ICS 65.020.01 B 05 DB41 河南省地方标准 DB41/T 1926 2019 高油酸花 生四级种 子质量标 准 2019-11-21 发布 2020-02-21 实施 河南省市场监督管理 局 发布 DB41/T 1926 2019 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规则 起 草。本标准 由河 南省 农业 农村 厅提出 并归 口。本标准 起草 单位：河 南省 农业科 学院 经济 作物 研究 所。本标准 主要 起草 人：郝西、臧秀 旺、刘娟、张 俊、郑峥、郭秀 璞、汤丰 收、高伟、徐静、张 忠信、孙子淇、苗 利娟、杜 红、张香萍、王 桂芳、崔 亚男、张曼。DB41/T 1926 2019 1 高 油酸花 生四级种 子 质量 标准 1 范围 本标准 规定 了高 油酸 花生 四级种 子质 量的 术语 和定 义、质 量要 求、检验 方法 与检验 规则。本标准 适用 于河 南省 高油 酸花生 四级 种子 质量 的评 价。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅 注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 3543.2 农作 物种 子 检验规 程 扦样 GB/T 3543.3 农作 物种 子 检验规 程 净度 分析 GB/T 3543.4 农作 物种 子 检验规 程 发芽 试验 GB/T 3543.5 农作 物种 子 检验规 程 真实 性和 品种 纯度鉴 定 GB/T 3543.6 农作 物种 子 检验规 程 水分 测定 GB 5009.168 食品 安全 国 家标准 食 品中 脂肪 酸的 测定 GB 20464 农作 物种 子标 签通则 NY/T 2237 植 物新 品种 特 异性、一致 性和 稳定 性测 试指南 花生 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 高油酸 花生 种子 脂 肪中 油酸 含量 75%的花生。3.2 种子纯 度 品种在 特征 特性 方面 典型 一致的 程度，用 本品 种的 种子数 占供 检本 作物 样品 种子数 的百 分率 表 示。3.3 种子净度 在一定 量的 种子 中，正常 种子的 重量 占总 重量（包 含正常 种子 之外 的杂 质）的百分 比。3.4 四级种 子 在种子 生产 中，以育 种家 种子为 种源，运 用重 复繁 殖技术 路线，按 世代 顺序 繁殖的 育种 家种 子、原原种、原种 和大 田用 种的 种子。3.5 育种家 种子 育种家 育成 的最 初种 子。具有该 品种 特异 性、一致 性和遗 传稳 定性。用 白色 标签作 标记。DB41/T 1926 2019 2 3.6 原原种 由育种 家种 子直 接繁 殖 的 种子。具有 该品 种特 异性、一致 性和 遗传 稳定 性。用白色 标签 作标 记。3.7 原种 由原原 种直 接繁 殖 的 种子。具有 该品 种特 异性、一 致性和 遗传 稳定 性。用紫 色标签 作标 记。3.8 大田用 种 由原种 繁殖 用于 大田 生产 的种子。具 有该 品种 特异 性、一 致性 和遗 传稳 定性。用蓝 色标 签作 标 记。4 质量要 求 高油酸 花生 种子 质量 指标 应符合 表 1 的要 求。表1 高油酸 花生 种子 质量 指标 项目 育种家种子 原原种 原种 大田用种 油酸/%75.0 75.0 75.0 75.0 纯度/%100 100 99.6 99.4 净度/%99.5 99.5 99.5 99.3 杂质/%0.5 0.5 0.5 0.7 其他作物种子/%0 0 0 0 杂草种子/（粒/kg）0 0 0 1 有毒(害)杂草种子/（粒/kg）0 0 0 0 发芽率/%80.0 80.0 80.0 80.0 水分/%10.0 10.0 10.0 10.0 5 检测方 法 5.1 真实性 和品 种纯 度 5.1.1 表型鉴 定 5.1.1.1 田间 鉴定 按品种 地上 部性 状的 典型 性和荚 果性 状的 典型 性进 行鉴定。鉴 定方 法按NY/T 2237 的 规定 执行。5.1.1.2 油酸 含量 测定 按GB 5009.168 的规 定执 行；油酸 含量 指标 应符 合该 品种本 质特 征。5.1.2 分子标 记 采用固定 数目的 单核苷 酸 多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）引物，通 过与标 准样品 比 较或 与SNP 指 纹数 据 比对 平 台比 对 的方 式，对 品种 真 实性 进 行验 证 或身 份鉴 定。检 测 方法 按 附录A执行。DB41/T 1926 2019 3 5.2 净度和 杂质 按GB/T 3543.3 的规 定执 行。5.3 发芽试 验 按GB/T 3543.4 的规 定执 行。5.4 水分 按GB/T 3543.6 的规 定执 行。5.5 其他作 物、杂草 种子 和有 毒（害）杂 草种 子数 目 按GB/T 3543.3 的规 定执 行。6 检验规 则 6.1 扦样 按GB/T 3543.2 的规 定执 行。6.2 质量判 定 按GB 20464 的规 定执 行。DB41/T 1926 2019 4 A A 附 录 A（规范 性附 录）花生品 种真 实性 分子 标记 鉴定方 法 A.1 引物合 成 利用已 遴选的14 个 核心SNP 引物和36 个 扩展SNP 引物 作为品 种真 实性 验证 和身 份鉴定 的检 测引 物，构建已 知品 种 的 SNP 指纹 数据比 对平 台。根据真 实性 验证 或身 份鉴 定的要 求，采用 序贯 式方 法，选 定 SNP 引 物。SNP 引 物采 用ULTRPAGE 的 方式进 行纯 化，将 Primer_Allele FAM（36 umol/L）、Primer_Allele HEX（36 umol/L）、Primer_Common（90 umol/L）三 种 引物 溶 解后 按体 积 比1:1:1 混匀 为KASP 引物 Mix。A.2 脱氧核 糖核 酸（Deoxyribonucleic Acid，DNA）提取 在种子 生产 基地 随机 取样，供检 样品 为叶 片或 种子，采用 混合 样品 检测（至 少含 有30 个个 体的材料），先单 独提 取DNA，再 取等 量 DNA 混合。DNA 提 取方 法应 保证 提取 的 DNA 数量 和质 量符 合 PCR 扩增 的要 求，DNA 无降 解，溶 液的 紫外光 吸光度 OD260 与OD280 的 比值 宜介 于1.8 2.0。DNA 提 取可 选CTAB 法或 试 剂盒法。A.3 PCR扩增 SNP 反应 可以 在 96 等 不同规格 孔 板进 行，体系 的总体 积可 相应 采 用 10 L 或 5 L，在 板上 设无模板对 照。A.4 SNP基 因分 型 将PCR 扩 增产 物用能 检测荧 光信 号的 检测 平台（如可以 检测FAM 和HEX 波 长荧光 的酶 标仪FLUOstar Omega 及实 时定 量PCR 仪）进行 读板，并 根据 荧光 量比值 进 行 SNP 分型。A.5 结果计 算与 表示 统计位 点差 异记 录的 结果，计算 差异 位点 数，核实 差异位 点的 引物 编号。检测结 果用 供检 样品 和标 准样品 比较 的位 点差 异数 表示，检测 结果 的容 许差 距不大 于2 个位 点。对于在容 许差 距范 围内 且提 出有异 议的 样品，可 以按 照 GB/T 3543.5 的规 定进 行田间 小区 种植 鉴定。_