ICS 11.120.10 B 38 备案号：56332-2017 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 26312017 长白山松杉灵芝菌种 Spawn of ganoderma tsugae from Changbai Mountains 2017-06-12发布 2017-08-12实施吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 26312017 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林农业大学、延边朝鲜族自治州农业科学院、中国农业科学院特产研究所、延边大阳参业有限公司。本标准主要起草人：刘晓龙、王鑫、闫梅霞、汪庭瑞、马秀华、张立娜、于海茹、杜忠伟。DB22/T 26312017 1 长白山松杉灵芝菌种 1 范围 本标准规定了长白山松杉灵芝菌种、菌种制作、质量要求、试验方法、检验规则、标识、包装、运输及贮存。本标准适用于长白山松杉灵芝菌种生产、流通、使用和质量评价。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 191 包装储运图示标志 GB 4789.28-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1284 食用菌菌种中杂菌及害虫的检验 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 NY 5099 无公害食品 食用菌栽培基质安全技术要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 长白山松杉灵芝 Ganoderma tsugae from Changbai Mountains 生长于长白山区域内落叶松基干部的灵芝属松杉灵芝种（Ganoderma tsugae Murr.）的大型真菌。4 菌种 4.1 来源 利用长白山区生长的野生松杉灵芝，经系统选育而成的优良菌株。4.2 生物学特性 见附录A。5 菌种制作 见附录B。6 质量要求 DB22/T 26312017 2 6.1 母种 6.1.1 感官要求 母种感官要求应符合表 1规定。表1 母种感官要求 项目 指标 试管 洁净、完整、无损 棉塞或硅胶塞 干燥、洁净，松紧适度，满足透气和滤菌要求 斜面长度/cm 910 接种块大小/cm2（0.30.5）（0.30.5）菌丝生长量 长满试管斜面培养基 菌丝体特征 浓白、健壮、绒毛状 菌丝体表面 均匀、舒展、平整、无角变、色泽一致 菌丝分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 菌种外观 虫（螨）体 无 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀，无暗斑、无明显色素 气味 具有松杉灵芝特有的香味，无异味 6.1.2 微生物学要求 母种微生物学应符合表 2的规定。表2 母种微生物学要求 项目 指标 菌丝生长状态 粗壮、丰满、均匀 锁状联合 有 杂菌 无 6.1.3 菌丝生长速度 在PDA 培养基上，25 28 条件下，10 d12 d菌丝长满试管斜面培养基；在90 mm培养皿上，8 d10 d菌丝长满平板培养基。DB22/T 26312017 3 6.2 原种 6.2.1 感官要求 原种感官应符合表 3的规定。表3 原种感官要求 项目 指标 菌种瓶（袋）洁净、完整、无损 棉塞或无棉塑料盖 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶或袋口的距离/cm 50.5 接种物大小/cm2 1.21.2 菌丝生长量 长满菌种瓶（袋）菌丝体特征 洁白浓密、生长健壮 培养物菌丝体表面 生长均匀，无角变，无高温圈 培养基及菌丝体 紧贴瓶（袋）壁，无明显干缩 培养物表面分泌物 无 杂菌菌落 无 虫（螨）体 无 拮抗现象 无 菌皮 接种部位可以有少量 菌种外观 出现子实体原基的瓶（袋）比例/%3 气味 具有松杉灵芝特有的香味，无异味 6.2.2 微生物学要求 原种微生物学要求符合6.1.2规定。6.2.3 菌丝生长速度 在25 28 条件培养，木屑培养基上30 d35 d菌丝长满菌种瓶（袋）。6.3 栽培种 6.3.1 感官要求 栽培种感官应符合表 4的规定。DB22/T 26312017 4 表4 栽培种感官要求 项目 指标 菌种袋 洁净、完整、无损 棉塞或无棉塑料盖 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距袋口的距离/cm 50.5 菌丝生长量 长满菌种袋 菌丝体特征 洁白浓密、生长健壮 不同部位菌丝体 生长均匀，色泽一致，无角变，无高温圈 培养基及菌丝体 紧贴袋壁，不干缩 培养物表面分泌物 无 杂菌菌落 无 虫（螨）体 无 拮抗现象 无 菌皮 无 菌种外观 出现子实体原基的袋比例/%5 气味 具有松杉灵芝特有的香味，无异味 6.3.2 微生物学要求 栽培种微生物学要求符合6.1.2规定。6.3.3 菌丝生长速度 25 28 条件下培养，木屑培养基上25 d35 d菌丝长满菌种袋。7 试验方法 菌种检验应符合NY/T 1846的要求，杂菌及害虫检验应符合NY/T 1284的要求，见附录C。8 检验规则 8.1 批次 同一种源、同一接种时间和同一培养条件生产的母种为一个批次；同一种源、同一接种时间、同一制作方法和同一培养条件生产的原种或栽培种为一个批次。8.2 抽样 DB22/T 26312017 5 8.2.1 方法 母种按品种、培养条件、接种时间分批编号，原种和栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号，按批随机抽取被检样品。