ICS 67.060 X 11 备案号：35810-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1680 2012 人参及其制品中醚菌酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of kresoxim-methyl residues in ginseng and its products LC-MS/MS method 2012-12-17发布 2013-01-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1680 2012 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、中国医科大学临床医药学院、通化出入境检验检疫局。本标准主要起草人：胡婷婷、李爱军、赵庆松、牛茜、王双、赵薇薇、史晓丽。DB22/T 1680 2012 1 人参及其制品中醚菌酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了野山参、红参、生晒参、白参、保鲜参、西洋参、人参精、人参茶、人参酒中醚菌酯的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于野山参、红参、生晒参、白参、保鲜参、西洋参、人参精、人参茶、人参酒中醚菌酯的测定。2 规范性引用文件 下 列文件对 于本 文件 的 应 用 是必不可少 的。凡是注日期 的 引 用 文件，仅所注日期 的 版 本适用于本 文 件。凡是不注日期 的 引 用 文件，其最新版 本（包括所有 的 修改 单）适用于本 文件。GB/T 6682 分析实 验 室 用 水 规 格 和 试 验方法。3 原理 试样 中 残留 的醚菌酯用 丙酮高速匀浆、离 心提 取，经 GPR固 相 萃取小柱净 化，液相色谱-质谱/质谱仪 测定，外 标法定 量。4 试剂与材料 除另有说明外，所 用 试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的 一级水。4.1 甲苯（C7H8）：色谱 纯。4.2 丙酮（C3H6O）：色谱 纯。4.3 乙腈（CH3CN）：色谱 纯。4.4 甲酸（CH2O2）：优级纯。4.5 乙腈-甲苯溶 液（3+1）：准 确量取 300 mL乙腈 和 100 mL甲苯，混匀后备 用。4.6 醚菌酯（Kresoxim-methyl，C18H19NO4，CAS号 143390-89-0）：纯度 98.0%。4.7 标准 储备溶 液：分别 准 确称取 醚菌酯标准 物 质 10 mg(精 确至 0.1 mg)，置 于 100.0 mL容量瓶 中，用 丙酮溶解，并定 容至刻度配制成浓度 100 g/mL 的标准 储备 液。该溶 液 储备 于 棕 色 容量瓶 中，在 0 4 条 件 下保 存 12 个月。4.8 标准 工作 溶 液：用 移 液 管 准 确 移 取 标准 贮 备溶 液，用 乙腈 稀释、定 容，配制 标准 工作 溶 液。密封贮存 于 4 冰箱 中，建议现 用 现 配。4.9 GPR固 相 萃取柱：1.5g/12 mL（CARB，PSA，C18）或 相 当者。4.10 有 机 相 微孔滤膜：0.22 mm。DB22/T 1680 2012 2 5 仪器与设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱 仪：API 4000色谱，质谱 联 用 仪，配有 电喷雾 离 子源（ESI）。5.2 氮吹 仪。5.3 涡漩 混匀 器。5.4 离 心 机：10 000 r/min。5.5 天平：感 量为 0.01 g和 0.0001 g。5.6 旋转蒸发 仪。5.7 超 纯水 机。5.8 匀浆 机。6 试样的制备 取有 代表性 样 品，粉碎，过 0.28 mm筛，混匀备 用。7 分析步骤 7.1 提取 称取 1.0 g样 品（精 确至 0.01g）于 50 mL离 心 管 中，加 入 20 mL丙酮，高速匀浆 1 min后,以 8000 r/min离 心 5 min，取 上清 液，再向 离 心 管 中 加 入 20 mL丙酮，重复 提 取一 次，合 并 上清 液于 35 下 旋转蒸发至 近干，加 入 5 mL乙腈-甲苯溶 液（4.6）溶解残 渣，待 净 化。7.2 净化 用 10 mL乙腈-甲苯溶 液（4.5）预淋洗 GPR固 相 萃取柱，弃去流 出液。将 7.1中的 待 净 化液 转移 至 GPR固 相 萃取柱 中，并用 20 mL乙腈-甲苯溶 液（4.6）进行洗脱，收集全部洗脱 液于 浓 缩 瓶 中，于 35 水 浴中 旋转 浓 缩 至 近干。残留物 用 1 mL乙腈 定 容，过 0.22 mm滤膜，供 LC-MS/MS测定。7.3 空白试验 除不称取试样外，均 按 7.1及 7.2进行。7.4 测定 7.4.1 色谱参考条件 色谱参 考条 件 如 下：a)色谱 柱：C18，2.1 mm 150 mm；b)流动 相 及流 速 见表 1；c)色谱 柱柱 温 度：40；d)进 样量：10 mL；e)流动 相 及流 速 见表 1。