ICS 65.150CCS B 5254西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T 03262024 黑斑原鮡 2024-04-09发布 2024-05-09实施西藏自治区市场监督管理局发 布DB54/T 03262024I目 次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 主要形态结构特征。.14.1 外部形态特征.14.2 内部结构特征.25 生长与繁殖.35.1 生长.35.2 繁殖.36 遗传学特性.46.1 细胞遗传学特性.46.2 生化遗传学特性.47 检测方法.57.1 抽样.57.2 性状测定.57.3 年龄测定.57.4 染色体检测.57.5 同工酶电泳分析.58 检验规则与结果判定.5附录 A（资料性）黑斑原鮡生长方程、体长与体重关系式.6A.1 生长方程.6A.2 全长与体重的关系.6附录 B（规范性）同工酶各试剂的配置.7B.1 凝胶的制备.7B.2 加样的指示剂.7B.3 电极缓冲液.7B.4 同工酶染色剂配置.7DB54/T 03262024II前 言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件的某些内容可能涉及到专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由西藏自治区农业农村厅提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。本文件起草单位：华中农业大学、西藏自治区畜牧总站、四川律贝生物技术有限公司。本文件的主要起草人：谢从新、林少卿、覃剑晖、张慧娟、杨鑫、霍斌、邵俭、周贤君、尼玛群宗、拉巴次仁、央珍、边巴卓玛、格桑达瓦、尼玛次仁、苏中华、党发发、马娇林、袁齐涛、孙锋博、于航、乐地、郭荣明、王润锦、吴海彬、石彬、李通、冯志强、廖吕、张鑫崴、胡程鹏。DB54/T 032620241黑斑原鮡1范围本文件给出黑斑原鮡（Glyptosternum maculatum）的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性、以及检测方法。本文件适用于黑斑原鮡的种质检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18654.1 养殖鱼类种质检验 第1部分：检验规则GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分:抽样方法GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分:性状确定GB/T 18654.4 养殖鱼类种质检验 第4部分：年龄与生长的测定GB/T 18654.6 养殖鱼类种质检验 第6部分：繁殖性能的测定GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分:染色体组型分析GB/T 18654.13 养殖鱼类种质检验 第13部分:同工酶电泳分析3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1学名黑斑原鮡（Glyptosternum maculatum）。3.2地方名藏鲶、拉鲶。3.3分类位置硬骨鱼纲（Osteichthyes），鲶形目(Osteichthyes)、鮡科（Siluriformes）、原鮡属（Glyptosternum）。4主要形态结构特征。4.1外部形态特征头胸部平扁，无胸吸着器。眼小，位于头的背部，为皮膜所覆盖。口下位、横裂。齿尖椎状，密生，齿尖朝里，形成齿带。上颌齿带很宽，整块，两侧端向后延伸；下颌齿带分为左右两块。唇后沟不连续，间隔较宽。须4对，颌须基部宽大，其腹面有羽状褶皱。鳃孔大，伸达腹面。胸鳍不达腹鳍起点，偶鳍DB54/T 032620242水平展开，与胸腹部形成平扁的附着面。胸鳍与腹鳍的第一枚鳍条特别宽厚，前缘为许多软骨细条，由鳍膜包裹，其腹面有羽状褶皱。黑斑原鮡的外形见图1。图1黑斑原鮡外部形态图4.1.1可数性状4.1.1.1背鳍鳍试D.i-64.1.1.2臀鳍鳍式A.i-64.1.1.3腹鳍鳍式 V.i-54.1.1.4胸鳍鳍式 P.i-114.1.2可量性状黑斑原鮡可量性状实测比例见表1。表1黑斑原鮡可量性状实测比例比例性状 数值 比例性状 数值体长/体高 5.36.8 头长/吻长 1.92.3体长/头长 3.54.4 头长/口裂宽 2.02.6体长/尾柄长 4.75.5 头长/眼间距 3.03.8体长/头宽 4.04.9 尾柄长/尾柄高 1.72.34.2内部结构特征4.2.1鳔鳔分左右二室，包埋在薄的骨质囊内。DB54/T 0326202434.2.2脊椎骨脊椎骨总数37枚。4.2.3腹膜腹膜为灰黑色。5生长与繁殖5.1生长依据205尾样本估算各年龄组体长和体重平均值见表2。表2黑斑原鮡各龄的体长和体重雄性 雌性年龄 体长(平均 S.D)mm体重(平均 S.D.)g体长(平均 S.D)mm体重(平均 S.D.)g3 115.4 15.5 119.8 174 144.6 31.5 143.910.3 30.25.45 171.415.3 53.75.3 165.315.3 46.710.96 195.918.3 81.81.3 184.519.2 65.911.47 218.420.2 115.116.3 201.514.7 876.98 23936.9 152.821.4 216.812.3 109.311.59 257.831.3 194.119.1 230.424.4 132.319.810 275.119.8 238.115.3 242.4 155.511 29139.8 28425.3 253.3 178.312 305.545.2 331.129.6 262.935.3 200.526.213 318.8 378.7 271.525.3 221.936.3黑斑原鮡的生长方程和体长与体重关系式参见附录 A。