8.2.2 数量 母种、原种、栽培种抽样数量分别为该批菌种量的 10%、5%、1%随机取样，但每批抽样数量不少于 10 支（瓶、袋）；超过1000 支（瓶、袋）可进行两批抽样。8.3 判定规则 检验项目全部符合要求时，为合格菌种；其中任何一项目不符合要求，均为不合格菌种。9 标识、包装、运输及贮存 9.1 标识 菌种包装储运标志应符合GB/T 191的规定。每支（瓶、袋）菌种应加贴标签，标明产品名称、品种名称、生产单位、接种时间、执行标准等内容。每箱菌种加贴包装标签，标明产品名称、品种名称、生产单位、厂址、联系电话、出厂日期、保质期、贮存条件、数量、执行标准等内容。9.2 包装 母种采用具有足够强度的瓦楞纸箱或木盒，内部用泡沫板等轻质材料填满。原种和栽培种采用有足够强度的纸箱，内部用泡沫板等轻质材料填满。箱（盒）内附产品合格证书和使用说明（包括菌种种性、培养基配方及适用范围等）。9.3 运输 菌种以在 4 6 温度条件下运输为宜，并应有防震、防尘、防雨淋、防冻、防杂菌污染措施，不与有毒有害物品混运，不应挤压。9.4 贮存 9.4.1 母种在 4 6 条件贮存，贮存期不超过 90 d。9.4.2 原种在4 6 条件下贮存，贮存期不超过 45 d；在温度不超过 25、清洁、通风、干燥（空气相对湿度 45%55%）室内存放时间不超过 15 d。9.4.3 栽培种在 4 6 条件下贮存，贮存期不超过 45 d；在温度不超过 25、清洁、通风、干燥（空气相对湿度 45%55%）室内存放时间不超过 15 d。A DB22/T 26312017 6 A B 附 录 A（资料性附录）松杉灵芝生物学特性 A.1 子实体 子实体一年生，有柄、木栓质，菌盖肾形、半圆形或近扇形，直径 3 cm25 cm，厚 0.8 cm3 cm，菌盖表面红褐色或污红褐色，有似漆样光泽，无环带或具不明显的环带，边缘薄或钝。菌肉白色或淡白色，接近菌管处呈淡褐色，厚 0.5 cm1.5 cm。菌管长 0.5 cm1.5 cm，黄褐色，孔面初淡白色，后渐变成与菌管同色；管口呈圆形，每毫米 45个。菌柄粗短，长 4 cm5 cm，粗 2 cm3 cm，紫黑色，有光泽。A.2 菌丝体 菌丝三体型。生殖菌丝透明、薄壁、分枝，直径 3 m4 m，骨架菌丝淡黄色，厚壁、实心，树状分枝，分枝末端形成鞭毛状五色缠绕菌丝，厚壁，多弯曲。A.3 孢子 孢子卵形或顶端平截，双层壁，外壁透明，平滑，内壁有小刺，淡褐色至褐色，（911）m（68）m。DB22/T 26312017 7 B C 附 录 B（规范性附录）松杉灵芝菌种制作 B.1 母种制作 B.1.1 母种培养基配方 a)马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g，水 1000 mL，pH 自然。b)马铃薯 200 g、阔叶硬杂木屑 100 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g，水 1000 mL，pH 自然。c)马铃薯 200 g、鲜松针 50 g、麦麸 50 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g，水 1000 mL，pH 自然。B.1.2 制作方法 试管规格18 mm180 mm或20 mm200 mm，无菌接种后在25 28 条件培养10 d12 d长满试管斜面，制作过程应符合NY/T 528的规定。B.2 原种制作 B.2.1 原种培养基配方 a)阔叶硬杂木屑 40%、松木屑 38%、米糠 20%、白糖 1%、石膏粉 1%。b)阔叶硬杂木屑 78%、米糠 20%、白糖 1%、石膏粉 1%。B.2.2 制作方法 培养基原料质量应符合NY 5099的要求。使用750 mL容积透明菌种瓶，或17 cm33 cm聚丙烯折角袋，在25 28 条件培养30 d45 d 长满菌种瓶（袋）。B.3 栽培种制作 B.3.1 栽培种配方 a)阔叶硬杂木屑 78%、米糠 20%、白糖 1%、石膏粉 1%。b)阔叶硬杂木屑 40%、玉米芯粉 48%、米糠 10%、白糖 1%、石膏粉 1%。B.3.2 制作方法 培养基制作方法同B.2.2。DB22/T 26312017 8 C D 附 录 C（规范性附录）松杉灵芝菌种试验方法 C.1 感官检验 感官要求符合表C.1的规定。表 C.1 菌种感官要求 项目 观察方法 试管、菌种瓶（袋）、棉塞或硅胶塞、无棉塑料盖、斜面背面外观 肉眼观察 培养基上表面距瓶（袋）口距离、斜面长度、接种量、菌种外观 肉眼观察和测量 杂菌菌落、虫（螨）体 肉眼观察，或用 5 放大镜观察 子实体原基 随机抽取样本 100 瓶（袋），肉眼观察有无原基，并计算C.2 微生物学检验 C.2.1 菌丝生长状态及锁状联合 用放大倍数不低于1040的光学显微镜对培养物的水浸片进行观察，每一检样观察不少于50 个视野。C.2.2 细菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 GB 4789.28-2013中附录 D 生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制标准规定的营养琼脂培养基中，28 下培养1 d2 d，观察斜面表面是否有细菌菌落生长，必要时用显微镜检查。C.2.3 霉菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 PDA 培养基中，25 28 下培养3 d4 d，观察是否有菌丝形态菌落或有异味，必要时用水浸片镜检。C.3 菌丝生长速度 C.3.1 母种 PDA 培养基，90 mm直径培养皿，倾倒培养基2530 mL/皿，菌龄10 d12 d的菌种为接种物，用灭菌的5 mm直径打孔器在菌落周围相同菌龄处打接种物，接种后置于25 28 黑暗培养，并计算长满平板培养皿生长所需天数。DB22/T 26312017 9 C.3.2 原种和栽培种 在选定的培养基上接种后置于25 28 黑暗培养，并计算长满瓶（袋）所需天数。_