ICS 65.020.20 B 05 备案号：DB42 湖北省地方标准 DB42/T 1257 2017 蓝莓组织 培养育苗 技术规程 Technical regulations for in vitro propagation of blueberry(报批 稿)2017-04-12 发布 2017-06-01 实施 湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发布 DB42/T 1257 2017 I 目 次 前言.1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 外 植体 的采 集与 处理.1 4.1 母株 的选 择.1 4.2 外植 体采 集.1 4.3 外植 体的 标记 与运 输.2 4.4 外植 体消 毒.2 5 蓝 莓组 织培 养.2 5.1 初代 培养.2 5.2 继代 培养.2 5.3 壮苗 培养.2 6 生 根培 养.3 6.1 生根 设施.3 6.2 生根 基质.3 6.3 扦插 时间.3 6.4 扦插 炼苗.3 6.5 扦插.3 7 扦 插后 的管 理.3 7.1 温度.3 7.2 光照.3 7.3 湿度.3 7.4 施肥.3 7.5 病虫 害防 治.3 8 移栽.3 9 出圃.4 10 包 装、标志、运 输和 贮存.4 10.1 包装.4 10.2 标志.4 10.3 运输.4 10.4 贮存.4 附录A（资料 性附 录）蓝 莓茎段 组织 培养 的培 养基 配方.5 DB42/T 1257 2017 II 前 言 本标准 按 照 GB/T 1.1 2009 标 准化 工作 导则 第 1 部分：标准 的结 构与 编写 给出 的规 则起 草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 这些 专利的 责任。本标准 由湖 北省 农业 科学 院提出。本标准 由 湖 北省 农业 科学 院归口 管理。本标准 起草 单位：湖 北省 农业科 学院 果树 茶叶 研究 所、湖 北省 鑫民 生态 农业 开发有 限公 司。本标准 起草 人：秦仲 麒、涂俊凡、李 先明、杨 夫臣、伍涛、朱 红艳、刘 政、叶小伍。DB42/T 1257 2017 1 蓝 莓组织 培养育苗 技术规 程 1 范围 本 标准 规 定 了蓝 莓组 织培养 育苗 外植 体的 采集 与 处理、蓝 莓组 织培 养、生根培 养、扦插 后的 管理、移栽、出圃 以及 包装、标志、运输 和 贮存。本 标准 适用 于湖 北省 蓝莓 主 栽品 种 组 培苗 的生 产。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 8321（所 有部 分）农药合 理使 用准 则 NY/T 496 肥 料合 理使 用 准则 通则 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 标准。3.1 蓝莓组 培苗 buleberry tissue cultured plantlets 利用蓝 莓芽 或带 芽茎 段作 为外植 体，采用 组织 培养 技术生 产的 苗木。3.2 蓝莓外 植体 blueberry explants 用于蓝 莓无 菌培 养 的 器官 或组织，如 一年 生嫩 枝。3.3 壮苗培 养 strong seedling culture 将增殖 的蓝 莓丛 芽剪 成单 芽茎段 接种 到壮 苗培 养基 中 培养 使其 长高 长粗。4 外植体 的采 集 与 处理 4.1 母株的 选择 选取生 长健壮 和 无病 虫害 的蓝莓 作为 外植 体采 集的 母株。