I C S 65.020.2 0B 05DB14山 西 省 地 方 标 准D B 1 4/T 9 1 3 2 0 1 4绿 叶 葱 类 蔬 菜 中 多 菌 灵、吡 虫 啉 等 农 药多 残 留 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法2 0 1 4-1 1-3 0 发 布 2 0 1 4-1 2-3 0 实 施山 西 省 质 量 技 术 监 督 局发 布DB14/T 913 2014I目 次前 言.III1 范 围.12 规 范 性 引 用 文 件.13 原 理.14 试 剂 和 材 料.15 仪 器 设 备.26 分 析 步 骤.26.1 试 样 制 备.26.2 提 取.36.3 净 化.36.4 色 谱 参 考 条 件.36.5 色 谱 分 析.47 结 果 计 算.48 精 密 度.49 色 谱 图.4附 录 A(资 料 性 附 录).6DB14/T 913 2014I I前 言本 标 准 按 GB/T 1.1-2009 给 出 的 规 则 编 写。本 标 准 由 山 西 省 农 业 厅 提 出 并 归 口。本 标 准 起 草 单 位：山 西 省 农 产 品 质 量 安 全 检 验 监 测 中 心、运 城 市 农 产 品 质 量 安 全 检 验 监 测 中 心。本 标 准 主 要 起 草 人：阎 会 平、苏 菊 萍、吴 铁 茜、王 洁 莲、董 燕 飞、张 璇、张 建 新、张 子 伦、田 子 卿、常 宏、何 锦 惠。DB14/T 913 20141绿 叶 葱 类 蔬 菜 中 多 菌 灵、吡 虫 啉 等 7 种 农 药 残 留 量 的 测 定 高 效 液 相色 谱 法1 范 围本 标 准 规 定 了 用 高 效 液 相 色 谱 测 定 绿 叶 葱 类 蔬 菜 中 多 菌 灵、吡 虫 啉、嘧 霉 胺、除 虫 脲、灭 幼 脲、辛硫 磷 和 阿 维 菌 素 七 种 农 药 残 留 量 的 原 理、试 剂 和 材 料、仪 器 设 备、操 作 步 骤、结 果 计 算 和 精 密 度。本 标 准 适 用 于 韭 菜、葱、蒜 薹 等 绿 叶 葱 类 蔬 菜 样 品 中 七 种 农 药 残 留 量 的 测 定。本 标 准 方 法 检 出 限 为 0.006 mg/kg 0.07 mg/kg,详 见 附 录 A。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。GB/T 6379.2 测 量 方 法 与 结 果 的 准 确 度（正 确 度 与 精 密 度）第 2 部 分：确 定 标 准 测 量 方 法 重 复 性 与再 现 性 的 基 本 方 法GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法GB/T 8855 新 鲜 蔬 菜 和 水 果 的 取 样 方 法3 原 理样 品 中 多 菌 灵、吡 虫 啉 等 七 种 农 药 用 乙 腈 提 取，提 取 溶 液 经 氨 基 柱 净 化，使 用 带 紫 外 检 测 器 的 高 效液 相 色 谱 仪 进 行 检 测，根 据 色 谱 峰 的 保 留 时 间 定 性，外 标 法 定 量。4 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明，在 分 析 中 仅 使 用 确 认 为 分 析 纯 的 试 剂 和 GB/T 6682 中 规 定 的 一 级 水。4.1 乙 腈，色 谱 纯。4.2 甲 醇，色 谱 纯。4.3 二 氯 甲 烷，色 谱 纯。4.4 氯 化 钠，140 烘 烤 4h。4.5 固 相 萃 取 柱，氨 基 柱（Aminopr opy），6 mL，500 mg。4.6 滤 膜，0.2 m,有 机 溶 剂 膜。4.7 铝 箔。4.8 N-丙 基 乙 二 胺，粒 径（40 m-60 m）。DB14/T 913 201424.9 石 墨 化 碳 黑，粒 径（120 m-400 m）。