ICS 65.080 G 20 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3760 2019 肥料中脱 落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯 效唑的测定 高 效液相色 谱法 Determination of abscisic acid,1-naphthaleneacetic acid,forchlorfenuron and uniconazole in fertilizers by high performance liquid chromatography 2019-12-05 发布 2020-01-05 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 3760 2019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范 性引 用文 件.1 3 原理.1 4 试剂 和材 料.1 5 仪器.1 6 分析 步骤.2 6.1 样 品制 备.2 6.2 样 品提 取.2 6.3 测定.2 6.4 空 白实 验.3 6.5 分 析结 果表 述.3 6.6 允 许差.3 附 录 A（资料 性附 录）脱 落酸、萘乙 酸、氯吡 脲、烯效 唑的 英文 名称、分子式、分子 量、CAS 号、结构式.4 附 录 B（资 料性 附录）脱 落酸、萘 乙酸、氯 吡 脲、烯 效唑 的标 准物 质液 相色谱 图.5 DB37/T 3760 2019 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 市场 监督 管理局 提出 并组 织实 施。本标准 由山 东化 工标 准化 技术委 员会 归口。本标准 起草 单位：山东 省 产品质 量检 验研 究院、金 正大生 态工 程集 团股 份有 限公司、中国 人民 解放军疾病 控制 中心、山 东农 业大学。本标准 主要 起草 人：刘 晖、张 娟、朱 海荣、张灿、商 姗姗、赵 丽芳、王景 超、郑树林、徐楠、尹畅、刘金凤、孙 文丹、刘 鹏飞、邹惠 玲、于军、苏 本玉、杨越 超。DB37/T 3760 2019 1 肥 料中脱 落酸、萘 乙酸、氯吡脲、烯效唑 的测定 高效液 相色谱法 警告：本 标准 有可 能涉 及 到有害 物质、危险 操作 和 设备的 安全。本标 准并 未 指出所 有可 能的 安全 问题。使 用者 有责 任采 取适 当的安 全和 健康 措施，并 保证符 合国 家有 关法 规规 定的要 求。1 范围 本标准 规定 了肥 料中 脱落 酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯 效唑的 高效 液相 色谱 法。本标准 适用 于水 溶肥 料、复混肥 料、掺混 肥料、配 方肥料 中脱 落酸、萘 乙酸、氯吡 脲、烯 效唑 的检测。称样量为1.0 g 时，方法 中 脱落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑的 检出 限为3 mg/kg。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和实 验方 法 3 原理 试样中 脱落 酸、萘乙 酸、氯吡脲、烯 效唑 用甲 醇进 行超声 提取，以 甲醇-0.1%甲酸 水为 流动 相，在选定的 工作 条件 下，用高 效液相 色谱 仪（配有 二极 管阵列 检测 器）测定，外 标法定 量。4 试剂和 材料 本标准 中试 验用 水 应 符合GB/T 6682 中 一级 用水 的规 格。4.1 甲醇：色谱 纯。4.2 甲酸：分析 纯。4.3 甲酸-水溶 液(1+1 000)：移取1.0 mL 甲 酸（4.2）与 1 000 mL 水 混匀。4.4 脱落酸 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.5 萘乙酸 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.6 氯吡脲 标准 品：已知 质量 分数，98.0%。4.7 烯效唑 标准 品：已知 质量 分数，98.0%；脱 落酸、萘乙 酸、氯吡 脲、烯效 唑信息 一览 表见 附录A。4.8 脱落酸、萘 乙酸、氯吡 脲、烯效 唑混 合标 准溶 液：称取脱 落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑标 准品，精确 至0.000 1 g，用甲 醇（4.1）配制 成浓 度为1 000 mg/L 的混 合标 准溶 液，现 用现 配。5 仪器 DB37/T 3760 2019 2 5.1 高效液 相色 谱仪：配 有二 极管阵 列检 测器 和色 谱数 据处理 机。5.2 微量注 射器：50 L。5.3 漩涡混 合器。5.4 高速离 心机：最 高转 速不 低于 6 000 r/min。5.5 分析天 平：精 度0.1 mg。5.6 超声波 清洗 器。5.7 金属试 验筛：0.5 mm。5.8 有机相 微孔 滤膜：0.22 m。6 分析步 骤 6.1 样品制 备 固体样 品：将样 品粉 碎，全部过0.5 mm试 验筛，待 用。液体样 品混 匀后 直接 称取。