH，65-56-1）：色谱 纯。4.2 溶液配 制 4.2.1 甲醇-水溶 液（5+95）：量取 10 mL 甲醇，加入 190 mL 水中，混 匀。4.2.2 0.02%甲 酸（HCOOH，64-18-6，色 谱纯）水 溶液（含 5 mmol/L 乙酸 铵）：准确 移取 0.2 mL 甲酸和称 取 0.385 g 乙酸 铵（CH3COONH4，631-61-8，色 谱 纯）于 1 000 mL 容量瓶 中，用 水定 容至 刻度，现配现 用。4.3 标准品 11种除 草剂 及代 谢物 标准 品：纯 度95%。4.4 标准溶 液配 制 4.4.1 标准储 备溶 液：分别 准确 称取适 量（精确 至 0.1 mg）11 种 除草 剂及 代谢 物标准 品于 10 mL 容量瓶中，用甲 醇溶 解并 定容 至刻度，配 制成 浓度 约 为100 mg/L 的 标准 储备 溶液，0 4 保 存，保存期为6 个 月。DB37/T 35342019 2 4.4.2 中 间 标准 溶液：准确 吸取适 量 标准 储备 溶液（4.4.1），用甲 醇稀 释配 制成 10 mg/L 的 中间 标准溶液，0 4 保 存，保存期 为 1 个 月。4.4.3 混合标 准工 作溶 液：准确 吸取适 量的 中间 标准 溶液（4.4.2），用甲 醇稀 释配制 成 所需 浓度 的混合标准 工作 溶液，现 配现 用。4.5 材料 4.5.1 有机滤 膜：0.22 m。4.5.2 聚合物 亲水 固相 萃取 小柱（Hypersep Retain PEP1)，500 mg，6 mL）。5 仪器和 设备 5.1 液相色 谱-质谱/质谱 仪：配有电 喷雾 离子 源（ESI）。5.2 分析天 平，感量 为 0.0001 g。5.3 氮吹仪。5.4 固相萃 取装 置。5.5 真空泵。5.6 量筒：50 mL。5.7 刻度离 心管：10 mL。6 试样制 备 取水样 品约1 L，将 样品 通 过定性 滤纸 过滤，分 三份 倒入洁 净的 聚四 氟乙 烯样 桶中，每份 约250 mL，密封并 做好 标识，于-18 以下 冷冻 保存。在试 样 制备过 程中，应防 止样 品 污染或 发生 残留 物含 量的 变化。7 分析步 骤 7.1 提取和 净化 7.1.1 依次用 甲醇 和水 各 3 mL 对SPE 小 柱（4.5.2）进行 预淋，使 每种 溶剂 在小 柱中 停留 3 min4 min。7.1.2 准确量 取 50.0 mL 水样 上柱，调节 固相 萃取 装置（5.4）压力 控制 阀，使水 样以 1 mL/min 2 mL/min的流速 通过 小柱，待 水样 全部通 过小 柱 后，继续 抽真 空约 1 min，然 后用 3 mL 甲醇 水溶 液（4.2.1）洗涤 小 柱，再抽 真空约 1 min，弃 去上 述溶 液，最后用 10 mL 甲 醇淋 洗小 柱，将淋洗 液 收集 于刻 度离 心管中。7.2 定容 在50 的 条件 下，将 淋洗 液以氮 气吹 干，用甲 醇定 容至1.0 mL，经0.22 m滤 膜（4.5.1）过 滤 后供液相 色谱-质谱/质谱 测定。7.3 测定 7.3.1 液相色 谱-质谱/质谱 参考 条件 1)Hypersep Retain PEP 柱是Thermo Fisher 产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。DB37/T 35342019 3 下列参 数不 是必 需的，可 视所用 仪器 不同 进行 优化：a)色谱柱：Shim-pack XR-ODS 2.0 mm（i.d）75 mm，1.6 m，或 相当 者；b)流动相及 梯度 洗脱 条件 见表 1；表1 流动相 及梯 度洗 脱条 件 时间/min 流速/（mL/min）流动相 A（甲醇）/%流动相 B（0.02%甲酸+5 mmol 乙酸铵水溶液）/%0.00 0.35 10 90 0.50 0.35 10 90 2.00 0.35 60 40 5.00 0.35 60 40 9.00 0.35 95 5 11.50 0.35 95 5 12.00 0.35 10 90 c)柱温：40；d)进样量：0.5 L；e)质谱仪 参数：参 见附 录 A；f)监测离 子对、碰 撞电 压：参见附 录 B。7.3.2 定性测 定 在相同 实验 条件 下，样液 中被测 物的 色谱 峰保 留时 间与标 准工 作液 相同，并 且在扣 除背 景后 的 试 样谱图中 所选择 的离 子对均 出现，各定性 离子 的相对 丰度与 标准品 离子 的相对 丰度相 比，偏 差不 超过 表2规定的 范围，则 可判 断样 品中存 在对 应的 被测 物。表2 定性测 定时 相对 离子 丰度 的最大 允许 偏差 相对离子丰度 50%20%至50%10%至20%10%允许的相对偏差 20%25%30%50%7.3.3 定量测 定 本标准 采用外 标-标 准曲 线 法定量 测定。