ICS 67.050 X04 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3321 2018 蔬菜中涕灭威等 11 种农药及代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 2018-06-12 发布 2018-07-12 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 3321 2018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省农业厅提出。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业环境保护和农村能源总站。本标准主要起草人：吴成、王蕾、赵志强、任海雷。DB37/T 3321 2018 1 蔬菜中涕灭威等 11 种农药及代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了菠菜、豇豆、番茄、甘蓝、黄瓜和韭菜中涕灭威等 11 种农药及代谢物（参见附录 A)残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于菠菜、豇豆、番茄、甘蓝、黄瓜和韭菜中涕灭威等11种农药及代谢物残留量的测定，其它蔬菜可参照执行。2 规范性引用 文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用乙腈匀浆提取，盐析离心后，取上清液，过滤后用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。4 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.1 试剂 a)乙腈(CH3CN，75-05-8)。b)甲醇(CH3OH，67-56-1)。c)甲酸(CH2O2，64-18-6)。d)醋酸铵(C2H7NO2，631-61-8)。e)氯化钠(NaCl，7647-14-5)，分析纯，140 烘烤 4 h。4.2 溶液配制 0.1%甲酸+5 mmol/L醋酸铵水溶液：准确移取1 mL甲酸和称取0.385 g醋酸铵于1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，现配现用。4.3 标准品 11种农药及代谢物标准品：纯度95%，标准品信息参照附录A；DB37/T 3321 2018 2 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液 分别准确称取适量（精确至0.1 mg）农药及代谢物标准品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成100 mg/L的标准储备溶液(或购买有证标准储备溶液)，04 保存，保存期为6个月。4.4.2 中间标准溶液 准确吸取适量的标准储备溶液（4.4.1），用甲醇稀释配制成10 mg/L的7种农药及代谢物中间标准溶液，04 保存，保存期为1个月。4.4.3 混合标准工作溶液 准确吸取适量的中间标准溶液（4.4.2），用甲醇稀释配制成所需浓度的混合标准工作溶液，现用现配。4.5 材料 微孔过滤膜：有机系，0.22 m。5 仪器和设备 a)液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；b)分析天平：感量 0.0001 g 和 0.01 g；c)组织捣碎机；d)旋涡混合器；e)均质器：转速不低于 15000 r/min；f)离心机：转速不低于 5000 r/min；6 试样制备 蔬菜样品取样部位按照GB 2763附录A执行，将样品切碎、混匀、均一化，制成匀浆，制备好的试样均分成两份，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。应将试样于-18 冷冻保存。7 分析步骤 7.1 提取 称取15 g试样（精确至0.01 g）于100 mL离心管中，加入30 mL乙腈，用均质器在12000 r/min匀浆提取2 min，加入 6 g氯化钠，再匀浆提取1 min，3500 r/min离心5 min，取上清液约2 mL，用0.22 m滤膜过滤，待测。7.2 测定 7.2.1 液相色谱 串联质谱 参考条件 a)色谱柱：Shim-pack XR-ODS色谱柱，50 mm 2.0 mm（i.d.），1.6 m，或相当者。DB37/T 3321 2018 3 b)流动相：A 为 0.1%甲酸+5 mmol/L 醋酸铵水溶液（4.2），B 为甲醇，梯度洗脱程序参照表 1，流速：0.35 mL/min；c)柱温：40；d)进样体积：10.0 L；e)扫描方式：正/负离子模式；f)检测方式：多反应监测(MRM)，多反应监测条件参照附录 B；g)加热块温度：400；h)脱溶剂管(DL)温度：250；i)干燥气（N2）流速：15.0 L/min，纯度99.999%；j)雾化气（N2）流速：3.0 L/min，纯度99.999%；k)电喷雾正离子源(ESI+)接口电压：4.5 kV；电喷雾负离子源(ESI-)接口电压：-3.5 kV；l)检测器电压：1.74 kV。表1 梯度洗脱程 序 时间/min A/%B/%0.5 90 10 2.0 50 50 5.0 50 50 9.0 5 95 11.5 5 95 13.0 90 10 注1：以上质谱条件是在 SHIMADZU LCMS-8040 质谱仪上完成的，列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。