I C S 6 5.0 2 0.2 0B 6 1DB32江 苏 省 地 方 标 准D B 3 2/T 3 3 0 6 2 0 1 7蓝 莓 组 培 脱 毒 种 苗 生 产 技 术 规 程T e c h n i q u e r u l e s f o r t h e V i r u s-f r e e p l a n t l e t p r o d u c t i o n o f B l u e b e r r y点 击 此 处 添 加 与 国 际 标 准 一 致 性 程 度 的 标 识文稿版次选择2 0 1 7-0 9-2 5 发 布 2 0 1 7-1 0-2 5 实 施江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局发 布D B 3 2/T 3 3 0 6 2 0 1 7I前 言本 标 准 按 照 G B/T 1.1-2 0 0 9 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 的 结 构 及 编 写 给 出 的 规 则 编 写。本 标 准 由 江 苏 农 林 职 业 技 术 学 院 提 出。本 标 准 由 江 苏 农 林 职 业 技 术 学 院 起 草。本 标 准 主 要 起 草 人：王 永 平、宗 树 斌、刘 玉 华、许 建 民、王 珊、任 焕 焕。D B 3 2/T 3 3 0 6 2 0 1 71蓝 莓 组 培 脱 毒 种 苗 生 产 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 蓝 莓 组 培 脱 毒 种 苗 生 产 技 术 规 程 的 脱 毒、外 植 体 消 毒、初 代 培 养、病 毒 检 测、继 代 培养、壮 苗 培 养、驯 化 生 根、上 钵、苗 期 管 理、生 产 记 录 等。本 标 准 适 用 于 全 省 蓝 莓 组 培 脱 毒 种 苗 的 生 产。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。G B 4 2 8 5 农 药 安 全 使 用 标 准G B/T 8 3 2 1(所 有 部 分)农 药 合 理 使 用 准 则3 脱 毒3.1 母 株选 择 具 有 品 种 典 型 特 征 特 性、生 长 势 强、目 测 无 病 症 的 优 良 单 株。3.2 热 处 理 钝 化 病 毒取 母 株 的 侧 枝 嫩 梢，放 入 病 毒 钝 化 处 理 器，6 0 热 击 1 0 s。4 外 植 体 消 毒将 经 热 处 理 的 嫩 梢 剪 取 放 入 烧 杯，纱 布 封 口，自 来 水 冲 洗 3 0 m i n 6 0 m i n，用 7 5%乙 醇 浸 润 1 3 0 s 后，用 无 菌 水 洗 净，再 放 入 5%1 0%的 N a C l O 溶 液 中 浸 泡 1 0 m i n 1 5 m i n 后，用 无 菌 水 冲 洗 5 次，再 用 无 菌 滤 纸吸 去 表 面 水 分，置 于 无 菌 培 养 皿 中 备 用。5 初 代 培 养5.1 初 代 培 养 基W P M+I B A 0.0 5 m g/L+Z T 0.5 m g/L，p H 5.0。5.2 接 种在 超 净 工 作 台 上，用 已 灭 菌 的 剪 刀、镊 子 将 消 过 毒 的 外 植 体 均 匀 分 成 1.5 c m 2.0 c m 的 小 段，每 段 含1 芽 2 芽，接 种 于 初 代 培 养 基 中，每 瓶 5 株 1 0 株。注 明 品 种、编 号 和 接 种 日 期。5.3 培 养 条 件D B 3 2/T 3 3 0 6 2 0 1 72温 度 2 5 2、光 照 强 度 2 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x、光 照 时 间 1 6 h/d，培 养 1 0 0 d 1 2 0 d。6 病 毒 检 测抽 取 初 代 培 养 的 蓝 莓 无 菌 苗 进 行 蓝 莓 枯 焦 病 毒(B L S c V)、蓝 莓 急 性 坏 死 病 毒(B L S h V)、蓝 莓 鞋 带 病毒(B S S V)、蓝 莓 红 环 斑 病 毒(B R R V)、蓝 莓 坏 死 环 斑 病 烟 草 环 斑 病 毒(T R S V)、蓝 莓 叶 片 斑 点 病 毒(B L M V)的 病 毒 检 测。检 测 方 法 采 用 P C R/R T-P C R。无 病 毒 苗 作 为 核 心 种 苗 继 代 扩 繁 培 养。7 继 代 培 养7.1 继 代 培 养 基W P M+N A A 0.5 m g/L+Z T 1 m g/L，p H 5.0。