ICS 65.120 B 46 备案号：53561-2017 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1164 2017 饲草中中 性洗涤纤 维瘤胃液 体外 30 小时降解率的测 定 A method to assess 30-h ruminal in vitro neutral detergent fiber degradability of the forage 2017-02-25 发布 2017-05-25 实施 内 蒙 古 自 治 区 质 量 技 术 监 督 局 发布 DB15/T 1164 2017 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 试剂.1 5 仪 器和 设备.2 6 试样.2 7 分 析步 骤.2 8 测 定结 果的 计算.3 DB15/T 1164 2017 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出 的规 则起 草。本标准 由内 蒙古 自治 区 农 牧业科 学院 提出。本标准 由内 蒙古 自治 区农 牧业厅 归口。本标准 起草 单位：内 蒙古 自治区 农牧 业科 学院。本标准 主要 起草 人：孙海 洲、金 鹿、桑丹、李 胜利、张春 华、张崇 志、凌树 礼、任 晓萍、珊 丹、艳城、谷 英、刘志 友、斯登 丹巴、王美 秀。DB15/T 1164 2017 1 饲 草中中 性洗涤纤 维瘤胃 液体 外 30 小时 降解率 的测 定 1 范围 本标准 规定 了 饲 草中 中性 洗涤纤 维瘤 胃液 体外30 小 时降解 率的 测定 方法。本标准 适用 于单一 饲草、混合饲草 和 青贮 饲料。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 3358.1 统计 学词 汇 及符 号 第1 部分：一 般统 计术语 与用 于概 率的 术语 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动 物饲 料 试 样的制 备 GB/T 20806 饲 料中 中性 洗涤纤 维(NDF)的测 定 3 术语 和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 中性洗 涤纤 维 Neutral Detergent Fiber 用中性 洗涤 剂去 除饲草 中 的脂肪、淀 粉、蛋白 质和 糖类等 成分 后，残留 的不 溶解物 质的 总称。3.2 中性洗 涤纤 维 体 外降 解率 The Degradability of Neutral Detergent Fiber In Vitro 瘤胃 液 体外 降解 的饲 草中 中性洗 涤纤 维 含 量占 饲草 原样中 中性 洗涤 纤维 含量 的百分 比。3.3 相对相差 Relative Difference 重复性 条件 下获 得两 次独 立测定 结果 的绝 对差 值与 算术平 均值 的比 值。4 试剂 4.1 如无特 别说 明，所用 试剂 均为分 析纯。4.2 本 标准 所用 水，一律 指 GB/T 6682 中 三级 水。4.3 丙酮（100%）。DB15/T 1164 2017 2 4.4 缓冲 液A：将 10.00 g K2HPO4、0.50 g MgSO4 7H2O、0.50 g NaCl、0.10 g CaCl2 2H2O 和 0.50 g尿素加 入 到 1000 ml 的容 量瓶中，用 蒸馏 水定 容。4.5 缓冲 液B：将 15.00 g Na2CO3 和1.00 g Na2 S 9H2O 加入 到1000 ml 的容 量瓶 中，用 蒸馏 水定 容。4.6 3%十 二烷 基硫 酸钠（中 性 洗涤剂）溶 液：称 取18.60 g 乙 二胺 四乙 酸二 钠（C10H14N2O8Na2 2H2O）和 6.80 g 四硼 酸钠（Na2P4O7 10H2O）加入 到100 mL 烧杯中，加 少量 水加 热溶 解后，再加 入 30.00 g十二烷 基硫 酸钠(C12H25NaSO4)和 20 mL 乙 二醇 乙醚。