ICS 65.020.40 B 61 DB51 四川省地方标准 DB51/T 24082017 金线莲无性繁育技术规程 2017-09-19发布 2017-10-01实施四川省质量技术监督局 发布 DB51/T 24082017 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 繁殖材料来源.2 5 繁育技术.2 6 栽培技术.3 7 病虫害防治.5 8 苗木采收与加工.5 附录 A（资料性附录）金线莲组培快繁培养基配方.7 附录 B（资料性附录）金线莲主要虫害综合防治.8 附录 C（资料性附录）金线莲主要病害综合防治.9 DB51/T 24082017 II 前 言 本标准按 GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则的规定编写。本标准由四川省林业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准主要起草单位：四川省林业科学研究院。本标准主要起草人：刘均利、陈善波、刘海鹰、罗慧、武华卫、吴宗兴、杨晓蓉、张晓成、刘青、吴斌、白斌、梁颇、吴泞孜、杨柳璐、王莎。DB51/T 24082017 1 金线莲无性繁育技术规程 1 范围 本标准规定了四川地区金线莲种苗繁育的主要技术指标和要求，包括术语和定语、组培快繁技术、大棚及林下栽培技术、采收与加工等方面的原则。本标准适用于四川省的金线莲种苗繁育、大棚和林下栽培、采收及初加工项目。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 3095 环境空气质量标准 GB 4285 农药安全使用标准 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 15618 土壤环境质量标准 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 22278 良好实验室规范原则 NY/T 393 绿色食品农药使用准则 NY/T 394 绿色食品肥料使用准则 3 术语和定义 3.1 金线莲 Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.金线莲为兰科（Orchidaceae）开唇兰属（Anoectochilus）多年陆生单子叶植物，别称金线兰、金草、鸟人参、少年红、金线虎头蕉，广泛分布于我国福建、广东、广西、海南、四川、贵州、云南等地。具有凉血祛风、除湿解毒、止痛镇咳等功效。3.2 外植体 Explants 植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段，在继代培养时，将培养的组织切段移入新的培养基时，这种切段也称外植体。3.3 污染 Contamination 培养基或培养材料生长有真菌或细菌等微生物的现象。DB51/T 24082017 2 3.4 光培养 Light culture 有光照的培养。3.5 暗培养 Dark culture 全天无光照的培养。3.6 增殖培养 Proliferation culture 离体芽苗、愈伤组织或悬浮培养细胞不断倍增的培养过程。3.7 生根培养 Rooting culture 诱导无根离体芽苗产生根的培养过程。3.8 瓶苗 Tube seedling 通过植物组织培养产生的离体小植株。3.9 瓶苗炼苗 Acclimatization 将组培苗连培养容器一起移至室外近自然环境中培养，提高苗木的木质化程度，增强苗木对自然光照和温差变化适应能力的过程。3.10 移栽 Outplanting 将组培苗种植到苗圃，并使苗木逐渐适宜自然条件的过程。3.11 基质 Substrate 种植中用来固定植株及贮存植物所需水分、养分的材料。