ICS 65.080 G 20 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3756 2019 肥料中 10 种植物生 长调节剂 的高通量 快速筛选 液 相色谱-质 谱联用法 High-throughout screening of ten growth regulators in fertilizers by liquid chromatography-tandem mass spectometry 2019-12-05 发布 2020-01-05 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 3756 2019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范 性引 用文 件.1 3 原理.1 4 试剂 和材 料.1 5 仪器.2 6 分析 步骤.2 6.1 样 品制 备.2 6.2 提取.2 6.3 测定.2 6.4 空 白试 验.3 6.5 结 果表 述.4 6.6 允 许差.4 附 录 A（资 料性 附录）10 种植 物生 长调 节剂 信息一 览表.5 附 录 B（资 料性 附录）标 准物 质 的 质谱 分析 参 考参数.7 附 录 C（资 料性 附录）标 准物 质的 总离 子流 质 谱图和 提取 离子 质谱 图.8 DB37/T 3756 2019 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 市场 监督 管理局 提出 并组织 实 施。本标准 由山 东化 工标 准化 技术委 员会 归口。本标准 起草 单位：山东 省 产品质 量检 验研 究院、山 东省农 科院 农业 质量 标准 与检测 技术 研究 所、金正大生 态工 程集 团股 份有 限公司、中 国人 民解 放军 疾病预 防控 制中 心、山东 省科学 院生 物研 究所。本标准 主要 起草 人：朱海 荣、张 娟、陈子 雷、张灿、郭凯、刘 爽、于晓 菲、刘金凤、赵 丽芳、张 开亮、郑 树林、苏 本玉、孟 强、尹 畅。DB37/T 3756 2019 1 肥 料中 10 种 植物生 长调节 剂的高通 量快速 筛选 液 相色谱-质 谱联用法 警 告：本标 准有 可 能涉 及到 有 害 物质、危 险 操作 和设 备 的 安全。本 标 准并 未指 出 所 有可 能的 安 全问题。使用者有责任 采取 适当的安全和健康措 施，并保证符合国家有关 法规 规定的要求。1 范围 本标准 规定 了肥 料中10 种 植物生 长调 节剂 的高 通量 筛选液 相色 谱-质谱 联用 法。本标准 适用于 水溶 肥料、复混肥 料、掺 混肥 料、配 方肥料 中10种 植物 生长调 节剂复 硝酚 钠（2-硝基苯酚 钠、4-硝基 苯酚钠、5硝基 邻甲 氧基苯 酚钠）、萘乙 酸、脱 落酸、赤霉 酸、氯 吡脲、烯效 唑、多效唑、2,4-D的 检测。方法中 称样量 为1.0 g 时，复硝酚 钠、萘 乙酸、脱落 酸、赤 霉酸、2,4-D 的检 出 限为0.1 mg/kg。氯吡脲、烯效 唑、多效 唑的 检出限 为0.05 mg/kg。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其 最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和实 验方 法 3 原理 试样中 待测物 用甲 醇进行 超声提 取，在 选定 的工作 条件下，用液 相色 谱-串 联 质谱仪 进行测 定，外标法定 量。4 试剂和 材料 本标准 中试 验用 水应 符合GB/T 6682 中 一级 用水 的规 格。4.1 高纯氮。4.2 乙腈：色谱 纯。4.3 甲醇：色谱 纯。4.4 甲酸：色谱 纯。4.5 甲酸-水溶 液（1+1 0000）：移 取0.10 mL 甲 酸（4.4）与 1 000 mL 水 混匀。4.6 2-硝基 苯酚 钠标 准品：已 知质量 分数，98.0%。4.7 4-硝基 苯酚 钠标 准品：已 知质量 分数，98.0%。4.8 5-硝基 邻甲 氧基 苯酚 钠标 准品：已知 质量 分数，98.0%。4.9 萘乙酸 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.10 脱落酸 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。DB37/T 3756 2019 2 4.11 赤霉酸 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.12 氯吡脲 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.13 烯效唑 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.14 多效唑 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.15 2,4-D 标准 品：已 知质 量分 数，98.0%。