4.2 外植体 采集 4.2.1 采集时 间 4 月-7 月份 晴天 午后 或叶片 表面 露水 干后 采集 外植体。4.2.2 采集方 法 DB42/T 1257 2017 2 剪取生 长健 壮且 无病 虫害 的当年 生嫩 枝，去掉 叶片 并 留1 mm 2 mm 叶柄。4.3 外植体 的标 记与 运输 采集外 植体 时，应对 每个 母株的 外植 体加 标签，标 明母株 名称、采 集地 点及 采集时 间等。采 集的 外植体宜 当天 进行 消毒 处理。若需 要长 途运 输或 储藏2 d3 d，宜 用保 湿材 料包 扎。4.4 外植体 消毒 用洗洁 精将 外植 体清 洗干 净，流水 冲洗10 min 20 min。在超净 台上，将 外植 体剪成4 cm 5 cm 的茎段，用75%酒精 浸泡 处理10 s 30 s，无菌 水冲 洗3 次，再 用0.1%砷汞 溶液消毒6 min 8 min，无菌 水冲洗5 次，无菌 滤纸 吸干 水 分。5 蓝莓组 织培 养 5.1 初代培 养 5.1.1 接种与 转接 用无菌 的手 术刀 和镊 子将 嫩枝均 匀分 割成0.5 cm 0.8 cm 的小段，接 种于 无菌 的诱导 培养 基上。首次接种5 d 7 d 应将 外植 体 转 接到 新鲜 的初 代培 养基 上，35 d45 d 嫩芽 长出 后 继代增 殖培 养。5.1.2 培养条 件 25 2。黑 暗培 养7 d 后，转 入光 照培 养。光照 时间 每天12 h 16 h，同 一培 养层内 底部 光照 强度20m ol m-2s-140m ol m-2s-1。5.2 继代培 养 5.2.1 转接 将 培养 材料 及时 转接 到 新鲜的 增殖 培养 基中，把 嫩茎剪 成 1cm 左右的 茎段，插入 新鲜 的增 殖培 养基中。污 染、玻璃 化的 增殖 苗均应 废弃，其 中污 染苗 应杀菌 后再 废弃。5.2.2 培养条 件 25 2。光照 时间 每天12 h 16 h，光照 强度 20m ol m-2s-140m ol m-2s-1。5.2.3 培养周 期 培养周 期为40 d 60 d。5.2.4 增殖材 料更 新 增殖 材 料出 现退 化，生长 速度慢、苗 瘦弱 时，应重 新采集 外植 体更 新繁 殖材 料。5.3 壮苗培 养 将 继 代 苗 剪 成 1.0 cm 1.5 cm 茎 段，转 接 到 壮 苗 培 养 基 中。温 度 20 30，光 照 强 度30m ol m-2s-140m ol m-2s-1。培养50 d 80 d后的无根试 管苗 用于 扦插 生根。DB42/T 1257 2017 3 6 生根培养 6.1 生根设 施 具备遮 阴、喷雾 及调 温的 温室或 塑料 大棚。6.2 生根基 质 为苔藓或草炭与珍珠岩(体积比为1:1)的混合物。基质用0.5 g/L 多菌灵（80%可湿性粉剂）溶液或0.1%0.2%的 高锰 酸钾 处 理，pH 调至4.55.0。苔 藓浸泡 后的 湿度 为紧 握有 少量水 滴出。6.3 扦插时间 扦插 季 节宜 为春 季或 深秋。6.4 扦插炼苗 扦插 前，将 培养 瓶苗 放在 覆盖单 层遮 阳网 的温 室，闭瓶炼 苗3 d7 d，后再 开 口炼苗1 d 2 d。6.5 扦插 炼 苗 结 束后，轻轻 从培 养基 中 取 同种 类 及浓 度生 根剂 溶 液 中浸 蘸20 s 捞 出。穴 盘 经0.5 g/L 多菌灵（80%可湿 性粉 剂）溶 液喷 洒灭菌 待用。戴无 菌手 套 将蓝莓 芽苗 用无 菌苔 藓包 裹后扦 插到 灭好 菌的 穴盘中。7 扦插 后 的管 理 7.1 温度 温度保 持15-30。温 度过低 通过 空调 或地 热加 热，温 度过 高通 过遮 阴、喷雾或 通风 系统 降温。7.2 光照 移植1 个月 内，光 强控 制在30m ol m-2s-150m ol m-2s-1。