4 繁殖材料来源 选生长健壮无病虫害的植株为外植体。5 繁育技术 金线莲种子高度败育，种子繁殖难度过大，组培快繁技术是目前唯一最有效的金线莲优良种质资源繁育技术手段。5.1 外植体的采集、消毒与接种 DB51/T 24082017 3 5.1.1 外植体的采集与处理 连续2个以上的晴天午后进行采集，当天采集当天消毒接种。需长途运输时应使用保湿材料包扎，置入保温桶内加冰袋降温保鲜处理，或使用车载冰箱储藏保鲜。5.1.2 外植体消毒 外植体用洗洁剂溶剂（如洗衣粉等）洗净，流水冲洗30min。在超净工作台上，将植株切分成1cm左右带芽茎段，先用75%乙醇消毒20s，再用0.1%HgCl2加3滴4滴0.08%0.12%的吐温-80或吐温-20消毒液浸没5 min7 min（其间轻轻震摇），用无菌水清洗3次5次，备用。5.1.3 外植体接种 将消毒后的外植体切割为带1个顶芽或腋芽的枝段，切割好后平放在附录A所示诱导培养基上。外植体接种后暗培养7d10d再转入光培养。培养温度2025。5.2 增殖培养 初代诱导培养基上培养2个月后，转接至附录A所示增殖培养基上进行增殖扩繁。5.3 生根培养 增殖培养基上培养4个月，苗木高度达到4cm时，转接到附录A所示生根培养基上进行生根培养。培养2个月后进行炼苗。5.4 一步成苗培养 初代诱导培养基上培养2个月后，转接至附录A所示一步成苗培养基上培养，5个月后苗木高度达到5cm时，进行炼苗。5.5 培养条件 培养室温度2025，光照强度2000lx，光照时间10h/d12h/d。5.6 炼苗 瓶苗炼苗时置于不淋雨的棚内进行，棚内配遮阴网，随炼苗时间增加逐步提高光照。炼苗环境温度1030。炼苗时间2周4周，冬季长，夏季短。5.7 洗苗及包装运输 用清水将瓶苗上的培养基洗净，放入泡沫箱中，外加胶带密封。之后置于阴凉处，避免暴晒。运输时间不超过2d，环境温度控制在1030之间，运输途中严禁倒置翻转。运至目的地后，尽快种植。若种植时间超过3d，应将苗木全部直立放置，每日喷雾补水，全程注意遮阴。6 栽培技术 6.1 栽培场地 6.1.1 大棚栽植 大棚顶部和侧面均需配备遮光率80%的遮阴网。DB51/T 24082017 4 6.1.2 林下栽植 根据林地坡向进行作畦，畦面宽100cm120cm，高出地面10cm15cm，长度依地形而定，畦沟和围沟宽20cm25cm，深10cm15cm，使沟相通。6.2 栽植环境 对栽植地的选择要符合GB3095环境空气质量标准、GB5084农田灌溉水环境质量标准、GB15618土壤环境质量标准。6.3 栽植时间 每年3月5月。6.4 栽植方式 6.4.1 大棚栽植 用容器栽植，选用平盘或筛盘，筛盘上覆无纺布，栽植株行距5cm5cm或5cm8cm。6.4.2 林下栽植 林下利用原土（腐殖土）栽植，栽植株行距8cm10cm。栽植深度2cm左右，2 条3条气生根植入土中。6.5 基质准备 6.5.1 基质选择与处理 基质选用树皮、草炭土、腐殖土，配以少量珍珠岩。树皮需粉碎成0.5cm1.0cm。所有基质经充分腐熟后使用。6.5.2 基质配制 容器栽植两种基质配方可选：树皮：草炭土/腐殖土：珍珠岩=6：3：1；树皮/草炭土/腐殖土：珍珠岩=10：1。林下种植直接利用林下腐殖土，整地疏松后使用。6.5.3 基质消毒 移栽前1d2d，将育苗基质用0.3%高锰酸钾溶液淋透消毒。6.6 栽植温度及光照 栽植温度16 28，光照强度2500lx4000lx。6.7 苗木处理 将组培苗用0.1%百菌清或其它灭菌剂溶液进行消毒处理后移入育苗基质。6.8 栽植苗光湿温的管理 移栽完成后，浇透定根水，盖上塑料薄膜和遮阴网，温度2030，空气相对湿度85左右。移植苗根系发育完好生长稳定后逐步揭除塑料薄膜和遮荫黑网。6.9 后期管理 6.9.1 水分 DB51/T 24082017 5 浇水以维持基质湿润为原则，夏季浇水避开中午。