ICS 65.020.01 B 05 DB41 河南省地方标准 DB41/T 1927 2019 高油酸花 生四级种 子 生产技 术规程 2019-11-21 发布 2020-02-21 实施 河南省市场监督管理 局 发布 DB41/T 1927 2019 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规则 起 草。本标准 由河 南省 农业 农村 厅提出 并归 口。本标准 起草 单位：河 南省 农业科 学院 经济 作物 研究 所。本标准 主要 起草 人：刘娟、徐静、臧 秀旺、郝 西、张俊、郑峥、汤 丰收、齐 飞艳、石磊、张 忠信、韩锁义、郭 秀 璞、杜 红、王蒙、易明 林、张香 萍、王桂芳。DB41/T 1927 2019 1 高 油酸花 生四级种 子 生产 技术规程 1 范围 本标准 规定 了高 油酸 花生 育种家 种子、原 原种、原 种 和大 田用 种 的 四级 种子 生产要 求和 方法。本标准 适用 于高 油酸 花生 四级种 子生 产。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 3543.5 农作 物种 子 检验规 程 真实 性和 品种 纯度鉴 定 GB 5009.168 食品 安全 国 家标准 食 品中 脂肪 酸的 测定 GB 5084 农田 灌溉 水质 标 准 GB/T 7415 主 要农 作物 种 子贮藏 GB/T 8321（所 有部 分）农药合 理使 用准 则 NY/T 496 肥料 合理 使用 准则 通则 NY/T 855 花生 产地 环境 技术条 件 NY/T 1276 农 药安 全使 用 规范总 则 NY/T 2237 植 物新 品种 特 异性、一致 性和 稳定 性测 试指南 花生 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 高油酸 花生 种子脂 肪中 油酸 含量 75%的花生。3.2 四级种 子 在种子 生产 中，以育 种家 种子为 种源，运 用重 复繁 殖技术 路线，按 世代 顺序 繁殖的 育种 家种 子、原原种、原种 和大 田用 种的 种子。3.3 育种家 种子 育种家 育成 的最 初种 子，具有该 品种 特异 性、一致 性和遗 传稳 定性。用 白色 标签作 标记。3.4 原原种 由育种 家种 子直 接繁 殖而 来，具 有该 品种 特异 性、一致性 和遗 传稳 定性。用 白色标 签作 标记。3.5 原种 DB41/T 1927 2019 2 由原原 种直 接繁 殖而 来，具有该 品种 特异 性、一致 性和遗 传稳 定性。用 紫 色 标签作 标记。3.6 大田用 种 由原种 繁殖 用于 大田 生产 的种子，具 有该 品种 特异 性、一 致性 和遗 传稳 定性。用蓝 色标 签作 标 记。4 育种家 种子 4.1 种子来 源 育种家 种子。由 育种 者 通 过保种 圃繁 殖。4.2 地块选 择 种子圃 应选 择地 势平 坦、土层深 厚、质地 疏松、富 含有机 质、排灌 方便、远 离污染 源 的 地块，产 地环境应 符合NY/T 855 的要 求。育种家 保种 圃应 选择 上年 未种过 花生 的田 块，且周 围50 m 之内 不得 种其 它花 生品种。4.3 整地 及时耕 翻，精细 整地，做 到上虚 下实、平 整无 坷垃；耕地 前应 施足 底肥。4.4 种植 4.4.1 种子 发 芽率 测试 播种前 应进 行发 芽试 验，种子发 芽率应 80%。4.4.2 播种期 播种期 应以 连续5日 土壤5 cm 地温 稳定 在18 以上 为 宜。4.4.3 种植方 式 单粒点 播，行距35 cm 40 cm，株距17 cm 20 cm，行端设 走道0.8 m 1 m。四周设1 m 2 m 保护区，保 护区 种植 同品 种同 类别种 子。4.4.4 田间管 理 4.4.4.1 施肥 每666.7 m2施纯氮6 kg 10 kg，五氧化二磷5 kg 7 kg，氧化钾6 kg 8 kg。缺钙地块，每 666.7 m2增 施钙 肥（石膏）40 kg 50 kg。肥 料使 用应符 合NY/T 496 的 要求。