7.2.2 定性测定 进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比进行比较，其允许偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在该农药及代谢物。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。表2 定性时相对 离子丰度 的最大允 许偏差 相对离子丰度 50%20%至 50%10%至 20%10%允许相对偏差 20%25%30%50%7.2.3 定量测定 本方法采用外标法单定量离子对定量测定。为减少基质的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液。标准溶液浓度应与待测物浓度相近。在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物响应值均应在仪器测定的线性范围。本方法的甲拌磷等 7 种农药及代谢物标准物质多反应监测色谱图参照附录 A中图A.1，质谱图参照附录 C。7.3 空白试验 DB37/T 3321 2018 4 除不称取试样外，均按上述步骤进行。7.4 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行测定。8 结果计算和 表述 液相色谱-串联质谱测定结果可由计算机按外标法自动计算，也可按式(1)计算：132SV A VA m V.(1)式中：质量分数，指试样中各农药及代谢物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；标准溶液中农药及代谢物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；A 样品溶液中农药及代谢物的峰面积；AS农药及代谢物标准溶液中农药及代谢物的峰面积；V1提取溶剂总体积，单位为毫升（mL）；m试样的质量，单位为克（g）；V2样品溶液进样体积，单位为微升（L）；V3标准溶液进样体积，单位为微升（L）；计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保 留两位有效数字，含量超过1 mg/kg 时表示到三位有效数字。9 精密度 a)在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），按照附录 E。b)在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），按照附录 F。10 定量限和回 收率 10.1 定量限 本方法的定量限(LOQ)参照附录 A。10.2 回收率 当添加水平为 LOQ、2LOQ、20LOQ 时，添加回收率参照附录 D。DB37/T 3321 2018 5 A A 附 录 A（资料性附 录）涕灭威等 11 种农药及 代谢物中 英文名称、分子式、CAS 号、保 留时间、定量限 和 标准物 质色谱图 涕灭威等11种农药及代谢物中英文名称、分子式、CAS号、保留时间和定量限，参照表A.1。标准物质色谱图参照图A.1。表A.1 涕灭威等 11 种农药及 代谢物中 英文名称、分子式、CAS 号、保 留时间和 定量限 序号 中文名称 英文名称 分子式 CAS号 保留时间/min 定量限/(mg/kg)1 乙酰甲胺磷 Acephate C4H10NO3PS 30560-19-1 1.31 0.005 2 涕灭威亚砜 Aldicarb-sulfoxide C7H14N2O3S 1646-87-3 2.00 0.005 3 3-羟基克百威 3-Hydroxycarbofuran C12H15NO4 16655-82-6 3.03 0.005 4 涕灭威 Aldicarb C7H14N2O2S 116-06-3 3.59 0.005 5 水胺硫磷 Isocarbophos C11H16NO4PS 24353-61-5 6.67 0.005 6 嘧菌酯 Azoxystrobin C22H17N3O5 131860-33-8 7.47 0.005 7 除虫脲 Diflubenzuron C14H9ClF2N2O2 35367-38-5 8.45 0.005 8 甲基异柳磷 Isofenphos-methyl C14H22NO4PS 99675-03-3 8.56 0.005 9 苯醚甲环唑 Difenoconazole C19H17Cl2N3O3 119446-68-3 9.04 0.005 10 二甲戊乐灵 Pendimethalin C13H19N3O4 40487-42-1 9.72 0.005 11 阿维菌素 Abamectin C49H74O14 71751-41-2 10.18 0.005 DB37/T 3321 2018 6 1-乙酰甲胺磷 2-涕灭威亚砜 3-3-羟基克百威 4-涕灭威 5-水胺硫磷 6-嘧菌酯 7-除虫脲 8-甲基异柳磷 9-苯醚甲环唑 10-二甲戊乐灵 11-阿维菌素 图A.1 涕灭威等 11 种农药及 代谢物标 准物质色 谱图 DB37/T 3321 2018 7 B B 附 录 B（资料性附 录）涕灭威等 11 种农药及 代谢物监 测离子对、碰撞气 能量和碎 裂电压 涕灭威等11种农药及代谢物监测离子对、碰撞气能量和碎裂电压，参照表B.1。