6.9.2 施肥 幼苗移植10d后，施稀释至1500倍2000倍的叶面肥。在基质养分能够满足苗木生长的情况下，少施或不施肥。6.9.3 除草 及时拔除杂草，保持苗床的清洁。6.9.4 动物危害 表1 动物危害及防治方法 动物类型 防治方法 大型动物 在种植地四周搭设铁网围挡 小型动物 通过放置诱饵的方法进行预防 鸟类 在苗木上部加设网子 6.9.5 露地保护 野外栽植的苗木，越冬需加设薄膜或稻草覆盖以保温。7 病虫害防治 严格执行“以防为主，防治结合”的办法。采用物理防治、化学防治相结合的方法进行。选用高效低毒、低残留的农药，禁止使用国家明令禁止的农药。发现病害植株及时移除，采收前1个月禁止施药。7.1 化学防治 病虫害防治以有机产品为标准，允许使用矿物源农药和低毒有机合成农药，农药使用要符合NY/T 393 绿色食品农药使用准则，严禁直接在植株上施用化学农药。7.2 物理防治 大棚栽植可在大棚通风口设置防虫网，野生栽植可设置糖醋液盆诱杀部分害虫，也可采用诱虫色板、频振式杀虫灯等方法诱杀害虫。7.3 生物防治 应用细菌、真菌、病毒、植物提取液、抗生素等制成的生物农药或引入害虫天敌杀灭病虫，减轻害虫对植物的危害。主要病虫害及防治方法见附录B、附录C。8 苗木采收与加工 8.1 采收标准 DB51/T 24082017 6 苗木培育6个月，叶片5片，株高15cm，单株重量3g，即符合采收标准。8.2 采收方法 剔除病株后全株采收，含根与地上部分,采收时抖净根部泥土，再用清水洗净植株，置于塑料筐中沥干，之后根据需要进行鲜品装盒或干品烘制。原生境种植时，可只剪取地上部分，保留地下部分继续生长。8.3 加工 将采收后的植株清洗干净，60烘干，产品水分含量降低到10%以下，置于通风干燥处密封保存。DB51/T 24082017 7 A A 附 录 A（资料性附录）金线莲组培快繁培养基配方 药品类别 药品名称 诱导培养基（mg/L）增殖培养基（mg/L）生根培养基（mg/L）一步成苗培养基（mg/L）KNO3 1900 1900 950 1800 NH4NO3 1650 1650 825 1100 MgSO4.7H20 370 370 185 370 KH2PO4 170 170 85 200 NaH2PO4.2H2O 0 0 0 100 CaCl2 440 440 220 220 大量元素 Ca(NO3)2.4H2O 0 0 0 300 H2BO3 6.2 6.2 6.2 6.2 MnSO4.H2O 22.3 22.3 22.3 22.3 ZnSO4.7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 Na2MoO4.2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 CoCl2.6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 CuSO4.5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 微量元素 KI 0.83 0.83 0.83 0.83 FeSO4.7H20 27.8 27.8 27.8 27.8 铁盐 Na2-EDTA 37.3 37.3 37.3 37.3 肌醇 100 100 100 100 甘氨酸 2 2 2 2 VB5 0.5 0.5 0.5 0.5 VB6 0.5 0.5 0.5 0.5 VB1 0.1 0.1 0.1 0.1 L-半胱氨酸 0 0 0 0.5 VC 0 0.5 0.5 0.5 有机物 生物素 0 0 0 0.3 6-BA 2.0 1.0 0 0 NAA 0.5 0.2 0.3 0 生长调节剂 IBA 0 0 0.5 0 碳源 白糖 30000 30000 25000 25000 凝固剂 卡拉胶 7000 7000 7000 6000 花宝1号 0 0 0 500 花宝5号 0 0 0 500 其他有机添加物 香蕉泥 0 0 0 30000 防褐化剂 活性炭 500 500 500 500 注：配制铁盐螯合物应先将FeSO4.7H20和Na 2-EDTA分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将FeSO4.7H20溶液缓缓加入到Na2-EDTA溶液中进行螯合，再与其他溶液混合。