1个月 后光 强逐 渐增 加到40 m ol m-2s-110 0m ol m-2s-1。7.3 湿度 通过喷 雾保持 小拱棚 内空 气相对 湿度95%以上，一 个月后 保持湿 度60%70%。扦插 后立即 扣小 拱棚保湿，常 通风 换气。7.4 施肥 组培苗 生根 后每2周 喷施 磷 酸二氢 钾 溶 液，稀释 浓度3000 倍。7.5 病虫害 防治 病虫害 防 治 除按照GB/T 8321（所 有部 分）执行 外，还 应符 合 农 业部 现行 有关 农药公 告的 规定。8 移栽 DB42/T 1257 2017 4 扦插3 个月 后，移栽 前 控 水 和增加 光照 强度 培养7 d10 d。移栽 基质 为草 炭、园土、河沙（体 积比为4：4：2）或草 炭、园土、珍 珠岩（体 积比 为4：4：2）的 混合 土，pH5.5。基 质 用0.5g/L 的多菌 灵（80%可湿性 粉剂）溶 液喷 透备 用。选择生 长健 壮、无病 虫害 的生根 苗移 栽。移栽 后微 喷灌喷 透水，外 罩遮 阳网，促成 缓苗。根 据蓝 莓的基芽 萌发及 枝条 生长情 况，一 般每隔2 周喷 施1次2000-3000 倍 磷酸二 氢钾 或 复合肥。肥料 购买、贮存及处理 等按 照NY/T 394 的 规定执 行。9 出圃 二年生 苗高40 cm 以上，有35个 分枝，叶 浓绿，具 有完整 而发 达的 根系，无 检疫性 病虫 害。10 包装、标志、运输 和 贮存 10.1 包装 组培 苗 需整 齐摆 放在 车厢 内，防 止压 折组 培苗 主干 及枝条。10.2 标志 组培苗 应按 品种、规 格、数量、育苗 单位、出 厂（圃）日 期等 做好 标记，并 备注目 的地、联 系人、注意事 项。10.3 运输 组 培苗 用厢 式货 车运 输，并 保持 通风 透气；运 输途中 避免 日晒、雨 淋；装车时 小心 轻放。10.4 贮存 组培苗 应在 当日 装运，到 达目的 地后 立即 卸车，并 置于荫 棚或 阴凉 处，及早 定植。若有 特殊 情况 无法及时 定植，应 注意 浇水 保持组 培 苗 湿润。DB42/T 1257 2017 5 附 录 A（资料 性附 录）蓝莓组 织培 养育苗 的 培养 基配方 表 A.1 所 示了 蓝莓 组织 培 养育苗 的培 养基 配方 的内 容。表A.1 育苗 培养 基配 方 单位为 毫克 每升 成分 诱导培养基 继代培养基 壮苗培养基 大量元素 NH4NO3 400 400 400 MgSO4.7H2O 370 370 370 CaCl2.2H2O 96 96 96 Ca(NO3)2.4H2O 556 556 556 KH2PO4 170 170 170 K2SO4 990 990 990 微量元素 H3BO3 6.2 6.2 6.2 MnSO4.H2O 22.3 22.3 22.3 ZnSO4.7H2O 8.6 8.6 8.6 Na2MoO4.2H2O 0.25 0.25 0.25 CuSO4.5H2O 0.25 0.25 0.25 有机 物 盐酸硫胺素(VB1)0.5 1.0 0.5 1.0 0.5 1.0 烟酸(VB3)0.5 0.5 0.5 盐酸吡哆醇(VB6)0.25 0.5 0.25 0.5 0.25 0.5 甘胺酸 2.0 2.0 2.0 蔗糖 30000 30000 30000 肌醇 肌醇 100 100 100 铁盐 FeSO4.7H2O 27.8 27.8 27.8 Na2.EDTA 37.3 37.3 37.3 介质 琼脂 7000 7000 7000 激素 ZT 1.0 5.0 1.0 5.0 0.5 1.0 IBA/0.05 0.2/pH 值 5.2 5.4 5.2 5.4 5.2 5.4 _