ICS 65.020 B 01 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 33682018 葡萄抗霜 霉病鉴定 技术规程 Rule for evaluation of grape for resistance to downy mildew 2018-07-19 发布 2018-08-19 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 33682018 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。本标准 由山 东省 农业 厅提 出。本标准 由山 东省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山 东省 农业科 学院 植物 保护 研究 所。本标准 主要 起草 人：张眉、辛相 启、吴斌、姜 珊珊、王升 吉、赵玖 华。DB37/T 33682018 1 葡 萄抗霜 霉病鉴定 技术规 程 1 范围 本标准 规定 了葡 萄抗 霜霉 病鉴定 的术 语和 定义、接 种体制 备、鉴定 条件 及试 验 设 计、接种、病情调查、抗 病性 评价 和鉴 定记 载表格。本标准 适用 于各 种葡 萄资 源对葡 萄霜 霉病 抗性 的鉴 定及评 价。2 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 标准。2.1 抗病性 植物体 所具 有的 能够 减轻 或克服 病原 物致 病作 用的 可遗传 性状。2.2 抗病性 鉴定 通过适 宜技 术方 法鉴 定植 物对特 定病 害的 抵抗 水平。2.3 抗性评 价 根据采 用的 技术 标准 判别 植物对 特定 病害 反应 程度 和抵抗 水平 的描 述。2.4 致病性 病原物 所具 有的 破坏 寄主 和引起 病变 的能 力。2.5 人工接 种 用于接种 以引起 病害的 病 原物或病 原物的 一部分。本标准接 种体为 新鲜的 葡 萄生单轴 霜霉菌 孢子囊。2.6 病情级 别 人为定 量植 物个 体或 群体 发病程 度的 数值 化描 述。DB37/T 33682018 2 2.7 接种体 用于接种 以引起 病害的 病 原物或病 原物的 一部分。本标准接 种体为 新鲜的 葡 萄生单轴 霜霉菌 孢子囊。2.8 接种体 悬浮 液 用于接 种的 含有 定量 接种 体的液 体。2.9 病情指 数 通过对 植物 个体 发病 程度（病情 级别）数 值的 计算 所获得 的群 体发 病程 度的 数值化 描述 形式。2.10 葡萄霜 霉病 由葡萄生 单轴霜 霉菌Plasmopara viticola(Berk.&Curt.)Berl.&de Toni所引起 的以叶 部产生受 叶脉 限制 的多 角形 黄褐色 病斑 症状，后 期叶 背病斑 产生 白色 霜状 霉层 的葡萄 病害。3 接种体 制备 3.1 病原物 采集 从田间 采集 新鲜 的葡 萄霜 霉病病 叶，在流 水下 用毛 笔刷除 病斑 上的 霉层，用 吸水纸 将叶 背表 面 的 水分吸干，叶 背朝 上放 置在 底部覆 盖有 浸水 纱布 的保 湿盘内，用PE保鲜 膜密 封后 置 于人 工气 候培 养箱中，22，相对 湿度（RH）90%，黑暗/光照12 h/12 h 交替保 湿培养，待 长出白 色霜状 霉层后，用 干净 毛笔 蘸 取蒸 馏水 将病 斑上 新形 成 的孢 子囊 刷于 水中，获 得 分离 物。分离 物经 鉴定 确 认为 葡萄 生单轴霜霉菌后，稀 释至 接种 浓度 用于 接种。3.2 接种体 繁殖 和保 存 3.2.1 接种体 繁殖 在田间 病原 物少 的情 况下 需要进 行病原 物接 种体 的繁 殖。常 用的 繁殖 方法 有活体 繁 殖法 和离 体繁殖法。活体 繁殖 法是 将霜 霉病 菌 接种 在预 先种 植的 健康 感 病品 种叶 片上 繁殖；离 体 繁殖 法是 将霜霉病菌接种在离 体健 康感 病品 种叶 片上繁 殖。接种 前用 干净 毛 笔蘸取 蒸馏 水将 叶片 上长 出的新 鲜孢 子囊 刷于 盛 水烧杯内，经 充分 混匀 即得 孢子囊 悬浮 液。3.2.2 病原物 保存 3.2.2.1 寄主活 体保 存：在适 宜环 境条件 下，定期 将霜 霉病 菌人工 接种 于感 病葡 萄品 种并保 存于 寄主上。3.2.2.2 离体病 叶保 存：取新 鲜的 霜霉病 病叶 直接 放于-80 保存，30 d 后 孢子 囊仍具 有 致病 力。DB37/T 33682018 3 4 室内抗 性鉴 定 4.1 鉴定室 设置 人工接 种鉴 定室 应具 备人 工调节 温度、湿 度及 光照 的条件，使 人工 接种 后具 备良好 的发 病环 境。