也可随 播种 随施 肥，肥料 用量：三 元复 合肥（氮、磷、钾：15-15-15）40 kg/666.7 m250 kg/666.7 m2左右，种 肥与 种子 分离，防止 烧种。4.4.4.2 水分 管理 开花下 针期 至饱 果期 应及 时旱浇 涝排。灌 溉用 水应 符合GB 5084 的 要求。4.4.4.3 化学 调控 DB41/T 1927 2019 3 高肥水 田块 或有 旺长 趋势 的田块，株 高达 到30 cm35 cm 时，应及时 叶面 喷施 植物生 长延 缓剂，延缓 剂应 符合NY/T 1276 和GB/T 8321 的 规定。施 药后10 d 15 d，如果 主茎 仍有 旺 长趋势，可 再喷 施一 次。4.4.4.4 病虫 害防 治 病虫草 害防 治方 法见 附录A，药剂 使用 应符 合NY/T 1276 和GB/T 8321 的规 定。4.5 收获 4.5.1 收获期 地温 要求 收获期 最低 地温 应 不 低于12。4.5.2 收获要 求 摘果装 袋，做到 单收、单 运、单 脱，种子 袋内 外应 附标签，严 防机 械混 杂。4.6 晾晒与 贮藏 种子晾晒 时，气温 不低 于12。荚 果水 分低 于10%，单运单 贮。种 子贮 藏应 符 合GB/T 7415 的 要求。4.7 真实性 和品 种纯 度鉴 定 4.7.1 表型鉴 定 4.7.1.1 田间 鉴定 按品种 地上 部的 性状 典型 性和地 下部 的荚 果性 状典 型性进 行鉴 定，淘 汰非 典 型单株。鉴定、淘 汰应在苗期、开 花期、收 获期 等不同 阶段 分次 进行，直 至性状 典型 一致。鉴 定方 法按NY/T 2237 执行。4.7.1.2 油酸 含量 检测 油酸含 量测 定的 方法 按GB 5009.168 的要 求进 行；其 油酸含 量指 标应 符合 高油 酸花生 品种 指标 要求和该品 种本 质特 征。4.7.2 分子鉴 定 采用固 定数 目的 单核 苷酸 多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）引 物，通 过与 标准 样品比较或与 SNP 指 纹 数 据 比 对 平 台 比 对 的 方 式，对 品 种 真 实 性 进 行 验 证 或 身 份 鉴 定。具 体 检 测 方 法 见 附录B。5 原原种 5.1 种子来 源 育种家 种子。5.2 地 块选 择 繁种田 周围30 m 之内 不得 种植其 它花 生品 种。其它 应符合4.2 的要 求。5.3 整地 符合4.3的 要求。DB41/T 1927 2019 4 5.4 种植 符合4.4 的 要求。5.5 收获 符合4.5 的 要求。5.6 晾晒和 贮藏 符合4.6 的 要求。5.7 真实性 和品 种纯 度鉴 定 符合4.7 的 要求。6 原种 6.1 种子来 源 原原种。6.2 地块选 择 繁种田 周围30 m 之内 不得 种植其 它花 生品 种。其它 应符合4.2 的要 求。6.3 整地 符合4.3 的 要求。6.4 种植 单 粒播 种。行距30 cm 35 cm，株 距13 cm 16 cm，四 周设3 m 5 m 保 护 区，保 护区 种植 同品 种同类别种 子。6.5 收获 符合4.5 的 要求。6.6 晾晒和 贮藏 符合4.6 的 要求。6.7 真实性 和品 种纯 度鉴 定 符合4.7 的 要求。7 大田用 种 7.1 种子来 源 原种。7.2 地块选 择 DB41/T 1927 2019 5 应 尽量 选择 上年 未种 过花生 的田 块，若只 能在 连作花 生田 繁种，该 田块 上年所 种花 生必 须为 高 油 酸品种。7.3 整地 符合4.3 的 要求。7.4 种植 播种采 取穴 播，行距35 cm 40 cm，穴距17 cm 20 cm，每 穴两 粒。要求 连片 种 植，一 场一 种或 一村一种，严 防混 杂。7.5 收获 符合4.5 的 要求。7.6 晾晒和 贮藏 符合4.6 的 要求。7.7 真实性 和品 种纯 度鉴 定 符合4.7 的 要求。DB41/T 1927 2019 6 附 录 A（规范 性附 录）主要病 虫草 害防 治方 法 花生主 要 病 虫草 害防 治方 法见表A.1。