10 种植 物 生长调 节剂 信息 一览 表见 附录 A 中表 A.1。4.16 标准储 备溶 液：称 取 0.01g（精 确到0.000 1 g）10 种植物 生长 调节 剂标 准品（4.6-4.15）于 10 mL 容 量瓶 中，用甲 醇定 容，得到 浓度 为1 000 mg/L 的标准 储备 液，现用 现配。4.17 标准中 间液：取 上述 标准 贮备液（4.16），用甲醇（4.3）稀 释成 浓度 为10 mg/L 的 标准 中 间 液。4.18 标准工 作液：用 甲醇 稀 释10 种 植物 生长 调节 剂的 标 准中间 液（4.17），配 成6 个不 同浓 度的 混合标准 溶液，其中 的各 植 物生长 调节 剂质 量浓 度分 别为 1 g/L、10 g/L、25 g/L、50 g/L、100 g/L、200 g/L。5 仪器 5.1 液相色 谱-串联 质谱 仪：配 有电喷 雾离 子源 和数 据处 理机。5.2 漩涡混 合器。5.3 高速离 心机：最 高转 速不 低于 6 000 r/min。5.4 分析天 平：精 度0.1 mg。5.5 金属试 验筛：0.5 mm。5.6 超声波 清洗 器。5.7 有机相 微孔 滤膜：0.22 m。6 分析步 骤 6.1 样品制 备 固体样 品：将样 品粉 碎，全部过0.5 mm试 验筛，待 用。液体样 品混 匀后 直接 称取。6.2 提取 称取0.1 g1.0 g 试样（精确至0.000 1 g）置于10 mL 离心 管中，加入8 mL甲 醇（4.3），涡旋 振荡1 min，超 声提取30 min，以6 000 r/min 高速离 心10 min，冷却 至室 温，定 容至10 mL，取1 mL 上清液过0.22 m有 机相 滤膜，待测。6.3 测定 6.3.1 液相色 谱及 质谱 操作 条件 6.3.1.1 液相色 谱操 作条 件：a)色谱柱：50 mm 2.1 mm(i.d.)不 锈钢 柱，内 装 C18、1.7 m 填 充物（或 具有 同等效 果的 色 谱柱）；b)柱箱温 度：40；c)流动相：流 动相 及梯 度洗 脱条件 见 表 1；d)流速：0.3 mL/min；e)进样量：10 L。DB37/T 3756 2019 3 表1 液相色 谱梯 度洗 脱条 件 时间/min 流动相 甲醇（4.3）/%流动相 甲酸溶液(4.5)/%0 10 90 3.0 10 90 5.0 60 40 8.0 75 25 9.0 10 90 12.0 10 90 6.3.1.2 质谱操 作条 件：a)电离方 式：电 喷雾 电离，氯吡脲、烯效 唑、多 效唑 采用正 离子 模式（ESI+），复硝酚 钠、萘 乙酸、脱 落酸、赤 霉酸、2,4-D 采 用负 离子 模式（ESI-）；b)检测方 式：多反 应监 测模 式（MRM）；c)离子源 温度：550；d)雾化气：氮 气，流 速 8 mL/min；e)气帘气：氮 气，流 速 25 mL/min；f)碰撞气：氮 气；流 速 50 mL/min；g)毛细管 电压：22 V；其它质 谱条 件见 附录B中表B.1。上述操 作参 数是 典型 的，可根据 不同 仪器 特点 对给 定的操 作参 数做 适当 调整，以期 获得 最佳 效 果。标准物 质的 总离 子流 质谱 图和提 取离 子质 谱图 见附 录C。6.3.2 标准曲 线的 绘制 分别移 取一系 列混 合标准 工作溶 液（4.18），按照 浓度由 低到高 的顺 序依据 仪器条 件（6.3.1）进行测定，以 色谱 峰峰 面积 为纵坐 标，对应 的标 准溶 液浓度 为横 坐标，绘 制标 准工作 曲线。6.3.3 试样测 定 6.3.3.1 定性 按6.3.1 的仪 器条 件对标 准 工作溶 液和样 品溶 液进行 测定，如果样 品溶 液中色 谱峰的 保留时 间与 标准物质 色谱 峰的 保留 时间 一致；而且 样品 溶液 中监 测 离子的 相对 丰度 比与 相当 浓度的 标准 溶液 的监 测 离子对的 相对 丰度 比的 偏差 不超过 表2 的规 定范 围，则 可判定 样品 中存 在相 应的 目标成 分。表2 定性测 定时 相对 离子 丰度 最大允 许偏 差 相对离子丰度/%50 20 50 1020 10 允许的相对偏差/%2 0 2 5 3 0 5 0 6.3.3.2 定量 取适量 待测 液（6.2），按 照仪器 条件（6.3.1）进行 测定，外标 法定 量。待 测 物含量 高的 试样 用甲醇稀释 后测 定。同时 进行 平行试 验。6.4 空白试 验 DB37/T 3756 2019 4 除不称 取试 样外，均 按上 述步骤 进行。6.5 结果表 述 试样中 待测 物的 含量Xi 以 质量分 数（%）表示，结 果 按式（1）计算：10010000000i mD V c cXi i.(1)式中：ci 由标 准曲 线查 得试 样溶液 中待 测物 的浓 度，单位为 微克 每升（g/L）；c0 由标 准曲 线查 得空 白溶液 中待 测物 的浓 度，单位为 微克 每升（g/L）；V 样品 的定 容体 积，单位为 升（L）；m 样品 质量，单 位为 克（g）；Di 样品 稀释 倍数。计算结 果保 留两 位有 效数 字，取 平行 测定 结果 的算 术平均 值作 为测 定结 果。