称 取 4.65 g 无水 磷 酸氢 二钠（Na2HPO4），置 于另 一烧杯中，加 少量 水，微微 加热溶 解后 倒入 第一 个烧 杯中，稀释 至 1000 mL。5 仪器和 设备 5.1 实验室 用样 品粉 碎机 或研 钵。5.2 瘤胃液 取样 器（长 30 cm 内径12.70 mm PPR 管）。5.3 分析天 平（分度 值0.0001 g）。5.4 烘干 箱（室 温 300）。5.5 磁力搅 拌器（转 速 为100 r/min 1400 r/min）。5.6 纤维袋（ANKOM F57，25 m 孔 隙）。5.7 封口机。5.8 体外模 拟培 养箱（ANKOM DAISY 型，美 国）。5.9 纤维分 析仪（ANKOM 220P，美国）。5.10 量筒（100 mL 和1000 mL）。6 试样 6.1 取样 按GB/T 14699.1 进行 采样。6.2 制备 样品根 据GB/T 20195 制 备，置于 烘箱 内 于65 烘干，研 磨，过1 mm 筛。7 分析步 骤 7.1 瘤胃液 的制 备 选择 健 康、体 重接 近的3 头装有 永久 性瘤 胃瘘 管的 供体羊(牛)，单独 饲养。在晨饲 前经 瘤胃 瘘管 利用 瘤胃 液取 样器 采集 3 头 供试羊（牛）的 瘤胃 液 1500 mL 2000 mL,转 入预 热 至 39 的 保温 容器 中,混合均 匀后 经 4 层纱 布过 滤,同 时通 入CO2 气 体，然 后量取 试 验 所需 体积 的瘤 胃液备 用。7.2 体外消 化步 骤 7.2.1 消化 称取0.5000 g样 品放 置于 纤维袋 中，平行 样 封 口后 平铺放 置于 体外 模拟 培养 箱中消 化罐 的分 隔板 两侧。取 两个 容器 分别 加入266 mL 缓冲 液B和1330 mL缓 冲液A，于39 条件 下调 节其pH 达到6.80。于 每个消化罐 中加入1600 mL 混 合 缓冲溶 液后放 置于 体外模拟 培养 箱中，打开 加热和 转动开 关，使 消化 罐的温DB15/T 1164 2017 3 度在20 min 30 min 内达到平衡。取出消化罐 加入提前预 处理好的400 mL瘤胃液，持续通入CO2 然后 盖紧盖子，置 于体 外模拟 培 养箱 中 连续 培养30 h。7.2.2 洗涤 培养完 毕后 取出 消化 罐倒 掉液体，再 将纤 维袋 取出，用流 动的 自来 水冲 洗干 净。7.2.3 干燥 将纤维 袋 置于105 烘箱 中烘 干6 h，放 入干 燥器中 冷却30 min后，称 重。然 后再烘 干30 min，再冷却称 重，直至 两次 称重 之差小于0.0020 g为 恒重。7.3 中性洗 涤纤 维含 量的 测定 原样样 品和 残渣 样品 中 中 性洗涤 纤维 含量 按照GB/T 20806 饲料 中中 性洗 涤纤 维(NDF)的 测定 进行。8 测定结 果的 计算 8.1 样品中 中性 洗涤 纤维 含量 以质量 分数(%)表示，按 式（1）计算。Y=（W3-W2）/W1100（1）式中：Y 代 表样 品中 中性 洗 涤纤维 的含 量，单位 为百 分比(%)；W1 样品 的重 量，单位 为克（g）；W2 纤维 袋的 重量，单 位为克（g）；W3 洗涤 后样 品和 纤维 袋的重 量，单位 为克（g）。8.2 样 品中 中性 洗涤 纤维 体外 降解率 以质 量分 数（%）表 示，按 式（2）计算。Z=（W4-W5）/W4100（2）式中：Z 代 表样 品在30 h 时 间点的 中性 洗涤 纤维 瘤胃 液体外 降解 率，单位 为百 分比(%)；W4 代表 原样 样品 中中 性洗涤 纤维 的重 量，单位 为克（g）；W5 代表 经过30 h 体外 降解后 残渣 样品 中中 性洗 涤纤维 的重 量，单位 为克（g）。8.3 取两次 测定 结果 的算 数平 均值，计算 结果 保留 2 位 小数点。8.4 根据GB/T 3358.1，在重 复条件 下同 一样 品 同 时两 次平行 测定 所得 结果 相对 相差 10%。_