用空 白样品 溶液配 制基质 混合 标准工 作溶液，以待 测 物峰面 积 为纵 坐标、基质 混合标 准 工作 溶液 浓度 为横 坐标，绘 制标 准工 作曲 线对样 品 进行 定量。样品 溶液中待测物 的响 应值 均应 在标 准工作 曲线 的线 性范 围以 内；如 果超 出线 性范 围，应 用空白 基质 溶液 进行 适 当稀释后 测定。11种 农药 及 代谢物 标准物 质的 参考 保 留时间 参见附 录B，液 相色谱-质谱/质 谱多 反应 监测（MRM）色 谱图 参见 附录C。7.4 平行试 验 按上述 步骤 对同 一试 样进 行平行 试验。7.5 空白试 验 用符合GB/T 6682中 规定 的 三级水 作为 空白 试样，按 上述步 骤进 行试 验。DB37/T 35342019 4 8 结果计 算 液相色 谱-质谱/质谱 测定 采用标 准工 作曲 线法 定量，试样 中每 种被 测组分 含量 按 式（1）计 算：10001000=VVC XSi i.(1)式中：Xi 试样 中每 种被 测组 分含量，单 位为 微克 每升（g/L）；VS 试样 溶液 最终 定容 体积，单位 为毫 升（mL）；Ci 从标 准工 作曲 线得 到的试 样溶 液中 每种 被测 组分浓 度，单位 为微 克每 升（g/L）；V 样品 溶液 所代 表的 试样体 积，单位 为毫 升（mL）。计算结 果应 扣除 空白 值，测定结 果用 平行 测定 的算 术平均 值表 示，保留 两位 有效数 字。9 精密度 9.1 在重复 性条 件下，两 次独 立测定 结果 的绝 对差 不大 于重复 性限（r），重 复性限（r）的 数据 见附录D。9.2 在再现 性条 件下，两 次独 立测定 结果 的绝 对差 不大 于再现 性限（R），再 现性限（R）的 数据 见附录E。10 定量限 和回 收率 10.1 定量限 本方法 中11 种除 草剂 及代 谢物在 水中 定量 限均 为0.1 g/L。10.2 回收率 本方法 中11 种除 草剂 及代 谢物的 添加 水平 和回 收率 范围见 附录F。DB37/T 35342019 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）质 谱 仪参数2)液相色 谱-质谱/质谱 仪的 质谱仪 参数：a)扫描方 式：正离 子扫 描；b)检测方 式：多反 应监 测；c)离子源：电 喷雾 离子 源（ESI）；d)电离电 压：4.0 kV；e)加热块 温度：400；f)温度：250；g)检测器 电压：1.74 kV；h)碰撞气：氩 气；i)碰撞气 压力：0.23 MPa j)雾化气 流速：3.0 L/min；k)干燥气 流速：10.0 L/min；l)加热气 流速：10.0 L/min。2)非商业性声明：所列参数是在岛津 LCMS-8050 液相色谱串联 质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。DB37/T 35342019 6 B B 附 录 B（资料 性附 录）11 种除 草剂 及代 谢物 中英文 名 称、监测 离子 对、碰撞 电 压和 保留 时间 11种除 草剂 及代 谢物 中英 文名称、监 测离 子对、碰 撞电压 和保 留时 间见 表B.1。表B.1 11 种除 草剂 及代 谢物 中英文 名 称、监测 离子 对、碰撞 电 压和 保留 时间 序号 中文名称 英文名称 保留时间/min 定量离子 碰撞电压/V 定性离子 碰撞电压/V 1 羟基莠去津 Hydroxyatrazin 2.30 198.00/156.10-23.0 198.00/86.05-17.0 2 脱异丙基莠去津 Atrazin-desisopropyl 2.72 174.00/104.05-25.0 174.00/68.05-28.0 3 脱乙基莠去津 Atrazin-desethyl 3.08 188.00/146.00-20.0 188.00/104.05-26.0 4 苯磺隆 Tribenuron-methyl 4.23 396.10/155.00-18.0 396.10/181.00-20.0 5 莠去津 Atrazine 4.38 216.10/174.00-19.0 216.10/104.00-28.0 6 苄嘧磺隆 Bensulfuron-methyl 5.07 411.00/149.00-20.0 411.00/182.00-20.0 7 异噁草松 Isooxadiazon 5.19 240.10/125.00-21.0 240.10/89.10-50.0 8 吡嘧磺隆 Pyrazosulfuron 7.02 415.00/182.00-21.0 415.00/83.00-51.0 10 乙草胺 Acetochlor 7.29 270.20/148.20-17.0 270.20/133.10-32.0 9 甲草胺 Alachlor 7.32 270.10/238.10-10.0 270.10/163.00-19.0 11 丁草胺 Machette 9.14 312.10/238.00-15.0 312.10/162.00-21.0 DB37/T 35342019 7 C C 附 录 C（资料 性附 录）11 种除 草剂 及代 谢物 多反应 监 测（MRM）色 谱图 11种除 草剂 及其 代谢 物多 反应监 测（MRM）色谱 图见图C.1 图C.11。