表B.1 涕灭威等 11 种农药及 代谢物监 测离子对、碰撞气 能量和碎 裂电压 序号 化合物名称 电离模式 母离子 子离子 Q1/V CE/V Q3/V 相对离子强度/%1 乙酰甲胺磷+201 143*-30-15-30 11.1 125-30-21-13 2 涕灭威亚砜+224 89*-24-19-18 11.6 132-24-22-25 3 3-羟基克百威+238 163*-16-14-30 74.5 181-16-11-20 4 涕灭威+208 89*-13-15-18 37.7 116-13-15-24 5 嘧菌酯+404 344*-15-28-15 74.9 372-15-28-15 6 水胺硫磷+307 231*-23-14-26 54.5 273-30-7-29 7 除虫脲-309 156 30 19 26 71.9 289*14 17 17 8 甲基异柳磷+332 231*-22-17-25 11.4 273-22-14-14 9 苯醚甲环唑+406 251*-27-27-28 19.3 111-27-55-20 10 二甲戊乐灵+282 212-15-30-15 57.2 194*-15-30-15 11 阿维菌素+895.5 751.5-32-50-15 81.1 449.3*-32-50-22 DB37/T 3321 2018 8 C C 附 录 C（资料性附 录）涕灭威等 11 种农药及 代谢物标 准物质多 反应监测（MRM）质谱图 涕灭威等11种农药及代谢物标准物质多反应监测（MRM）质谱图，参照图C.1图C.11。0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 min02500050000750001:乙酰甲胺磷 201.00143.00(+)CE:-15.01:乙酰甲胺磷 201.00125.00(+)CE:-21.01:乙酰甲胺磷 TIC(+)125.0 130.0 135.0 140.0 m/z0.02.55.0Inten.(x10,000)125 图C.1 乙酰甲胺磷 质谱图 1.8 1.9 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 min02500050000750005:涕灭威亚砜 224.0089.00(+)CE:-19.05:涕灭威亚砜 224.00132.00(+)CE:-22.05:涕灭威亚砜 TIC(+)90 100 110 120 m/z0.01.02.03.0Inten.(x10,000)89132 图C.2 涕灭威亚砜 质谱图 2.8 2.9 3.0 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 min02500050000750009:3-羟基克百威 238.00163.00(+)CE:-14.09:3-羟基克百威 238.00181.00(+)CE:-1 1.09:3-羟基克百威 TIC(+)165.0 170.0 175.0 m/z0.01.02.03.04.0Inten.(x10,000)163 图C.3 3-羟基克百 威质谱图 DB37/T 3321 2018 9 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 4.0 4.1 4.2 min0500001000001500002000002500003000003500004:涕灭威 208.0089.00(+)CE:-15.04:涕灭威 208.00116.00(+)CE:-15.04:涕灭威 TIC(+)90 100 110 m/z0.00.51.01.52.02.5Inten.(x100,000)89116 图C.4 涕灭威质谱 图 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 min050000100000150000200000250000 7:水胺硫磷 307.00273.00(+)CE:-7.07:水胺硫磷 307.00231.00(+)CE:-14.07:水胺硫磷 TIC(+)230 240 250 260 m/z0.00.51.01.5Inten.(x100,000)231273 图C.5 水胺硫磷质 谱图 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 min01000002000003000004000008:嘧菌酯 404.00344.00(+)CE:-28.08:嘧菌酯 404.00372.00(+)CE:-28.08:嘧菌酯 TIC(+)350 360 m/z0.00.51.01.52.0Inten.(x100,000)344372 图C.6 嘧菌酯质谱 图 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 min0250050007500100001250016:除虫脲 309.00289.00(-)CE:10.016:除虫脲 309.00156.00(-)CE:1 1.016:除虫脲 TIC(-)200 250 m/z0.02.55.07.5Inten.(x1,000)289156 图C.7 除虫脲质谱 图 DB37/T 3321 2018 10 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 min0250000500000750000100000012500009:甲基异柳磷 332.00231.00(+)CE:-17.09:甲基异柳磷 332.00273.00(+)CE:-14.09:甲基异柳磷 TIC(+)230 240 250 260 m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x1,000,000)231273 图C.8 甲基异柳磷 质谱图 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 9.2 9.3 9.4 9.5 min05000010000015000020000025000011:苯醚甲环唑 406.00111.00(+)CE:-55.011:苯醚甲环唑 406.00251.00(+)CE:-27.011:苯醚甲环唑 TIC(+)150 200 m/z0.00.51.01.52.0Inten.