4.10 农 药 标 准 品 见 表 1：表 1 7 种 农 药 标 准 品序 号 中 文 名 英 文 名 浓 度（mg/L）溶 剂1 吡 虫 啉 imidac loprid 1000 甲 醇2 多 菌 灵 carben daziml 1000 甲 醇3 嘧 霉 胺 pyrime thanil 1000 甲 醇4 除 虫 脲 diflub enzuron 1000 甲 醇5 灭 幼 脲 chlorb enzuron 1000 甲 醇6 辛 硫 磷 phoxim 1000 甲 醇7 阿 维 菌 素 avermect in 1000 甲 醇4.11 农 药 标 准 溶 液 配 制4.11.1 单 一 农 药 标 准 溶 液准 确 移 取 一 定 量（精 确 至 0.01 mL）的 农 药 标 准 溶 液,用 甲 醇 做 溶 剂，配 制 成 100 mg/L 的 单 一 农 药 标准 储 备 液，贮 存 在-18 以 下 的 冰 箱 中。使 用 时 根 据 各 农 药 在 对 应 检 测 器 上 的 响 应 值，吸 取 适 量 的 标 准储 备 液，用 甲 醇+水=3+2 稀 释 配 制 成 所 需 的 标 准 工 作 液。4.11.2 农 药 混 合 标 准 溶 液根 据 各 农 药 在 仪 器 上 的 响 应 值，逐 一 准 确 吸 取 一 定 体 积 的 单 个 农 药 储 备 液 分 别 注 入 同 一 容 量 瓶 中，用 甲 醇 稀 释 至 刻 度 配 制 成 农 药 混 合 标 准 储 备 液，使 用 前 用 甲 醇+水=3+2 稀 释 成 所 需 质 量 浓 度 的 标 准 工 作液。5 仪 器 设 备5.1 高 效 液 相 色 谱 仪，可 进 行 梯 度 淋 洗，配 紫 外 检 测 器。5.2 粉 碎 机。5.3 匀 浆 机。5.4 氮 吹 仪。5.5 旋 转 蒸 发 仪。5.6 分 析 天 平。5.7 离 心 机。6 分 析 步 骤6.1 试 样 制 备DB14/T 913 20143按 GB/T 8855抽 取 蔬 菜 样 品，取 可 食 部 分，经 缩 分 后，将 其 切 碎，充 分 混 匀 放 入 粉 碎 机 粉 碎，制 成待 测 样。放 入 分 装 容 器 中，于-20-16 条 件 下 保 存，备 用。6.2 提 取称 取 25.00 g试 样 放 入 烧 杯 中，加 入 50.0 mL乙 腈，在 高 速 匀 浆 机 中 以(9000 r/min 10000 r/min）匀 浆 2 min后 用 滤 纸 过 滤，滤 液 收 集 到 装 有 5 g 7 g氯 化 钠 的 具 塞 量 筒 中，收 集 滤 液 40 mL 50 mL,密 闭，剧 烈 振 摇 1min,在 室 温 下 静 置 30 min，使 乙 腈 相 和 水 相 分 层。6.3 净 化从 具 塞 量 筒 中 吸 取 20.0 mL 上 层 乙 腈 溶 液，加 入 有 N-丙 基 乙 二 胺 0.1 g和 石 墨 化 碳 黑 0.1 g的 离 心 管中，以 5000 r/min 离 心 5 min，移 取 上 清 液 10.00 mL在 40 下 旋 蒸 至 近 干，加 入 2.0 mL 甲 醇+二 氯 甲 烷=（5+95）溶 解 残 渣，盖 上 铝 箔，待 净 化。将 氨 基 柱 用 5.0 mL甲 醇+二 氯 甲 烷=5+95 预 淋 洗 条 件 化，当 溶剂 液 面 到 达 柱 吸 附 层 表 面 时，立 即 加 入 上 述 待 净 化 溶 液，用 指 形 管 收 集 洗 脱 液，用 6.0 ml 甲 醇+二 氯 甲烷=5+95 洗 杯 后 过 柱，并 重 复 一 次。将 指 形 管 置 于 50 氮 吹 仪 上，氮 吹 蒸 发 至 近 干，用 甲 醇+水=3+2准 确 定 容 至 2.50 mL，在 混 合 器 上 混 匀 后，用 0.2 m 滤 膜 过 滤，待 测。6.4 色 谱 参 考 条 件6.4.1 色 谱 柱：C18 柱（3.0 mmI.D 250 mm，5 m）或 相 当 者。6.4.2 柱 温：40。6.4.3 溶 剂 梯 度 及 流 速 见 表 2：表 2 溶 剂 梯 度 及 流 速时 间 min 水%甲 醇%乙 腈%流 速 mL/min0.00 65 24.5 10.5 0.710.00 65 24.5 10.5 0.712.00 30 49.0 21.0 0.722.00 30 49.0 21.0 0.724.00 10 63.0 27.0 0.733.00 10 63.0 27.0 0.735.00 65 24.5 10.5 0.76.4.4 检 测 波 长 见 表 3：DB14/T 913 20144表 3 各 时 间 段 检 测 波 长时 间 min 检 测 波 长 nm0.0 2755.0 24510.0 27518.0 25421.5 28028.0 2456.5 色 谱 分 析分 别 吸 取 20.0 L 标 准 混 合 溶 液 和 净 化 后 的 样 品 溶 液 注 入 色 谱 仪 中，以 保 留 时 间 定 性，以 样 品 溶 液峰 面 积 与 标 准 溶 液 峰 面 积 比 较 定 量。