ICS 65.020.01 B 05 DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 1930 2019 泡桐组织 培养快繁 技术规程 2019-11-21 发布 2020-02-21 实施 河 南 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB41/T 1930 2019 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 术 语和 定义.1 3 外 植体 的无 菌化 培养.1 4 芽 诱导.2 5 增 殖培 养.2 6 生 根培 养.2 7 炼 苗与 移栽.2 DB41/T 1930 2019 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由河 南省 林 业 局提 出并归 口。本标准 起草 单位：河 南农 业大学、河 南省 林业 科学 研究院。本 标准 主要 起草 人：范国 强、翟 晓巧、赵 振利、陈 卓、刘 荣宁、李 永生、曹 喜兵、林海、刘 辉。DB41/T 1930 2019 1 泡 桐组织 培养快繁 技术规 程 1 范围 本标准 规定 了泡 桐 组 织培 养快繁 的术 语和 定义、外 植体的 无菌 化培 养、芽诱 导、增 殖培 养、生 根 培养、炼 苗移 栽、档案 管理。本标准 适用 于泡 桐 组 织培 养快速 繁殖。2 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。2.1 泡桐组 织培 养 在无菌 条件 下，将 泡桐 的 种子、叶 片或 茎段 接种 在 装有人 工配 制培 养基 的培 养瓶中。将培 养瓶 放置于人工 控制 光照 和温 度的 组织培 养室 内，使之 生长、分化 或发 育成 完整 植株 的培养 技术。2.2 外植体 从植物 活体 上切 取下 来用 于建立 组织 培养 体系 的材 料，包 括完 整植 株、器官 或组织。2.3 植物生 长调 节物 质 调节植 物生 长发 育的 物质。2.4 芽诱导 将培养 材料 在诱 导培 养基 中进行 培养，分 化出 不定 芽的过 程。2.5 增殖培 养 把 外植 体培 养获 得的 培养物 转移 到增 殖培 养基 中，使 培养 物得 以成 倍增 殖的过 程。2.6 生根 培养 将芽转 移到 生根 培养 基中 进行生 根培 养，形成 完整 植株的 过程。3 外植体 的无 菌化 培养 3.1 枝条无 菌化 材料 培养 取生长 健康 的泡 桐当 年生 带有腋 芽或 顶芽 的嫩 枝，用清水 清 洗 后，先用 质量 分数为0.1%HgCl2 消毒8 min，再 用无 菌水 清洗5 次，然 后接 种于不 附加 植物 生长调 节物 质的MS基 本培 养基上。培养基 中蔗 糖 浓度20 g/L，琼脂浓度3.0 g/L 8.0 g/L。培 养 瓶 放 置 于 培 养 室 中，培 养 温 度25 2，光照强度 130 moL/m2 s，光 照时 间16 h/d。60 d 可 获得3 4 对 叶片的 无菌 材料，其 叶片 和茎段 用作 芽诱 导的 材料。DB41/T 1930 2019 2 3.2 种子无 菌化 材料 培养 采集生 长健康 的泡 桐当年 生种子，先用70%酒 精消 毒30 s，再放入0.1%HgCl2 溶液中 进行浸 泡消毒5 min，然后 用无 菌水 冲 洗35 次。最后 将种 子接 种于不 附加 植物 生长 调节 物质的MS培 养基 上，培养基中蔗 糖浓度 20 g/L，琼 脂浓度5.0 g/L。培养 瓶 放置于 培养室 中，培养温 度、光 照强度 和光 照时 间同3.1。50 d后 可获 得34 对叶片 的无 菌材 料，其叶 片和茎 段用 作芽 诱导 的材 料。4 芽诱导 4.1 叶片外 植体 芽的 诱导 将获得 的无 菌叶 片沿 主脉 切成约1.0 cm 2.0 cm的 外植体，接 种于 附加 不同 浓度6-BA（8 mg/L 18 mg/L）和NAA（0.1 mg/L 0.5 mg/L）的MS 培 养基 上，培 养基 中蔗 糖浓 度20 g/L，琼 脂浓 度5.0 g/L。培养瓶 放置 于培 养室 中，培养温 度、光照 强度 和光 照时间 同3.1。培养35 d 后，在叶 缘处 分化 出芽。4.2 茎段外 植体 芽的 诱导 将获得 的无 菌茎 段切 成长1 cm 左 右的 外植 体，接种 于 附加不 同浓 度6-BA（10 mg/L 18 mg/L）和NAA（0.2 mg/L 0.5 mg/L）的MS 基 本培养 基上，培养 基中蔗 糖浓度20 g/L，琼 脂浓度5.0 g/L。培 养瓶 放置于培 养室 中，培养 温度、光照 强度 和光 照时 间同3.1。培 养30 d 后 分化 出芽。5 增殖 培养 将诱导 出的 芽接 种于 附 加 不 同 浓 度6-BA（8 mg/L 12 mg/L）和NAA（0.1 mg/L 0.5 mg/L）的MS 基本培养基上，培养基中蔗糖浓度20 g/L，琼脂浓度5.0 g/L。培养瓶 放置于培 养室中，培养温度、光照强度和 光照 时间 同3.1。35 d 后 长 出 丛 生 芽。6 生根培 养 当诱导 出的 泡桐 芽长 到约3 cm时，从茎 基部切 下，接 种于附 加不 同浓度NAA（0.1 mg/L 0.5 mg/L）的1/2MS 培 养基 上进 行生 根 培养，培养 基中 蔗糖 质量 浓度为20 g/L，琼脂4.5 g/L。培 养瓶 放置 于培 养室中，培 养温 度、光照 强 度 和光照 时间 同4.1。7 d 后 分化出 根。7 炼苗 与移 栽 当泡桐 幼苗的 根在 生根培 养基上 长到约3 cm 时，逐 步去掉 组培瓶 盖，在温室 内锻炼7 d，然后 移 入盛有蛭 石或草 炭土（经5%的高锰 酸钾消 毒处 理或121 高温 灭菌20 min）的 营 养钵中。用1/2MS 营养液浇灌湿 润，放 到温 室中培 养，温 室温度25 28，开 始2周 空气湿 度85%以上，2 周后 湿度逐 渐降 低与室外 环境 相同，4 5周 后，可 以移 栽到 大田 中。8 档案管 理 建立泡 桐组 织培 养基 本情 况档案，包 括以 下内 容：品种名 称、材料 来源、培 养过程、培 养照 片 等。档案由 组培 人员 填写，档 案填 写 后，及时 整理 归档。_