5.2繁殖5.2.1成熟年龄雌鱼 7 龄，雄鱼 5龄。5.2.2产卵类型性腺一年成熟一次，一次性产卵类型。5.2.3怀卵量依据 128尾样本估算各龄怀卵量见表 3。DB54/T 032620244表3黑斑原鮡各龄个体繁殖力年龄绝对怀卵量粒体长相对生殖力粒/mm体重相对生殖力粒/克4 365.56137.0 25.939.14 0.113.575 607.50311.38 39.4518.84 12.085.256 647.00330.65 40.3119.13 11.865.757 690.71331.95 40.8417.80 10.824.408 1258.07605.50 66.2925.55 14.756.919 1142.22299.29 61.0217.61 12.834.746遗传学特性6.1细胞遗传学特性染色体数：2n=48，核型公式：24m+14sm+10st，臂数NF：80。染色体核型见图2图2黑斑原鮡染色体核型图6.2生化遗传学特性肝细胞醇脱氢酶(ADH)同工酶电泳图谱见图3。图3黑斑原肝细胞鮡醇脱氢酶(ADH)同工酶电泳图谱DB54/T 0326202457检测方法7.1抽样按GB/T18654.2的规定执行。7.2性状测定按GB/T18654.3的规定执行。7.3年龄测定采用脊椎骨鉴定年龄。脊椎骨处理和年龄鉴定方法按GB/T18654.的规定执行。7.4染色体检测按GB/T18654.12的规定执行。7.5同工酶电泳分析7.5.1样品的采集与制备取鱼体侧侧线鳞上方肌肉，按1:3的比例（W:V）加入去离子水于匀浆器中冰浴匀浆，匀浆液于4、12 000 r/min离心30 min，取上清液，重复以上离心过程2次至上清液澄清7.5.2制胶将混匀的9%聚丙烯酰胺凝胶液倒入模板，插好梳子，置于室温下，待凝胶聚合后，置于4冰箱中备用。7.5.3点样吸取40L样与2L3L加样指示剂混匀，一起加到点样孔中。7.5.4电泳分离采用垂直板电泳，凝胶浓度9%。上下槽电极缓冲液为pH8.3的Tris-甘氨酸。稳压250V电泳2.5h。电泳结束后，放入预先现配置的同工酶染色液中染色。同工酶电泳分析中使用的各种试剂见附录B。7.5.5结果分析按GB/T 18654.13的规定执行。8检验规则与结果判定按GB/T 18654.1的规定执行。DB54/T 032620246A A 附 录 A（资料性）黑斑原鮡生长方程、体长与体重关系式A.1生长方程雄性和雌性群体的体长和体重生长方程分别见式（A.1）、（A.2）、（A.3）和（A.4）：雄鱼：Lt=465.201-e-0.0872(t+0.2718).(A.1)Wt=1241.741-e-0.0872(t+0.2718)3.147.(A.2)雌鱼：Lt=342.661-e-0.1142(t+0.7688).(A.3)Wt=460.801-e-0.1142(t+0.7688)3.142.(A.4)式中：L：体长，单位为mm，W：体重，单位为g，e：自然对数t：年龄，单位为a。A.2全长与体重的关系雄性和雌性群体的体长与体重关系式见（A.5）和（A.6）：雄鱼：W=5106 L 3.147.(A.5)雌鱼：W=5106 L 3.142.(A.6)式中：W：体重，单位为g，L：全长，单位为mm。DB54/T 032620247B B 附 录 B（规范性）同工酶各试剂的配置B.1凝胶的制备B.1.1凝胶溶液的配置各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表 B.1。表B.1 各种凝胶溶液的配方溶 液 配制方法凝胶缓冲液取 Tris（NH2C(CH2OH)3）36.3g去离子水溶解，用浓盐酸调 pH为 8.9，加去离子水定容到 100 mL。4贮存。凝胶储液取丙烯酰胺（C3H5NO）33.3g，N,N亚甲基双丙烯酰胺（C7H10N2O2）0.9g，去离子水溶解并定容至 150 mL。4贮存。AP 取过硫酸铵（(NH4)2S2O8）1.5g，去离子水溶解并定容至 100mL。现配现用。B.1.2凝胶的制备用9%凝胶液制成聚丙烯酰胺垂直板凝胶，该凝胶液配方见表B.2。表B.2 凝胶制备配方9%凝胶液凝胶缓冲液，mL 6.25凝胶储液，mL 15AP，mL 0.5TEMED（四甲基乙二胺,C6H16N2），L 100去离子水，mL 28.15总体积，mL 50.0B.2加样的指示剂0.15%溴酚蓝-50%甘油：称取0.15g溴酚蓝溶于50mL去离子水，再加50mL甘油混匀。B.3电极缓冲液电极缓冲液母液电泳时稀释10倍使用。母液配置：称取甘氨酸28.80g溶于800mL去离子水，用Tris调pH至8.3，加去离子水定容至1000mL。B.4同工酶染色剂配置B.4.1先配制染色用各溶液见表B.3，再配制染色液。表B.3 染色用溶液配方DB54/T 032620248溶液 配制方法氯化硝基四氮唑蓝（NBT）300mg辅酶（NAD）500mg吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）20mgA去离子水（H2O）100mLDL-苹果酸钠 1.96gB去离子水（H2O）100mLC0.5mol/L Tris-HCl染色缓冲液（pH7.1）取 Tris60.5 g溶于 800mL去离子水中，用盐酸调节 pH至 7.1，加去离子水定容至 1000mL。B.4.2染色液配方染色液按ABCH2O=10102060的比例混合均匀。