7 结 果 计 算试 样 中 被 测 农 药 残 留 量 以 质 量 分 数 计，单 位 以 毫 克 每 千 克（mg/kg）表 示,按 公 式（1）计 算。M A VV A VS 23 1（1）式 中:标 准 溶 液 中 农 药 的 质 量 浓 度，单 位 为 毫 克 每 升（mg/L）；A 样 品 溶 液 中 被 测 农 药 的 峰 面 积；AS 农 药 标 准 溶 液 中 被 测 农 药 的 峰 面 积；V1 提 取 溶 剂 总 体 积，单 位 为 毫 升（mL）；V2 吸 取 用 于 检 测 的 提 取 溶 剂 的 总 体 积，单 位 为 毫 升（mL）；V3 样 品 溶 液 定 容 体 积，单 位 为 毫 升（mL）；M 试 样 的 质 量，单 位 为 克（g）。计 算 结 果 保 留 两 位 有 效 数 字，当 结 果 大 于 1 mg/kg 时 保 留 三 位 有 效 数 字。8 精 密 度本 标 准 精 密 度 数 据 是 按 照 GB/T 6379.2 的 规 定 确 定 的，获 得 重 复 性 和 再 现 性 的 值 以 95%的 可 信 度 来 计算。本 方 法 的 精 密 度 数 据 参 见 附 录 A。9 色 谱 图DB14/T 913 20145标 准 溶 液 色 谱 图韭 菜 加 标 样 品 色 谱 图蒜 苔 加 标 样 品 色 谱 图大 葱 加 标 样 品 色 谱 图1 吡 虫 啉；2 多 菌 灵；3 嘧 霉 胺；4 除 虫 脲；5 灭 幼 脲；6 辛 硫 磷；7 阿 维 菌 素DB14/T 913 20146附 录 A(资 料 性 附 录)从 实 验 室 间 试 验 结 果 得 到 的 统 计 数 据表 A.1 七 种 农 药 检 测 参 考 数 据序 号 中 文 名 英 文 名 保 留 时 间 m i n 检 出 限 m g/k g1 吡 虫 啉 i m i d a c l o p r i d 4.6 4 0.0 12 多 菌 灵 c a r b e n d a z i m l 6.7 2 0.0 73 嘧 霉 胺 p y r i m e t h a n i l 1 6.9 6 0.0 0 64 除 虫 脲 d i f l u b e n z u r o n 1 9.0 1 0.0 45 灭 幼 脲 c h l o r b e n z u r o n 1 9.9 0 0.0 36 辛 硫 磷 p h o x i m 2 2.3 0 0.0 57 阿 维 菌 素 a v e r m e c t i n 2 9.5 9 0.0 1表 A.2 七 种 农 药 精 密 度 数 据 表（单 位 mg/kg）序 号 农 药 名 称质 量浓 度重 复 性限 r再 现 性限 R质 量浓 度重 复 性限 r再 现 性限 R质 量浓 度重 复 性限 r再 现 性限 R1 吡 虫 啉 0.0 5 0.0 0 4 7 0.0 1 5 0.1 0.0 1 5 0.0 1 7 1.0 0.0 1 7 0.0 1 82 多 菌 灵 0.1 0.0 1 8 0.0 1 9 0.5 0.0 1 6 0.0 2 1.0 0.0 1 8 0.0 1 83 嘧 霉 胺 0.0 5 0.0 1 3 0.0 1 3 0.1 0.0 1 8 0.0 1 9 1.0 0.0 1 8 0.0 1 94 除 虫 脲 0.0 5 0.0 0 3 6 0.0 0 4 3 0.1 0.0 0 3 4 0.0 0 3 6 1.0 0.0 0 3 7 0.0 0 4 55 灭 幼 脲 0.0 5 0.2 9 2 0.3 4 0.1 0.2 8 0.3 1 1.0 0.2 9 0.3 26 辛 硫 磷 0.0 5 0.0 1 5 0.0 1 8 0.1 0.0 1 9 0.0 2 1.0 0.0 1 8 0.0 27 阿 维 菌 素 0.0 5 0.0 1 2 0.0 1 9 0.1 0.0 0 8 2 0.0 1 8 1.0 0.0 0 9 4 0.0 1 8_ _ _ _ _