ICS 65.120 B 46 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1985 2013 饲料中无机砷的测定 液相色谱-原子荧光 光谱法 Determination of inorganic arsenic in the feed liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry 2013-12-18发布 2013-12-31实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1985 2013 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。本标准起草人：韩冰雪、吴桐、赵立群、戴欣、王宇、张爽、王岩、王潇、任明月 DB22/T 1985 2013 1 饲料中无机砷的测定 液相色谱-原子荧光光谱（LC-AFS）法 1 范围 本标准规定了食品中无机砷含量测定的液相色谱-原子荧光光谱法。本标准适用于家禽、猪配合饲料，家禽、猪浓缩饲料，家禽、猪添加剂预混合饲料以及饲料原料 鱼 粉，肉粉，肉骨粉 中无机砷含量的测定。本 方 法检出 限为：无机砷 0.02 mg/kg。2 规范性引用文件 本标准中 引 用的 文件对 于本标准的 应 用 是必不可少 的。凡是注日期 的 引 用 文件，仅所注日期 的 版 本 适用于本 文件。凡是不注日期 的 引 用 文件，其最新版 本（包括所有 的 修改 单）适用于本标准。GB/T 6682 分析实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 3 原理 饲料中无机砷 经硝酸 提 取后，以液相色谱 进行分离，分离后 的 目 标 化 合 物在酸性环境下与还 原剂 反 应，生成气态 砷 化 合 物，以原子荧光光谱 仪进行 测定。按 保留时间 定 性，外 标法定量。4 试剂与材料 除非另有 规定，本 方 法 所使 用 试 剂 均为优级纯，水为 GB/T 6682规定的 一级水。4.1 磷酸二氢铵（NH4H2PO4,CAS号：7722-76-1）。4.2 硼氢化钾（KBH4,CAS号：13762-51-1）。4.3 氢氧化钾（KOH,CAS号：1310-58-3）。4.4 硝酸（HNO3,CAS号：7697-37-2）。4.5 盐酸（HCl,CAS号：7647-01-0）。4.6 氨水（NH3 H2O,CAS号：1336-21-6）。4.7 正己烷（CH3(CH2)4CH3,CAS号：92112-69-1）。4.8 磷酸二氢铵溶 液（20 mmol/L）：称取 2.3 g磷酸二氢铵，溶 于 1000 mL水 中，以浓 氨水调整 pH值至 8.0，经 0.45 m水 系滤膜过滤 后，于 超声 水 浴 中 超声脱 气 30 min，备 用。4.9 盐酸溶 液（20%(v/v)）：量 取 200 mL浓 盐酸，溶 于 水 并 稀释至 1000 ml。4.10 硝酸溶 液（0.15 mol/L）：量 取 10 mL浓 硝酸，溶 于 水 并 稀释至 1000 ml。4.11 氢氧化钾溶 液（100 g/L）：称取 10 g 氢氧化钾，溶 于 水 并 稀释至 100 ml。4.12 氢氧化钾溶 液（2 g/L）：称取 2 g 氢氧化钾，溶 于 水 并 稀释至 1000 ml。4.13 硼氢化钾溶 液（30 g/L）：称取 30 g硼氢化钾，用 2 g/L氢氧化钾溶 液 溶 解 并定 容至 1000 ml。当 日 配 制 使 用。DB22/T 1985 2013 2 4.14 磷酸二氢铵溶 液（1 mmol/L）：量 取 20 mmol/L磷酸二氢铵溶 液 50 mL，纯水 稀释至 1000 mL，以浓 氨水调 pH值至 9.0，经 0.45 m水 系滤膜过滤 后，于 超声 水 浴 中 超声脱 气 30 min，备 用。4.15 购买 有 证 的 AsIII、AsV标准 溶 液。5 仪器 5.1 液相色谱-原子荧光光谱 联 用 仪（LC-AFS）：由液相色谱 仪与 原子荧光光谱 仪 组 成。5.2 天平：感 量 为 1 mg及 0.1 mg。5.3 组织匀浆器。5.4 高速 粉 碎 机。5.5 冷冻干燥 机。5.6 离 心 机：转速 8000 r/min。5.7 pH计：精度 为 0.01。