ICS 65.020.20 B 21 DB33 浙江省地方标准 DB33/T 594 2017 DB33/594.1-2005,DB33/T 594.2-2005 草莓脱毒 种苗生产 技术规程 Technical regulation for virus-free plantlets of strawberry 2017-02-10 发布 2017-03-10 实施 浙 江 省 质 量 技 术 监 督 局 发布 DB33/T 594 2017 I 前 言 GB/T 1.1-2009 DB33/594.1-2005 1 DB33/T 594.2-2005 2 DB33/594.1-2005 DB33/T 594.2-2005 DB33/594.1-2005 3 2005 3 4 A 2005 6 B 2005 5.1 5.2 7、DB33/T 594 2017 1 草 莓脱毒 种苗生产 技术规 程 1 范围 Strawberry mottle virus SMoV Strawberry mild yellow edge virus SMYEV Strawberry vein banding virus SVBV Strawberry crinkle virus SCV 2 规范性 引用 文件 GB/T 191 GB/Z 26575 NY/T 401-2000 SN/T 2122 3 术语和 定义 3.1 草莓脱 毒苗 3.2 脱毒组 培瓶 苗 3.3 脱毒原 原种 苗 3.4 脱毒原 种苗 DB33/T 594 2017 2 3.5 脱毒生 产用 苗 3.6 脱毒率 4 生产技 术 4.1 脱毒组 培瓶 苗生 产技 术 4.1.1 外植体 选择 3 5 10:00 16:00 5 cm 6 cm 4.1.2 无菌苗 繁育 1 cm 2 cm 70%75%30 s,Tween-20 8 min 10 min 5 8 0.5 mm 1.0 mm 4.1.3 脱毒苗 培育 1.0 cm 1.5 cm 0.2 mm 0.3 mm 1.5 cm 2.0 cm 4.1.4 脱毒苗 快繁 20 d 30 d 6 4.1.5 培养条 件 25 2 30 molm-2s-1 60 molm-2s-1 18 2 12 h 14 h 4.2 脱毒原 原种 苗、脱毒 原种 苗和脱 毒生 产用 苗生 产技 术 4.2.1 脱毒 原原 种苗 生产 1 d 2 d 36 75%90%4.2.2 脱毒原 种苗 繁殖 DB33/T 594 2017 3 4.2.2.1 苗床准 备 667 m2 2 000 kg 15%:15%:15%20 kg 1.2 m 1.5 m(35 cm 25 cm)4.2.2.2 定植方 式 100 cm 150 cm 4.2.2.3 栽培管理 GB/Z 26575 4.2.3 脱毒 生产 用苗 繁殖 4.2.3.1 苗床准 备 667 m2 2 000 kg 15%:15%:15%20 kg 1.2 m 1.5 m(35 cm 25 cm)4.2.3.2 定植方 式 100 cm 150 cm 4.2.3.3 栽培管理 GB/Z 26575 5 分类与 分级 5.1 5.2 6 抽样与 检测 方法 6.1 抽样方 法 SN/T 2122 6.2 抽样比例 SN/T 2122 6.3 检测方 法 A DB33/T 594 2017 4 7 质量要 求 B 8 包装、标志、运 输与 贮存 8.1 包装 8.2 标志 C GB/T 191 8.3 运输 15 30 60%90%8.4 贮存 7 d 3 d DB33/T 594 2017 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）草莓脱 毒种 苗病 毒检 测方 法 A.1 双抗体 夹心 酶联 免疫 吸附 检测法(DAS-ELISA)NY/T 401-2000 A A.2 分子生 物学 聚合 酶链 检测 法(PCR)A.2.1 草莓斑 驳病 毒 RNA RNA cDNA PCR 5 TAAGCGACCACGACTGTGACAAAG 3 5 TCTTGGGCTTGGATCGTCACCTG 3 94 3 min 94 30 s 54 40 s 72 45 s 35 72 10 min 219 bp A.2.2 草莓轻 型黄 边病 毒 RNA RNA cDNA PCR 5 GTGTGCTCAATCCAGCCAG 3 5 CATGGCACTCATTGGAGCTGGG 3 94 3 min 94 30 s 54 40 s 72 45 s 35 72 10 min 271 bp A.2.3 草莓镶 脉病 毒 DNA DNA PCR 5 GAATGGGACAATGAAATGAG 3 5 GTGAGGAGAACTTAGGACA 3 94 3 min 94 30 s 54 40 s 72 45 s 35 72 10 min 574 bp A.2.4 草莓皱 缩病 毒 ssRNA RNA cDNA PCR 5 CATTGGTGGCAGACCCATCA 3 5 TTCAGGACCTATTTGATGACA 3 94 3 min 94 30 s 54 40 s 72 45 s 35 72 10 min 345 bp A.3 电镜检 测法 A.3.1 检测程 序 2%pH 6.8 DB33/T 594 2017 6 1 mm2 2 mm2 2.5%2%Epon 812 2%A.3.2 病毒颗 粒特 性 A.3.2.1 草莓斑 驳病 毒 Secoviridae 25 nm 30 nm A.3.2.2 草莓轻 型黄 边病 毒 Alphaflexiviridae X Potexvirus 13 nm 470 nm 580 nm A.3.2.3 草莓皱 缩病 毒 Rhabdoviridae Cytorhabdovirus 63 nm 75 nm 190 nm 380 nm A.3.2.4 草莓镶 脉病 毒 Caulimoviridae Caulimovirus 40 nm 50 nm DB33/T 594 2017 7 B B 附 录 B（资料 性附 录）脱毒组 培瓶 苗、脱毒 种苗 的质量 要求、检 测方 法、检测规 则 B.1 质量要 求 B.1.1 脱毒组 培瓶 苗质 量等 级指 标 B.1 表B.1 脱毒组 培瓶 苗 质 量等 级指 标 cm 6.0 4.0 mm 2.0 1.0 8 5 cm 1 1 4 2 B.1.2 脱毒种 苗质 量等 级指 标 B.2 表B.2 脱毒种 苗质 量等 级指 标 100 97 90 0.6 cm 0.8 cm B.2 检验方 法 1 mm B.3 检验规 则 B.3.1 组批规 则 B.3.2 检验分 类 DB33/T 594 2017 8 B.3.2.1 出厂（圃）检验 B.3.2.2 型式 检验 B.4 判定原 则 DB33/T 594 2017 9 C C 附 录 C（资料 性附 录）草莓脱 毒苗 出厂（圃）合 格证、草莓 脱毒 苗病 毒检 验报告 C.1 草莓脱 毒苗 出厂（圃）合 格证 C.1 表C.1 草莓脱 毒苗 出厂（圃）合 格证 C.2 草莓脱 毒苗 病毒 检测 报告 C.2 表C.2 草莓脱 毒苗 病毒 检验 报告 SMoV(SMYEV)SVBV SCV _