6.2 样品提 取 称取0.1 g 1.0 g 样品（精 确至0.000 1 g），置 于10 mL离心 管中，加 入8 mL 甲 醇，涡 旋振 荡1 min，超声提 取30 min，然 后以6 000 r/min 离心10 min，定 容至10 mL，取 上清 液1 mL过0.22 m 有机 相滤 膜，待测。6.3 测定 6.3.1 液相色 谱操 作条 件 推荐的 液相 色谱 条件 如下：a)色谱柱：250 mm 4.6 mm(i.d.)不锈 钢柱，内 装 C18、5.0 m 填 充物（或 具 有同等 效果 的色谱柱）；b)流动相：流 动相 及梯 度洗 脱条件 见 表 1；c)流速：1.0 mL/min；d)柱温：30；e)检测波 长：氯吡 脲、烯 效唑 和脱落 酸的 最佳 检测 波长 为 258 nm，萘乙 酸最 佳检 测 波长 为 280 nm；f)进样体 积：10 L。上述操 作参 数是 典型 的，可根据 不同 仪器 特点 对给 定的操 作参 数做 适当 调整，以期 获得 最佳 效 果。典型的 脱落 酸、萘乙 酸、氯吡脲、烯 效唑 标准 溶液 液相色 谱图 见附 录B 中图B.1。表1 流动相 及梯 度洗 脱条 件 时间/min 流动相 甲醇(4.1)/%流动相 甲酸溶液(4.3)/%0 30 70 7.0 45 55 13.0 55 45 18.0 80 20 DB37/T 3760 2019 3 表1 流动 相及 梯度 洗脱 条件（续）时间/min 流动相 甲醇(4.1)/%流动相 甲酸溶液(4.3)/%26.0 90 10 26.1 30 70 33.0 30 70 6.3.2 标准曲 线的 绘制 分别移 取脱 落酸、萘 乙酸、氯吡 脲、烯 效唑 混合 标 准溶液（4.8）0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL、1.00 mL 和2.00 mL 至10 mL 容 量瓶 中，甲醇（4.1）定容，配 制成 浓度 为10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L 的 混合 标准 工作 溶液。按照色 谱条 件（6.3.1）浓 度由低 到高 的顺 序进 行测定，以色 谱峰 峰面 积为 纵坐标，对 应的 浓度 为横 坐标，绘制 标准 工作 曲线。6.3.3 试样测 定 取适量 待测 溶液（6.2），按照色 谱条 件（6.3.1）进 行测定，外 标法 定量。待 测物含 量高 的试 样可取适量 试样 溶液 用甲 醇稀 释后进 行测 定。同时 进行 平行试 验。6.4 空白实 验 除不称 取试 样外，均 按上 述步骤 进行。6.5 分析结 果表 述 试样中 脱落 酸、萘乙 酸、氯吡脲 或烯 效唑 的含 量Xi 以质量 分数（%）表 示，结 果按式（1）计 算：1001000i 0i mD V c cXi.(1)式中：ci 由 标 准 曲 线 查 得 试 样 溶 液 中 脱 落 酸、萘 乙 酸、氯 吡 脲 或 烯 效 唑 的 浓 度，单 位 为 毫 克 每 升（mg/L）；c0 由 标 准 曲 线 查 得 空 白 溶 液 中 脱 落 酸、萘 乙 酸、氯 吡 脲 或 烯 效 唑 的 浓 度，单 位 为 毫 克 每 升（mg/L）；V 样品 的定 容体 积，单位为 升（L）；m 样品 质量，单 位为 克（g）；Di 样品 稀释 倍数。计算结 果保 留两 位有 效数 字，取 平行 测定 结果 的算 术平均 值作 为测 定结 果。6.6 允许差 在重复 性条 件下 获得 的两 次平行 测定 结果 的绝 对差 值不应 超过 算术 平均 值的10%。DB37/T 3760 2019 4 A A 附 录 A（资料 性附 录）脱落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑的 英文 名称、分 子式、分子 量、CAS 号、结构式 脱落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑的 英文 名称、分 子式、分子 量、CAS 号、结 构式见 表A.1。表A.1 脱落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑的 英文 名称、分 子式、分子 量、CAS 号、结构式 序号 中文名称 英文名称 分子式 分子量 CAS 号 结构式 1 脱落酸 Abscisic acid C15H20O4 264.32 14375-45-2 2 萘乙酸 1-Naphthylacetic acid C12H10O2 186.21 86-87-3 3 氯吡脲 Forchlorfenuron C12H10ClN3O 247.70 68157-60-8 4 烯效唑 Uniconazole C15H18ClN3O 291.8 83657-22-1 DB37/T 3760 2019 5 B B 附 录 B（资料 性附 录）脱落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑的 标准 物质 液相 色谱图 脱落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑的 标准 物质 液相 色谱图 见图B.1。图B.1 脱落酸、萘 乙酸、氯 吡脲、烯效 唑的 标准 物质 液相 色谱图（280 nm）_