DB51/T 24082017 8 B B 附 录 B（资料性附录）金线莲主要虫害综合防治 虫害种类 危害说明 防治方法 地老虎（夜蛾类）3月4月，8 月10月为高发期，白天潜伏土表层，3 龄前幼虫危害叶心、叶片，3 龄后危害幼苗嫩茎，造成枯死。1、早春清园，防止成虫产卵。2、频振式杀虫灯诱杀、采取人工捕捉。3、糖醋液(糖、醋、酒、水3:4:1:2)加少量杀虫剂进行诱杀盆诱杀。蜗牛、蛞蝓等软体动物 夏季为高发期，主要危害金线莲柔软组织，如根端、嫩芽，严重影响金线莲生长。1、采取人工捕捉。2、地面铺撒适量生石灰或密达。蝼蛄 5月、8月9 月为虫害高发期，主要咬食幼苗根茎造成幼苗死亡，在土中穿行，形成隆起孔道使植株离土，失水干枯。1、人工捕杀。2、马粪鲜草诱杀，每20cm挖一小坑，马粪和鲜草切成3cm4cm，放入坑中，并加入淡盐水或杀虫剂。3、土壤中接种白僵菌。4、黑光灯诱杀。红蜘蛛及螨类 一般在干燥的环境和气温高的热天容易发生，主要危害叶片，被害叶面出现小黄点，严重时造成叶片脱落。1、人工清除虫害植株。2、用肥皂泡水喷洒叶片两面，形成一层薄膜，防止和减少螨类寄生。3、20%复方浏阳霉素 100 倍液或阿维苏 2000倍液喷施。DB51/T 24082017 9 C C 附 录 C（资料性附录）金线莲主要病害综合防治 病害种类 危害说明 防治方法 根腐病（烂根病）多在春、夏多雨季节发生，4月5月发病高峰期，主要危害植株根部。1、加强栽培管理，提高营养水平，增强生长势，提高抗病能力。2、要及时除草，做好排水工作。3、及时清除病株。4、发病初期用50多菌灵可湿性粉剂800倍1000倍液喷施防治。白绢病 属于真菌危害，该病多在春夏之交的梅雨季节以及秋雨连绵时发生，主要危害植物的根部及茎基部。用50福多宁可湿性粉剂3000倍液或75灭普宁可湿性粉剂1000倍液喷雾防治，每隔7d喷1次，连续喷2次3次。茎枯病 属于真菌危害，5月10月为危害期，初发于茎基部，病菌侵入到髓部导致病苗茎杆中空易折断，病苗上部枯死。1、加强田间管理，提高植株抗病能力。2、病害发生后，用50扑海因可湿性粉剂1500倍液，70甲基托布津可湿性粉剂600倍液，50多菌灵可湿性粉剂500倍液等，视病情5d14d防治1次。猝倒病 多发于早春，病苗茎基部感病，初为水渍状，很快扩展、溢缩变细如“线”样，病部呈黄褐色。病势发展迅速，幼苗迅速倒伏死亡，出现猝倒现象。1、注意空气流通，避免高温高湿。2、用75百菌清可湿性粉剂600倍液，或50多菌灵 可湿性粉剂600倍液喷洒。3、见零星病苗就应及时喷药，以提高防治效果，每隔7d10d喷1次，连喷2次3次。黑腐病 属于真菌危害，6月8月的高温季节易发生。1、加强田间管理提高植株抗病能力，及时去除病株。2、在6月下旬用50多菌灵可湿性粉剂800倍液、或70甲基托布津可湿性粉剂800倍液喷洒防治黑腐病，每隔10d喷1次，连续喷6次8次。软腐病 细菌性危害，主要危害中下部内茎和近地表叶片叶柄。初期难易察觉，中期病症在基部约3cm的表皮出现褐色坏死斑，叶脉出现褐色湿腐，后期表现为全株萎，直立不倒伏，轻折即断。1、加强田间管理，保持苗床透光、透风。2、6月下旬用500万单位的农用链霉素400mgL药液喷施防治软腐病，每隔10d喷1次，连续喷6次8次。_ DB51/T 24082017