2.00 2.25 2.50 2.75 3.0005000001000000150000020000002500000198.0086.05(+)198.00156.10(+)羟基莠去津100.0 125.0 150.0 m/z0255075100Inten.156.1086.05 图C.1 羟基莠 去津 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25050000100000150000200000250000300000350000174.00104.05(+)174.0068.05(+)脱异丙基莠去津60 70 80 90 100 110 m/z0255075100Inten.68.05104.05 图C.2 脱异丙 基莠 去津 2.75 3.00 3.25 3.50 3.750250000500000750000100000012500001500000188.00104.05(+)188.00146.00(+)脱乙基莠去津100.0 125.0 150.0 m/z0255075100Inten.146.00104.05 图C.3 脱乙基 莠去 津 DB37/T 35342019 8 4.00 4.25 4.50 4.750100000200000300000400000500000600000396.00181.00(+)396.10155.00(+)苯磺隆140 150 160 170 180 190 m/z0255075100Inten.155.00181.00 图C.4 苯磺隆 4.00 4.25 4.50 4.75 5.000500000100000015000002000000216.10104.00(+)216.10174.00(+)莠去津100.0 125.0 150.0 175.0 m/z0255075100Inten.174.00104.00 图C.5 莠去津 4.75 5.00 5.25 5.50 5.7502500005000007500001000000411.00182.00(+)411.00149.00(+)苄嘧磺隆140 150 160 170 180 m/z0255075100Inten.149.00182.00 图C.6 苄嘧磺 隆 DB37/T 35342019 9 5.00 5.25 5.50 5.75 6.0005000001000000150000020000002500000300000035000004000000240.1089.10(+)240.10125.00(+)异噁草松80 90 100 110 120 m/z0255075100Inten.125.0089.10 图C.7 异噁草 松 6.75 7.00 7.25 7.50025000050000075000010000001250000415.0083.00(+)415.00182.00(+)吡嘧磺隆75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 m/z0255075100Inten.182.0083.00 图C.8 吡嘧磺 隆 7.00 7.25 7.50 7.75 8.000250005000075000270.20133.10(+)270.20148.20(+)乙草胺125.0 130.0 135.0 140.0 145.0 150.0 m/z0255075100Inten.148.20133.10 图C.9 乙草胺 DB37/T 35342019 10 7.00 7.25 7.50 7.75 8.0002500005000007500001000000270.00162.00(+)270.10238.10(+)甲草胺150.0 175.0 200.0 225.0 m/z0255075100Inten.238.10162.00 图C.10 甲草胺 8.75 9.00 9.25 9.50050000100000150000200000250000300000350000312.10162.00(+)312.10238.00(+)丁草胺150.0 175.0 200.0 225.0 m/z0255075100Inten.238.00162.00 图C.11 丁草胺 DB37/T 35342019 11 D D 附 录 D（规范 性附 录）实验室 重复 性限（r）数据表 实验室 重复 性限（r）数 据 表见表D.1。