7.2 培 养 条 件温 度 为 2 5 2，光 照 强 度 1 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x，光 照 时 间 1 2 h/d 1 6 h/d。6 0 d 9 0 d 培 养 一 代，培 养不 超 过 1 5 代。8 壮 苗 培 养8.1 壮 苗 培 养 基W P M+I B A 0.1 m g/L，p H 5.0 5.5。8.2 培 养 条 件温 度 为 2 5 2，光 照 强 度 2 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x，光 照 时 间 1 4 h/d 1 6 h/d。培 养 9 0 d 1 2 0 d。9 驯 化 生 根9.1 生 根 设 施在 苗 床 上 搭 建 高 度 5 0 c m 的 小 拱 棚，安 装 喷 灌 设 备，苗 床 上 面 铺 一 层 无 纺 布，拱 棚 上 面 覆 盖 塑 料 薄 膜，上 盖 遮 阳 网。9.2 基 质选 用 苔 藓 作 为 专 用 基 质，浸 泡 1 2 h 甩 干，湿 度 控 制 在 4 0%6 0%，塞 进 5 1 0 的 穴 盘 内。9.3 炼 苗将 培 养 瓶 放 入 温 室 内，上 盖 一 层 遮 阳 网，封 口 炼 苗 7 d,然 后 打 开 遮 阳 网，把 瓶 盖 拧 松，再 炼 苗 7 d。9.4 扦 插选 择 生 长 健 壮、长 度 5 c m 以 上、木 质 化 程 度 好 的 组 培 苗 进 行 扦 插，先 用 清 水 清 洗 掉 培 养 基，剪 去 根部 膨 大 部 分，去 掉 下 部 三 分 之 一 的 叶 片，在 萘 乙 酸(N A A)1 0 0 0 m g/L 的 生 根 液 中 浸 蘸 1 m i n，然 后 用 镊 子 捏住 插 穗 基 部，插 入 塞 好 苔 藓 的 穴 盘 内 压 紧。每 穴 1 株，插 入 的 深 度 为 2 c m 3 c m。D B 3 2/T 3 3 0 6 2 0 1 739.5 插 后 管 理插 后 立 即 喷 水 1 次。1 5 d 内 每 天 叶 面 喷 水 2 次 3 次，相 对 湿 度 控 制 在 8 0%1 0 0%，1 5 d 后 开 始 生 根 并 长出 新 叶，每 天 喷 水 1 次，湿 度 控 制 在 7 0%左 右，3 0 d 后 去 掉 拱 棚 上 的 遮 阳 网 和 塑 料 薄 膜，湿 度 控 制 在 6 0%左 右。温 度 控 制 在 2 0 3 0。1 0 上 钵1 0.1 栽 培 容 器选 用 1 3 1 2 黑 色 软 质 营 养 钵 为 宜。1 0.2 栽 培 基 质壤 土、草 碳 土、腐 锯 末 按 3:1:1 的 体 积 比 例 混 合，加 入 硫 磺 粉 均 匀 混 拌。1 m3基 质 使 用 硫 磺 粉 0.7 5 k g 1 k g 将 基 质 p H 值 调 至 4.5 5.5。1 0.3 上 钵 时 间须 根 长 至 3 c m，苗 高 超 过 1 0 c m 时 进 行 上 钵 移 植。1 0.4 上 钵 移 植先 装 填 基 质 至 营 养 钵 的 1/3 处，然 后 把 苗 从 穴 盘 内 取 出 放 到 营 养 钵 的 中 央 扶 正，再 把 四 周 填 满 基 质，稍 用 力 压 紧，使 基 质 低 于 营 养 钵 上 沿 2 C M 3 c m。每 钵 一 株，浇 透 水。1 1 苗 期 管 理1 1.1 温 湿 度 管 理白 天 温 度 2 5 3 0，夜 间 不 低 于 1 3，基 质 温 度 不 低 于 1 5，基 质 含 水 量 在 5 0%6 0%。1 1.2 水 肥 管 理缓 苗 期 保 持 基 质 湿 润；速 生 期 应 量 多 次 少，见 干 见 湿；生 长 后 期 要 控 制 浇 水。速 生 期 以 氮 肥 为 主，磷、钾 肥 为 辅；生 长 后 期 停 止 使 用 氮 肥，适 当 增 加 磷、钾 肥。追 肥 结 合 浇 水 进 行，浓 度 控 制 在 0.1%0.2%。速 生 期 每 月 施 3 次。1 1.3 病 虫 害 防 治贯 彻 预 防 为 主，综 合 防 治 的 方 针，选 用 生 物 农 药、高 效、低 毒、低 残 留 的 化 学 农 药，交 替 用 药，改进 施 药 技 术，降 低 农 药 用 量，化 学 农 药 按 G B 4 2 8 5、G B 8 3 2 1 的 规 定 执 行。1 1.4 其 他 管 理育 苗 期 发 现 容 器 内 基 质 下 沉，及 时 填 满，经 常 挪 动 容 器 进 行 重 新 排 列 并 截 断 伸 出 容 器 外 的 根 系。1 2 生 产 记 录做 好 全 程 记 录，并 将 记 录 保 持 2 年。D B 3 2/T 3 3 0 6 2 0 1 74_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _