ICS 65.120 B 46 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3629 2019 饲料中氟 虫腈的测 定 液相色谱 串联质 谱法 2019-07-23 发布 2019-08-23 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 3629 2019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范 性引 用文 件.1 3 原理.1 4 试剂 或材 料.1 5 仪器 设备.2 6 样品.2 7 试验 步骤.2 7.1 提取.2 7.2 净化.2 7.3 标 准工 作曲 线的 制备.2 7.4 仪 器测 定.2 8 试验 数据 处理.4 9 精密 度.4 附 录 A（资 料性 附录）氟 虫腈 标准 溶液 图谱.5 DB37/T 3629 2019 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 这些 专利的 责任。本标准 由山 东省 畜牧 兽医 局提出 并监 督实 施。本标准 由山 东省 畜牧 业标 准化技 术委 员会 归口。本标准 负责 起草 单位：山 东省饲 料质 量检 验所，青 岛市华 测检 测技 术有 限公 司。本标准 主要 起草 人：张芸、刘涛、刘 雪芹、孙 延军、莫贞 峰、李斌、李 俊玲。DB37/T 3629 2019 1 饲 料中氟 虫腈的测 定 液 相色谱 串联质 谱法 1 范围 本标准 规定 了饲 料中 氟虫 腈的测 定方 法。本标准 适用 于配 合饲 料、浓缩饲 料、添加 剂预 混合 饲料和 植物 源饲 料原 料中 氟虫腈 的测 定。本标准 氟虫 腈的 检出 限为0.002 mg/kg，定 量限 为0.005 mg/kg。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 20195 动 物饲 料 试样的 制备 3 原理 样品用 乙腈 提取，经C18 固 相萃取 柱、液液 分配 净化 后，液 相色 谱串 联质 谱仪 测定，外标 法定 量。4 试剂或 材料 除非另 有规 定，仅使 用分 析纯试 剂。4.1 水：GB/T 6682，一 级。4.2 甲醇：色谱 纯。4.3 乙腈：色谱 纯。4.4 乙酸铵：色 谱纯。4.5 甲酸：色谱 纯。4.6 80%乙 腈水 溶液：将80 mL 乙腈 与20 mL 水混 合均 匀。4.7 80%甲 醇水 溶液：将80 mL 甲醇 与20 mL 水混 合均 匀。4.8 0.1%甲 酸水 溶液（含4 mmol/L 乙酸 铵）：称 取0.308 g 乙酸 铵于 适量 水中，准 确加入 甲 酸 1 mL，用水定 容 至1 000 mL。4.9 氟虫腈 标准 储备 液（1 mg/mL）：称取 氟虫 腈对 照品（CAS：120068-37-3，纯 度不低 于 98.7%）10 mg(准确 至0.01 mg)于10 mL 棕色 容量 瓶中，用 甲醇(4.2)溶解 定容。-18 避光 保存，有 效期 为 1年。4.10 氟虫腈 标准 工作 液(100 g/mL)：准确 移取 氟虫 腈 标准储 备液（4.8）1 mL 于 10 mL 棕色 容量瓶中，用甲 醇稀 释定 容。2 8 保存，有 效期 为1 个月。4.11 氟虫腈 标准 工作 液(1 g/mL)：准 确移 取氟 虫 腈 标 准工作 液（4.9）0.1 mL 于 10 mL 棕色 容量瓶中，用 甲醇 稀释 定容。2 8 保存，有 效期 为1 个 月。4.12 C18 固相萃 取柱：1 000 mg/6 mL，或性 能相 当者。DB37/T 3629 2019 2 4.13 微孔滤 膜：0.22 m，有 机系。5 仪器设 备 5.1 液相色 谱 串联 质谱 仪：配电喷 雾离 子源（ESI）。5.2 电子天 平：感 量0.000 1 g 和0.01 mg。5.3 旋涡混 合器。5.4 离心机：转 速不 低 于10 000 r/min。5.5 固相萃 取装 置。5.6 超声波 振荡 器。5.7 氮吹仪。6 样品 按GB/T 20195 制备 样品，至少200 g，粉碎 过0.42 mm 孔径的 分析 筛，充分 混匀，装入 磨口 瓶中 避光保存备 用。7 试验步 骤 7.1 提取 平行做 两份 试验。称2 g（准确至0.01 g）样品 于50 mL 离心 管，准确 加入25 mL 乙腈(4.3)，振 荡提取20 min，4 500 r/min 离心5 min，取 上层乙 腈2.5 mL 于15 mL 的 离心管，加 入0.5 mL 水，涡 旋混 匀待用。7.2 净化 C18 固相 萃取 柱分 别用6 mL 乙腈和6 mL 水活 化，接收 加载液，于50 mL 离心 管中，近自 然滴 干时，再加入12 mL 80%乙腈 水(4.6)，并 同时 接收 于上 述离 心管中，加 入约1.5 g NaCl 使上 述溶 液饱 和，振荡，4 500 r/min离心5 min，取 上层乙 腈层 浓缩 至干。准 确加入4 mL 80%甲 醇水(4.7)溶液 定容，过0.22 m滤膜，待 测。7.3 标准工 作曲 线的 制备 准 确 量 取 适 量 标准 工 作 液，用80%甲 醇 水溶 液(4.7)稀 释 成 浓 度 分 别为0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 g/L 的标 准溶 液，现用 现 配，供 液相 色谱-串 级质 谱 仪测定。对于基 质效 应较 大的 样品，采用 基质 空白 溶液 配制 标准溶 液进 行定 量。7.4 仪器测 定 7.4.1 液相色 谱参 考条 件 色谱柱：BEH C18 柱，长50 mm，内 径2.1 mm，粒 径1.7 m，或性 能相 当者。柱温：40。流速：0.3 mL/min。进样量：1 L。流动相：A 为甲 醇（4.2）；B为0.1%甲酸 水溶 液（4.8），梯度 洗脱 条件 见表1。DB37/T 3629 2019 3 表1 梯度洗 脱程 序表 时间，min 流速,mL/min A，%B，%1 initial 0.3 10 90 2 1.5 0.3 95 5 3 3.5 0.3 95 5 4 3.51 0.3 10 90 7.4.2 质谱参 考条 件 离子化 模式 及扫 描方 式：电喷雾 负离 子扫 描（ESI-）。检测方 式：多反 应检 测（MRM）。气帘气(Curtain GAS)35 Psi。碰撞气(Collision GAS)8 Psi。喷雾电 压(IonSpray Voltage)-2 500 V。雾化源 温度(Temperature)400。雾化气(Ion Source GAS1)55 Psi。辅助加 热气（Ion Source GAS2)55 Psi。定性离 子对、定 量离 子对 及电压、碰 撞能 量见 表2。表2 质谱参 数 名称 离子对（m/z）DP(V)CE（V）氟虫腈 定量离子 434.9 329.9-65-24 定性离子 434.9 249.9-65-36 7.4.3 定性测 定 在相同 试验条 件下，待测 物在样 品中的 保留 时间与 标准工 作液中 的保 留时间 相对偏 差在2.5%之内，并 且色 谱图 中定 性离 子 对的相 对丰 度与 浓度 接近 的标准 工作 液中 相应 定性 离子对 的相 对丰 度进 行 比较，若 相对 偏差 不超 过表3 规定的 范围，则 可判 断为 样品中 存在 对应 的待 测物。表3 定性确 证时 相对 离子 丰度 的最大 允许 误差 7.4.4 定量测 定 在仪器 最佳 工作 条件 下，将标准 工作 溶液（从 低浓 度到 高 浓度）和 试样 溶液 上机测 定，以标 准 工 作液中氟 虫腈 定量 离子 的峰 面积为 纵坐 标，氟 虫腈 浓 度为横 坐标 绘制 标准 工作 曲线，对 样品 进行 定量。试样溶液 中氟 虫腈 的响 应值 应在标 准工 作曲 线测 定的 线性范 围内。超出 线性 范 围的则 用80%的 甲醇 水 溶 液（4.7）适 当稀 释 后再 进样分 析。在 上 述色 谱-质 谱 条件 下，氟 虫 腈标 准 工作 液特 征 离子 的 多反 应 监测（MRM）色 谱图 参见 附录A。相对离子丰度（%）50 20 50 1020 1 0 允许的相对偏差（%）2 0 2 5 3 0 5 0 DB37/T 3629 2019 4 8 试验数 据处 理 试样中 氟虫 腈的 含量 以质 量分数 计，数 值以 毫克 每千克（mg/kg）表 示，多 点校准 按式(1)计算：.(1)式中：C 从标 准曲 线查 得的 试样溶 液中 氟虫 腈的 浓度，单位 为微 克每 升（g/L）；V 上机 液定 容体 积，单位为 毫升（mL）；V1 提取 液体 积，单位 为毫升（mL）；V2 分取 体积，单 位为 毫升（mL）；m 试样 的质 量，单位 为克（g）；n 上机 测定 的试 样溶 液超出 线性 范围 后，进一 步稀释 的倍 数。测定结 果用 平行 测定 的算 术平均 值表 示，结果 保留3 位有效 数字。9 精密度 在重复 性条 件下 两次 独立 测试结 果与 其算 术平 均值 的绝对 差值 不大 于该 算术 平均值 的10%。DB37/T 3629 2019 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）氟虫腈 标准 溶液 图谱 氟虫腈 标准 溶液 的MRM 色 谱 图见图A.1、图A.2。图A.1 氟虫腈 定量 离子 标准 色谱 图（浓 度 为1 ng/mL）图A.2 氟虫腈 定性 离子 标准 色谱 图（浓 度 为1 ng/mL）_