4.2 鉴定对 照品 种 鉴定时 可选 用“摩尔 多瓦（Moldova）”为抗 病对 照 品种，“泽 香（Zexiang）”为 感病 对照 品种。4.3 鉴定设 计 鉴定材 料随 机排 列，每个 品种重 复3 次，每 重复10 个 叶盘。4.4 鉴定材 料选 择 选取当 年生 葡萄 枝条 自生 长点向 下第3位 4位健 康无 病 完全 展开 叶片，用直径 为1.5 cm 的 打孔 器打取叶盘。4.5 接种 4.5.1 接种浓 度 在光学显 微镜下用血球计数板计数 葡萄霜霉病菌孢子囊，用 蒸馏水调至约为1105个孢子 囊/mL 用于接种。4.5.2 接种方 法 采用点 接接 种法。在 直径 为9 cm 的塑 料培 养皿 底部 铺一层 吸水 纸，加入2 mL 无 菌 水以 保湿，将叶盘背面朝 上随 机摆 放在 吸水 纸上。用微 量移 液器 吸取 接 种体悬 浮液 接种 于叶 盘背 面，每 个叶 盘接 种20 L。4.5.3 接种后 管理 接种后将培养 皿置于鉴 定 室内，22，RH=90%，黑 暗/光照12 h/12 h交替 保湿培养。接 种48 h后，用 吸水 纸将 接种 菌液 吸净。每天 观察 培养 皿内 吸水纸 的干 湿情 况，需及 时补水 保湿。5 田间抗 性鉴 定 5.1 鉴定田 块设 置 鉴定田 块应 具备 适宜 葡萄 生长的 土壤、良 好的 光温 湿条件，使 人工 接种 后具 有良好 的发 病环 境。5.2 鉴定对 照 品种 鉴定时 可选 用“摩尔 多瓦（Moldova）”为抗 病对 照 品种，“泽 香（Zexiang）”为 感病 对照 品种。5.3 鉴定设 计 鉴定材 料随 机选 取，每个 品种重 复3 次，每 重复6个 叶片。5.4 鉴定材 料选 择 选取当 年生 葡萄 枝条 自生 长点向 下连 续第3位 8位 健康无 病完 全展 开叶 片。DB37/T 33682018 4 5.5 接种 5.5.1 接种浓 度 在光学显 微镜下用血球计数板计数 葡萄霜霉病菌孢子囊，用 蒸馏水调至约为1105个孢子 囊/mL 用于接种。5.5.2 接种方 法 采用喷 雾接 种法。在 阴凉 无风的 天气 条件 下，用手 持喷雾 器向 葡萄 叶片 背面 喷施接 种体 悬浮 液 布 满叶背。5.5.3 接种后 管理 接种后 用塑 料袋 将接 种枝 条罩起，保 湿约16 h 后去 除塑料 袋。6 病情调 查 6.1 调查时 间 室内、田间 病情 调查 分别 于接种 后7 d、15 d进 行。6.2 调查方 法 调 查 每份 鉴定 材料 接种 叶片（叶盘）发 病情 况，根据 病 害症 状描 述，逐份 材料 进 行调 查，记载病情级别，计算 出病 情指 数（DI）。病情 指数 按公 式（1）计算：100snDINS=（）.(1)式中：DI 病 情指 数；s 各 病情 级别 代表 数值；n 各 病情 级别 病叶（叶盘）数；N 调 查总 叶（叶盘）数；S 最高 病 情级 别代 表值。6.3 病情分 级 6.3.1 室内病 情分 级及 其对 应的 症状描 述见 表1。表1 葡萄霜 霉病 室内 病情 级别 划分 病情级别 症状描述 0 叶盘无症状 1 病斑面积占叶盘面积 5%以下 3 病斑面积占叶盘面积 6%20%5 病斑面积占叶盘面积 21%50%7 病斑面积占叶盘面积 51%以上 DB37/T 33682018 5 6.3.2 田间病 情分 级及 其对 应的 症状描 述见 表2。表2 葡萄霜 霉病 田间 病情 级别 划分 病情级别 症状描述 0 叶片无症状 1 病斑面积占叶面积 5%以下 3 病斑面积占叶面积 6%25%5 病斑面积占叶面积 26%50%7 病斑面积占叶面积 51%75%9 病斑面积占叶面积 76%以上，或叶片枯死脱落 7 抗性评 价 7.1 鉴定有 效性 判别 当感病 对照 材料 达到 其相 应感病 程度（DI 50），该批次 抗霜 霉病 鉴定 视为 有效。7.2 抗性评 价标 准 依据鉴 定材 料的 发病 程度（病情 指数）确 定其 对霜 霉病的 抗性 水平，划 分标 准见表3。表3 葡萄对 霜霉 病抗 性评 价标 准 病情指数 抗性评价 DI=0 免疫（I）0 DI5 高抗（HR）5 DI2 5 抗病（R）25DI 50 感病（S）50DI 10 0 高感（HS）8 鉴定记 载表 格 葡萄抗 霜霉 病鉴 定结 果记 载表格 见表4。DB37/T 33682018 6 表4 葡萄抗 霜霉 病鉴 定结 果记 载表 编号 品种名称 病情级别 病情指数 抗性评价 总数 0 级 1 级 3 级 5 级 7 级 9 级 接种时间：调查时间：调查员（签字）：鉴定技术负责人（签字）：_