DB22/T 1680 2012 3 表 1 流动相及流速选择 7.4.2 质谱参考条件 质谱参 考条 件 如 下：a)电 离 方 式：电喷雾电 离（ESI）；b)扫描 方 式：正 离 子扫描，多反 应 监 测（MRM）；c)电 离 电 压：3 kV 5 kV；d)离 子源温 度：300-550；e)脱 溶剂 气：0.75 MPa；f)雾 化 气：1.5 MPa；g)辅助气：1.5 MPa；h)定 性 离 子 对、定 量离 子 对、去 簇 电 压、碰撞能 量 见表 2。表 2 醚菌酯监测离子对、去簇电压和碰撞能量 7.4.3 定性分析 在 同 一 色谱/质谱 条 件 下 进行 标准 溶 液和 样 品 溶 液的测定，如 果 样 品 溶 液中检出的色谱 峰 的保 留 时间与 标准 物 质色谱 峰 的保 留 时间 一 致，所 选择 的 两 对 子 离 子 的质 荷比也 一 致，而且 样 品 定 性 离 子 的相 对 丰 度 与 浓度 相 当 标准 工作 溶 液的定 性 离 子 的相 对 丰 度 相 比较，相 对 标准 偏差 不 超过表 3规定的 范围，则可 判 定 样 品 中 存 在该物 质。标准 溶 液的 多反 应 监 测色谱 图 参 见 附录 A。表 3 定性确定 时 相对离子 丰度 的 最大允许偏差 相 对离 子 丰 度 50%20%至 50%10%至 20%10%允许 的相 对 偏差 20%25%30%50%7.4.4 定量测定 步骤 总时间 min 流 速 mL/min 0.1%甲酸水%乙腈%1 0 250 50 50 2 8 250 10 90 3 12 250 10 90 4 12.1 250 50 50 5 18 250 50 50 化 合 物 名 称 母 离 子 m/z 子 离 子 m/z 去 簇 电 压 V 碰撞能 量 V 372*80 20 醚菌酯 404.3 344 80 36 注：加“*”的 为 定 量离 子。DB22/T 1680 2012 4 根据 试样 中 被 测 样 液中 被 测 组 分 的 含 量 情况，选 取 响 应 值 相 近 的标准 工作 液 进行 分析，对 于 高浓度 样 品 须 适 当进行 系 列 稀释。标准 工作 液和 样 液中 被 测 组 分 的 响 应 值 均应在仪 器 线 性 响 应 范围内。在 上 述色谱 条 件 下，醚菌酯参 考 保 留 时间 为 9.28 min，外 标法定 量。8 结果计算 和表 述 用色谱 数据处理 机或 按 公 式（1）计算 试样 中醚菌酯 残留 含 量，计算结果需扣 除 空 白 值。mV cX=.(1)式 中：X 试样 中 被 测 组 分残留量，单位 为 毫克每千克（mg/kg）；c 从 标准 曲线读 出的 被 测 组 分溶 液 浓度，单位 为 微 克每毫升（mg/mL）；V 样 液 最 终 定 容 体积，单位 为 毫升（mL）；m 样 液 所 代表 的 最 终 试样 的质 量，单位 为 克（g）；计算结果 保 留 三 位 有 效数字。9 定量 限、回收率 9.1 定量 限 本方法定 量 限 为 0.01 mg/kg。9.2 回收率 样 品 中醚菌酯的 添 加 浓度 及 其 回 收 参 见 附录 B。10 精密度 10.1 重复 性 在 重复性条 件 下，获得 的 两 次 独立 测 试 结果 的 绝 对 差值 不 大于 这两 个 测定 结果 的 算 术 平 均 值 的 15%。10.2 再现 性 在 再现性条 件 下，获得 的 两 次 独立 测 试 结果 的 绝 对 差值 不 大于 这两 个 测定 结果 的 算 术 平 均 值 的 20%。DB22/T 1680 2012 5 A A 附 录 A（资 料性 附录）醚菌酯标准品液相色谱-质谱/质谱 图 图 A.1 醚菌酯标准品液相色谱-质谱/质谱 图（0.01mg/kg）DB22/T 1680 2012 6 B B 附 录 B（资 料性 附录）不同添加水平平均回收率 及相对标准 偏差 表 B.1 醚菌酯 添加回收率 和 精密度（n=10）样 品 添 加 水 平 mg/kg 回 收 率范围%对 标准 偏差%0.01 84 99 5.64 0.02 81 98 7.22 野山参 0.20 81 97 7.05 0.01 86 97 3.50 0.02 91 98 5.55 红参 0.20 81 98 7.32 0.01 83 99 6.13 0.02 81 99 7.25 生晒参 0.20 81 99 7.95 0.01 79 100 6.73 0.02 80 95 7.86 白参 0.20 77 98 12.66 0.01 89 99 5.01 0.02 81 99 6.80 保鲜参 0.20 81 98 7.75 0.01 83 100 6.65 0.02 80 99 7.18 西洋参 0.20 85 99 5.87 0.01 82 96 5.52 0.02 82 95 5.61 人参精 0.20 83 99 5.23 0.01 82 99 6.52 0.02 82 98 5.83 人参茶 0.20 83 98 6.36 0.01 81 100 8.08 0.02 83 99 5.16 人参酒 0.20 80 93 5.52 _