注：复硝酚钠含量以5-硝基邻甲氧 基苯酚钠、4-硝基苯酚钠和2-硝基苯酚钠的含量总和计。6.6 允许 差 在重复 性条 件下 获得 的两 次平行 测定 结果 的绝 对差 值不应 超过 算术 平均 值的20%。DB37/T 3756 2019 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）10 种 植物 生长 调节 剂信 息 一览表 10 种植 物生 长调 节剂 信息 见表A.1。表A.1 10 种 植物 生长 调节 剂信 息 一览表 序号 化合物 英文名称 分子式 分子量 CAS 号 结构式/复硝酚钠 Sodium nitrophenolate/1 2-硝基苯酚钠 2-Nitrophenol Sodium Salt C6H4NNaO3 161.09 824-39-5 2 4-硝基苯酚钠 4-Nitrophenol Sodium Salt C6H4NNaO3 161.09 824-78-2 3 5-硝基邻甲氧基苯酚钠 5-Nitroguaiacol Sodium Salt C7H6NNaO4 191.12 77-06-5 4 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid C8H6Cl2O3 221.04 94-75-7 5 脱落酸 Abscisic acid C15H20O4 264.32 14375-45-2 6 萘乙酸 1-Naphthylacetic acid C12H10O2 186.21 86-87-3 7 氯吡脲 Forchlorfenuron C12H10ClN3O 247.70 68157-60-8 8 烯效唑 Uniconazole C15H18ClN3O 291.8 83657-22-1 DB37/T 3756 2019 6 表A.1 10 种植 物生 长调 节剂信 息一 览表（续）序号 化合物 英文名称 分子式 分子量 CAS 号 结构式 9 赤霉酸 Gibberellic acid C19H22O6 346.4 77-06-5 10 多效唑 Paclobutrazol C15H20ClN3O 293.79 76738-62-0 DB37/T 3756 2019 7 B B 附 录 B（资料 性附 录）标准物 质的 质 谱 分析 参考 参数 标准物 质的 质谱 分析 参考 参数见 表B.1。表B.1 标准物 质的 质谱 分析 参考 参数 目标物 母离子（M-H）(m/z)子离子（m/z）定量离子对（m/z）锥孔电压/V 碰撞能量/eV 2-硝基苯酚钠 138.15 92.18 138.15 108.12 30 15 108.12 30 25 4-硝基苯酚钠 138.15 92.17 138.15 108.12 30 15 108.12 30 25 5-硝邻甲氧基苯酚钠 168.15 123.10 168.15 152.97 25 25 152.97 25 15 萘乙酸 185.00 113.00 185.00 141.00 22 18 141.00 22 15 脱落酸 263.11 152.93 263.11 219.07 28 18 219.07 28 20 赤霉酸 345.03 143.06 345.03 239.09 22 26 239.06 22 20 氯吡脲 248.10 129.10 248.10 154.80 38 35 154.80 38 30 烯效唑 292.00 70.00 292.00 125.0 34 22 125.00 34 32 多效唑 294.00 70.00 294.00 125.0 28 18 125.00 28 34 2,4-D 219.00 124.90 219.00 160.80 25 28 160.80 25 22 DB37/T 3756 2019 8 C C 附 录 C（资料 性附 录）标准物 质的 总离 子流 质谱 图和提 取离 子质 谱图 标准物 质的 总离 子流 质谱 图见图C.1。200ng/mlTime2.00 4.00 6.00 8.00%01002.00 4.00 6.00 8.00%0100hunbiaoL9 2:MRM of 6 Channels ES+TIC1.02e74.293.934.57hunbiaoL9 1:MRM of 14 Channels ES-TIC1.29e53.593.164.03 图C.1 标准物 质的 总离 子流 质谱 图 DB37/T 3756 2019 9 标准物 质（赤霉 酸、脱落 酸、2,4-D、萘 乙酸）的 提 取离子 质谱 图见 图C.2。图C.2 标准物 质（赤霉 酸、脱落 酸、2,4-D、萘 乙酸）的 提 取离子 质谱 图 DB37/T 3756 2019 10 标准物 质（多效 唑、烯 效 唑、氯 吡脲、5-硝 基邻 甲 氧基苯 酚钠、2-硝基 苯酚 钠、4-硝基 苯酚 钠）的提取离 子质 谱图 见图C.3。图C.3 标准物 质（多效 唑、烯 效 唑、氯 吡脲、5-硝 基邻 甲 氧基苯 酚钠、2-硝基 苯酚 钠、4-硝基 苯酚 钠）的提取 离子 质谱图 _