表D.1 实验室 重复 性限（r）数据表 序号 农药名称 含量 g/L 重复性限 r 含量 g/L 重复性限 r 含量 g/L 重复性限 r 含量 g/L 重复性限 r 1 羟基莠去津 0.1 0.0116 0.5 0.0635 1.0 0.108 5.0 0.813 2 脱异丙基莠去津 0.1 0.0115 0.5 0.0925 1.0 0.169 5.0 0.712 3 脱乙基莠去津 0.1 0.0123 0.5 0.0819 1.0 0.171 5.0 0.736 4 苯磺隆 0.1 0.0133 0.5 0.104 1.0 0.246 5.0 1.22 5 莠去津 0.1 0.0120 0.5 0.0980 1.0 0.142 5.0 0.685 6 苄嘧磺隆 0.1 0.0114 0.5 0.0705 1.0 0.150 5.0 0.645 7 异噁草松 0.1 0.0153 0.5 0.148 1.0 0.153 5.0 0.959 8 吡嘧磺隆 0.1 0.0078 0.5 0.0665 1.0 0.108 5.0 0.624 9 乙草胺 0.1 0.0113 0.5 0.0896 1.0 0.188 5.0 0.740 10 甲草胺 0.1 0.0142 0.5 0.117 1.0 0.165 5.0 0.702 11 丁草胺 0.1 0.0109 0.5 0.0723 1.0 0.136 5.0 0.753 DB37/T 35342019 12 E E 附 录 E（规范 性附 录）实验室 再现 性限（R）数据表 实验室 再现 性限（R）数 据 表见表E.1。表E.1 实验室 再现 性限（R）数据表 序号 农药名称 含量 g/L 再现性限R 含量 g/L 再现性限R 含量 g/L 再现性限R 含量 g/L 再现性限R 1 羟基莠去津 0.1 0.0167 0.5 0.0678 1.0 0.265 5.0 0.948 2 脱异丙基莠去津 0.1 0.0143 0.5 0.0852 1.0 0.180 5.0 0.948 3 脱乙基莠去津 0.1 0.0142 0.5 0.0834 1.0 0.182 5.0 0.915 4 苯磺隆 0.1 0.0607 0.5 0.232 1.0 0.431 5.0 2.06 5 莠去津 0.1 0.0173 0.5 0.132 1.0 0.155 5.0 0.910 6 苄嘧磺隆 0.1 0.0205 0.5 0.0855 1.0 0.178 5.0 0.664 7 异噁草松 0.1 0.0141 0.5 0.136 1.0 0.218 5.0 1.12 8 吡嘧磺隆 0.1 0.0137 0.5 0.0741 1.0 0.178 5.0 0.701 9 乙草胺 0.1 0.0116 0.5 0.0840 1.0 0.200 5.0 0.779 10 甲草胺 0.1 0.0155 0.5 0.111 1.0 0.183 5.0 0.873 11 丁草胺 0.1 0.0136 0.5 0.0691 1.0 0.140 5.0 0.959 DB37/T 35342019 13 F F 附 录 F（资料 性附 录）11 种除 草剂 及代 谢物 添加水 平 和回 收率 数据 11种除 草剂 及代 谢物 添加 水平和 回收 率数 据见 表F.1。表F.1 11 种除 草剂 及代 谢物 在水中 加 标回 收率 情况 添加浓度 回收率（%）农药名称 0.1g/L 0.5g/L 1 g/L 5 g/L 羟基莠去津 85.493.0 89.894.1 99.7112.8 85.6 99.5 脱异丙基莠去津 80.890.3 85.793.2 93.6110.8 80.490.9 脱乙基莠去津 81.191.3 84.493.9 95.4113.8 79.993.2 苯磺隆 50.269.7 54.075.9 67.1103.0 61.979.1 莠去津 71.789.2 76.383.9 86.5103.9 80.298.7 苄嘧磺隆 79.289.0 89.592.7 86.7102.2 80.395.2 异噁草松 63.380.8 68.676.5 72.288.7 72.696.4 吡嘧磺隆 80.689.7 91.394.2 87.7103.4 82.196.3 乙草胺 70.279.8 68.380.2 79.092.9 77.397.8 甲草胺 68.380.5 71.879.7 78.094.0 77.098.5 丁草胺 49.563.2 59.665.4 61.277.7 57.568.8 _