表A.1 夏花生 主要 病虫 草害 防治 方法 种类 防治对象 防治时期 防治方法 病害 叶斑病和网斑病 发病率达到 5%7%用 80%代森锰锌可湿性粉剂 400 倍液，或 40%多菌灵胶悬 剂 1000倍液，或 75%百菌清可湿性粉 剂 600800 倍液进行茎叶喷 雾，每 667 m2用药液 75 kg，每 隔 10 d 左右喷1 次，连喷 2 3 次。根腐病和茎腐病 播种前 每 8 kg10 kg 种子用25%多菌 灵可湿性粉剂 100 g 拌种，或 用花生专用包衣剂包衣。发病初期 每 667 m2用 40%的多菌灵胶悬 剂或 70%的甲基托 布 津 100 g，兑水80 kg 100 kg，根部喷淋。病毒病 预防 及时防治蚜虫、叶蝉、蓟马等传播媒介，杜绝病毒来源。发病初期 用 5%的菌毒清水 剂 200 400 倍液叶面喷雾，每 667 m2用药 液40 50，7 d 10 d 喷1 次，连喷 2 3 次。青枯病 播种前 选用高抗青枯病的花生品种。发病初期 喷施 72%农用链霉素、新植霉 素、20%噻菌铜溶液等，每 667 m2用药液50 75，每 7 d 10 d 喷1 次，连喷2 次3 次。虫害 蛴螬 播种前 用辛硫磷拌种，或用花生专用包衣剂包衣。6 月下旬至7 月中下旬 物理防治：在田间放置黑光灯诱杀成虫。化学防治：每667 m2用50%辛硫 磷乳油或40%毒死蜱乳油0.2 kg0.25 kg，拌毒土撒施。生物防治：田间撒施白僵菌或绿僵菌或 Bt 菌剂。蚜虫 百株有蚜 250 头左右 10%高效吡虫啉可湿性粉 剂 4000 倍液，叶面喷施。红蜘蛛 有螨植株在 5%以上 1.8%阿维菌素乳油2000 4000 倍液或20%甲氰菊酯乳油1500 2000 倍液，每667 m2用药液 40 kg，7 d 10 d 喷1 次，连喷2 3 次。草害 芽前杂草 播种时 每 667 m2用 50%的乙草胺乳油 150 mL 或 72%的异丙甲 草 胺 乳 油100 mL 200 mL，兑水50 kg 喷施。DB41/T 1927 2019 7 A B 附 录 B（规范 性附 录）花生品 种真 实性 分子 标记 鉴定方 法 B.1 引物合 成 利用已 遴选的14 个 核心SNP 引物和36 个 扩展SNP 引物 作为品 种真 实性 验证 和身 份鉴定 的检 测引 物，构建已 知品 种 的SNP 指纹 数据比 对平 台。根据真 实性 验证 或身 份鉴 定的要 求，采用 序贯 式方 法，选 定 SNP 引 物。SNP 引 物采 用ULTRPAGE 的 方式进 行纯 化，将 Primer_Allele FAM（36 umol/L）、Primer_Allele HEX（36 umol/L）、Primer_Common（90 umol/L）三 种 引物 溶 解后 按体 积 比1:1:1 混匀 为 KASP 引物Mix。B.2 DNA提取 在种子 生产 基地 随机 取样，供检 样品 为叶 片或 种子，采用 混合 样 品 检测（至 少含 有 30 个个 体），先单独提 取DNA，再取 等量DNA 混 合。DNA 提 取方 法应 保证 提取 的 DNA 数量 和质 量符 合 PCR 扩增 的要 求，DNA 无降 解，溶 液的 紫外光 吸光度 OD260 与 OD280 的 比值 宜介 于 1.8 2.0。DNA 提 取可 选CTAB 法或 试 剂盒法。B.3 PCR扩增 SNP 反应 可以 在 96 等 不同规 格 孔 板进 行，体系 的总体 积可 相应 采 用 10 L 或 5 L，在板 上设 无模板对照。B.4 SNP 基 因分 型 将PCR 扩 增产 物用能 检测荧 光信 号的 检测 平台（如可以 检测FAM 和HEX 波 长荧光 的酶 标仪FLUOstar Omega 及实 时定 量PCR 仪）进行 读板，并 根据 荧光 量比值 进 行 SNP 分型。B.5 结果计 算与 表示 统计位 点差 异记 录的 结果，计算 差异 位点 数，核实 差异位 点的 引物 编号。检测结 果用 供检 样品 和标 准样品 比较 的位 点差 异数 表示，检测 结果 的容 许差 距不大 于 2 个位 点。对于在容 许差 距范 围内 且提 出有异 议的 样品，可 按 照GB/T 3543.5 的 规定 进行 田间小 区种 植鉴 定。_