5.8 C4净 化 小柱或等效柱。注：玻璃器皿 使 用 前 经（1+4）硝酸 浸泡 24 h后，清洗、晾干 后 备 用。6 分析步骤 6.1 试样制备 饲料 样 品 经 高速 粉 碎 机 粉 碎，过 100目 筛。6.2 提取 称取 1 g（准 确至 0.01g）试 样，置 于 10 mL聚丙烯 离 心管 中，加 入 10 mL 0.15 mol/L HNO3溶 液，密 闭。于 90恒温箱 中 热浸 提 2.5 h，每半小 时 振摇 1 min。提 取 完毕，取 出 冷却至 室 温，8000 r/min离 心15 min。取 5 mL上清 液 置 于 离 心管 中，加 入 5 mL正己烷，振摇 1 min后，8000 r/min离 心 15 min，弃去上层 液 体。按 此过程重复 一 次。吸 取下 层清 液，经 0.45 mm有 机 滤膜过滤 及 C4小柱净 化后进 样。注 意：C4小柱 使 用 前需 进行 活 化。其 活 化 参考过程 为：新 柱 使 用 前 依 次 用 10 mL甲醇、15 mL水 通 过，静 置活 化 30 min后可 用。每净 化 完 一 个 样 品 需 依 次 以 10 mL甲醇、15 mL水 通 过，完 成后可 立 即 对下一 个样 品 进行 净 化。净 化 样 品 时，所 通 过 C4小柱 的液 体 应 弃去前 3 mL，收集之 后 流 出的液 体 进 样 测定。该 小柱 可 重复 使 用 若 干次。6.3 推荐仪器参考条件 6.3.1 液相色谱参考条件 色谱 柱：阴 离 子 交换 色谱 柱，阴 离 子 交换 色谱 保 护 柱。流动 相 组 成：A：1 mmol/L 磷酸二氢铵溶 液（pH 9.0）；B：20 mmol/L 磷酸二氢铵溶 液（pH 8.0）。流动 相 洗脱 方 式：梯 度洗脱（梯 度洗脱程 序见表 3）。流动 相 流 速：1.0 mL/min；进 样体 积：100 L。表 1 流动相梯度洗脱程序 时间 0 8 10 20 22 23 流动 相 A 100%100%0%0%100%100%流动 相 B 0%0%100%100%0%0%DB22/T 1985 2013 3 6.3.2 原子荧光检测参考条件 负 高 压：280 V；灯电流：30 mA；原子 化 温度：200；炉 高：8 mm；载 气：氩 气；载 气 流 速：300 mL/min；屏蔽 气 流 速：400 mL/min；测量 方 式：标准 曲线 法；读数 方 式：峰面积；载 液：20%（v/v）HCl；流 速 4 mL/min；还 原剂：30 g/L硼氢化钾溶 液，流 速 4 mL/min。6.4 标准曲线制作 配 制 标准 系 列 溶 液的浓 度 分 别 为 0.0 g/L、5 g/L、10 g/L、20 g/L、50 g/L和 100 g/L。吸 取 标准 系 列 溶 液 100 L注 入 液相色谱-原子荧光光谱 联 用 仪进行分析，得到 色谱 图，确 定 个 组 分保留时间。以标准 系 列 溶 液中 目 标 化 合 物 的浓 度 为 横坐 标，色谱 峰面积 为 纵坐 标，绘 制 标准 曲线。6.5 试样溶液的测定 吸 取试 样 溶 液 100 L注 入 液相色谱-原子荧光光谱 联 用 仪 中，得到 色谱 图，以 保留时间 定 性。根据 标准 曲线得到 试 样 溶 液中 AsIII与 AsV含量，AsIII与 AsV含量的加和 为 总 无机砷含量，平 行 测定 次 数 不少 于两 次。7 分析结果的表述 试 样 中无机砷的含量按 公式（1）计 算：1000)(0-=mV C CX（1）式 中：X 样 品中无机砷的含量，mg/kg；C0 经 标准 曲线得到 的 空白 溶 液中无机砷 化 合 物 浓 度，g/L；C 经 标准 曲线得到 的测定 溶 液中无机砷 化 合 物 浓 度，g/L；V 提 取 液 体 积，mL；m 试 样 称 样 量，g；X无机砷=XAsIII+XAsV。以 重复 性 条 件下 获得 的 两 次 独 立测定 结果 的 算 术 平 均 值 表示，结果 保留 三 位 有 效 数字。8 精密度 在 重复 性 条 件下 获得 的 两 次 独 立测定 结果 的 绝 对 差 值 不 得 超过 算 术 平 均 值 的 15%。A DB22/T 1985 2013 4 附 录 A（资料性附录）无机砷参考色谱图 A.1 无机砷参考色谱图见图 A.1 图 A.1 无机砷参考色谱图 _