ICS 65.021.01 B 16 备案号：55143-2017 DB63 青海省地方标准 DB 63/T 15722017 青稞抗条纹病评价技术规范 2017-06-20发布 2017-09-20实施青海省质量技术监督局 发布 DB63/T 15722017 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则编写。本标准由青海省农林科学院提出并归口。本标准起草单位：青海省农林科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：闫佳会、侯璐、姚强、郭青云、马永强、马欣辉。DB63/T 15722017 1 青稞抗条纹病评价技术规范 1 范围 本标准规定了青稞条纹病病原物接种体的制备和保存、鉴定圃设置、病情调查、抗性评价等要求。本标准适用于青稞对条纹病抗性评价。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。2.1 病原物 引起植物病害的生物的统称。2.2 接种体 在人工操作下能够侵染寄主并引起病害的病原体。2.3 青稞条纹病 主要由禾内脐蠕孢Drechslera graminea(Rabenh.ex Schlecht.)Shoem.所引起的条纹状的病斑、小穗发白为主的青稞病害。3 典型症状 感病初期，幼苗的第一个叶片上即可表现发病症状，最初有散生的淡黄色小点或短小条纹，有的感病植株在幼苗时期提前枯死；分蘖前后叶面黄色条纹病斑扩展变长平行于叶脉，慢慢变成褐色；到拔节抽穗期，部分品种不能抽穗或弯曲畸形或成白穗，条纹变为赤褐色，周边呈黄色晕圈散开，部分叶片变黄枯死。大麦品种不同，病斑颜色和宽度略有差异，后期病斑颜色加深呈褐色，湿度大的长出黑色霉层。4 病原物接种体制备 4.1 病原物的分离 DB63/T 15722017 2 将典型感病叶片剪成5厘米10厘米，用5%次氯酸钠溶液消毒5分钟，无菌水冲洗一次，70%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗一次，70%酒精浸泡30秒，用无菌水冲洗3次，待用。晾干后放到加入13 mg/L硫酸卡那霉素的PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂)上，每个培养皿里放4片6片叶片段，在黑暗条件下培养，2天3天后，从叶片上挑取未污染的菌丝放入PDA培养基上培养。重复3次4次,直至菌落纯化。4.2 病原物的鉴定 4.2.1 分生孢子形态和镜检 分生孢子梗由气孔伸出，单生或3枝5枝丛生，柱状不分枝，浅褐色到褐色，顶端曲膝状。分生孢子梗长90微米180微米，宽7.5微米12微米，梗上顶生或侧生 1个4个分生孢子。分生孢子柱状、多数直、两端半球形，浅黄色到黄褐色，一般基细胞处最宽，端部稍尖，1个7个隔膜，长50微米125微米，宽14微米25.5微米。4.2.2 菌落特征 PDA平板培养基上的菌落呈现白色或浅灰色，絮状，圆形，中央微微隆起，菌丝发达部分背面青褐色或灰黑色，其他菌丝稀薄部位浅黄色，培养时间越长，菌落颜色也会加深变暗成灰黑色或褐色。4.3 病原物的保存 将鉴定好的病原菌接种在PDA斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至35的冰箱中保藏。5 鉴定圃设置 5.1 鉴定圃选址 鉴定圃应设置在光照充足、地势平坦、土地肥沃、宜浇水灌溉的地块。5.2 隔离条件 选择周围5公里范围内无青稞种植的地块。5.3 前茬 选择上年未种植青稞的田块。5.4 种植要求 播种时间与大田生产时间一致，并设置感病对照和抗病对照品种。感病对照：北青7号、北青3号；抗病对照：昆仑13号、门农1号。5.5 播种方式 接种圃中每小区种植5行，行长2米，行距20厘米，每小区留苗500株，重复3次，小区间比排列。5.6 接种 5.6.1 接种时期 青稞扬花期，选择易结露的天气进行喷雾接种。DB63/T 15722017 3 5.6.2 接种体的活化 将35冰箱中保存的病原菌转接到PDA培养基上，进行菌种复壮，从复壮好的菌种上选取其中部分菌落接种到新的PDA培养基上，重复2次3次。5.6.3 接种方法 将活化好的分生孢子配成浓度为每毫升1104个孢子悬浮液，每平方米用20毫升喷雾接种。6 病情调查 6.1 调查时间 在青稞灌浆期进行调查。6.2 调查方法 每小区5点取样，每点调查20株，共调查100株，记载发病率。每隔一周调查一次，根据3次4次的调查结果进行校正。6.3 发病率调查 对条纹病调查以“株”为单位，调查发病株率。6.4 病情分级 成株期用发病率按5级分级标准记载严重度：0 级：无发病株；1 级：发病株率在5%以下；2 级：发病株率在 5%10%；3 级：发病株率在 11%15%；4 级：发病株率在 15%以上。7 抗性评价 7.1 鉴定有效性判别 当鉴定圃中的对照材料平均发病率达到其相应感病程度该批次抗条纹病鉴定有效。7.2 抗性等级 依据成株期鉴定材料的平均严重度评价其抗性水平，具体评价标准见表1。表 1 青稞成株期对条纹病抗性的等级划分 平均严重度 抗性=0 免疫 0平均严重度1.0 高抗 1.0平均严重度2.0 抗病 DB63/T 15722017 4 表 1 青稞成株期对条纹病抗性的等级划分(续)平均严重度 抗性 2.0平均严重度3.0 中抗 3.0平均严重度4.0 感病 4.0平均严重度 高感 7.3 重复鉴定 严重度为3.0以下的材料，需2年3年重复鉴定确定抗性等级，以记载的最低抗性等级来确定最终抗病性等级。_