(x100,000)251111 图C.9 苯醚甲环唑 质谱图 9.2 9.3 9.4 9.5 9.6 9.7 9.8 9.9 10.0 10.1 min010002000300040005000600012:二甲戊乐灵 282.00194.00(+)CE:-30.012:二甲戊乐灵 282.00212.00(+)CE:-30.012:二甲戊乐灵 TIC(+)195.0 200.0 205.0 210.0 m/z0.01.02.03.0Inten.(x1,000)194 图C.10 二甲戊乐灵 质谱图 9.8 9.9 10.0 10.1 10.2 10.3 10.4 10.5 10.6 10.7 min010002000300040005000600013:阿维菌素 895.50449.30(+)CE:-50.013:阿维菌素 895.50751.50(+)CE:-50.013:阿维菌素 TIC(+)500 600 700 m/z0.01.02.03.0Inten.(x1,000)449 751 图C.11 阿维菌素质 谱图 DB37/T 3321 2018 11 D D 附 录 D（资料性附 录）涕灭威等 11 种农药及 代谢物在 6 种蔬菜 中的添加 回收率 涕灭威等11种农药及代谢物在6种蔬菜中的添加回收率，参照表D.1。表D.1 涕灭威等 11 种农药及 代谢物在 6 种蔬菜 中的添加 回收率 化合物名称 添加水平(mg/kg)菠菜（%）豇豆（%）番茄（%）甘蓝（%）黄瓜（%）韭菜（%）乙酰甲胺磷 0.005 6484 6290 6288 6686 6294 6484 0.01 6687 6689 6389 71101 6883 6698 0.1 72106 7492 71111 7092 7590 7697 涕灭威亚砜 0.005 6280 6690 6686 7094 64106 6686 0.01 7090 80105 6999 7799 7093 64110 0.1 7092 66109 79103 79107 79109 89105 3-羟基克百威 0.005 6484 74100 68104 76114 64120 66108 0.01 69111 73108 7293 81109 75100 70110 0.1 76109 74111 78102 78106 78109 71115 涕灭威 0.005 70104 74106 74110 72106 64104 7298 0.01 61113 68109 74108 73113 79113 66108 0.1 74106 74108 78115 70118 74110 78111 水胺硫磷 0.005 70118 72104 74104 72108 66104 70104 0.01 65101 68106 72108 71113 72104 6998 0.1 75108 76109 76110 77114 78111 79103 嘧菌酯 0.005 72108 76106 74106 7698 7296 7098 0.01 67112 71104 75106 76108 76100 69101 0.1 77104 81105 89107 82104 82102 80109 甲基异柳磷 0.005 7086 6880 6690 6488 66102 7090 0.01 81110 7298 73108 7797 7495 68113 0.1 84110 76106 84108 7896 82105 80107 苯醚甲环唑 0.005 72114 72100 68112 7292 72106 68106 0.01 68110 6897 73111 7191 7893 6999 0.1 75109 82110 83110 72102 84110 81106 二甲戊乐灵 0.005 72108 68108 76118 7296 72110 70104 0.01 68114 69104 76110 7098 70106 70109 0.1 78109 76108 84112 7398 74109 76113 阿维菌素 0.005 72112 68114 6494 72108 70114 6494 0.01 86118 76117 7599 73104 7495 72109 0.1 90107 83110 89114 90116 87114 86114 DB37/T 3321 2018 12 表D.1 涕灭 威等11 种 农药及代 谢物在6 种蔬菜中 的添加回 收率（续）化合物名称 添加水平(mg/kg)菠菜（%）豇豆（%）番茄（%）甘蓝（%）黄瓜（%）韭菜（%）除虫脲 0.005 74116 72106 74112 70108 68104 62108 0.01 75109 68111 70115 71113 74106 69110 0.1 73109 77111 77109 73111 80101 77111 DB37/T 3321 2018 13 E E 附 录 E（规范性附 录）实验室内重 复性要求 表E.1 实验室内重 复性要求 被测组分含量(mg/kg)精密度%0.001 36 0.0010.01 32 0.01 1 22 0.11 18 1 14 DB37/T 3321 2018 14 F F 附 录 F（规范性附 录）实验室间再 现性要求 表F.1 实验室间再 现性要求 被测组分含量(mg/kg)精密度%0.001 54 0.0010.01 46 0.01 1 34 0.11 25 1 19 _