ICS 65.040 C 53 备案号：37945-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1826 2013 饲料中非诺特罗的测定 气相色谱-质谱法 Determination of Fenoterol in feed-GCMS 2013-05-15发布 2013-09-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1826 2013 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。本标准主要起草人：李宁、邴炜、华蕾、刘斌、石金娥等。DB22/T 1826 2013 1 饲料中非诺特罗的测定 气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了预混料、配合料和浓缩料中非诺特罗含量的气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于预混料、配合料和浓缩料中非诺特罗的测定。本方法中非诺特罗的检出限为 2.0 g/kg，定量限为 10.0 g/kg。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的 引 用文件，仅所 注日期的 版 本适用于本文 件。凡是不注日期的 引 用文件，其最新版 本（包括所有 的 修改 单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实 验 室 用 水 规 格 和 试 验方法。3 原理 样 品用 乙酸钠缓冲溶液 提 取后,依次经液-液萃取、阳离子交换柱净化，再经双(三甲基硅烷基)三 氟乙酰胺-三甲基氯硅烷(BSTFA-TMCS)衍生，气相色谱-质谱检测，内 标法定量。4 试剂与材料 除另有 规定 外，所有试剂均 为 分析纯，实 验用 水 为 超纯水。4.1 甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1）：色谱 纯。4.2 乙酸乙酯（C2H5OH，CAS：141-78-6）：色谱 纯。4.3 异丙醇（C4H9OH，CAS：67-63-0）：色谱 纯。4.4 盐酸（HCL，CAS：7647-01-0）：优级纯。4.5 氨水（NH3OH，CAS：1336-21-6）。4.6 无水氯化钠（NaCL，CAS：7647-14-5）。4.7 乙酸钠（C2H5Na，CAS：127-09-3）：优级纯。4.8 冰乙酸（CH3COOH，CAS：64-19-7）：优级纯。4.9 甲苯（C6H5CH3，CAS：108-88-3）：优级纯。4.10 氦 气，纯度 99.999%以上。4.11 衍生试剂：双（三甲基硅烷基）氟乙酰胺（BSTFA）-三甲基氯硅烷（TMCS）=99：1，-20 以 下 冷冻保存。4.12 2 mol/L盐酸溶液：取盐酸（4.4）18 mL，用 水 定 容至 100 mL，摇匀。4.13 30 mmol/L盐酸：用 水稀释 适量 盐酸（4.4）并定 容。4.14 0.2 mol/L乙酸钠缓冲溶液：按 实际使 用量 称取 适量 乙酸钠（4.7）溶 于 水 中 后 定 容。4.15 乙酸乙酯-异丙醇溶液：乙酸乙酯（4.2）：异丙醇（4.3）=5：1。4.16 5%氨化甲醇：准 确 量 取 5 mL氨水（4.5），用 甲醇（4.1）定 容至 100 mL。DB22/T 1826 2013 2 4.17 非诺特罗标准 储备液：准 确称取 50 mg非诺特罗标准 物 质于 50 mL棕 色 容 量 瓶，用 甲醇（4.1）溶 解 并定 容，该 溶液 浓 度 为 1 g/L。置 于 4 冰 箱 中 保存，有 效 期 6个月。4.18 非诺特罗标准 使 用 液：将 标准 储备液 用 甲醇（4.1）配 制成 0.5 mg/L的非诺特罗标准 使 用 液，现 用 现 配。4.19 克伦 特罗 内 标标准 储备液：准 确称取 50 mg克伦 特罗标准 物 质于 50 mL棕 色 容 量 瓶，用 甲醇（4.1）溶 解 并定 容，该 溶液 浓 度 为 1 g/L。置 于 4 冰 箱 中 保存，有 效 期 6个月。4.20 克伦 特罗 内 标标准 使 用 液：将 标准 储备液 用 甲醇（4.1）配 制成 2.0 mg/L的标准 使 用 液，现 用 现 配。5 仪器和设备 5.1 单 四极杆 气相色谱-质谱 联 用 仪，配 EI源。5.2 具塞聚四 氟乙 烯 离 心管：50 mL。5.3 涡旋 混合 器。5.4 恒温箱，控温精 度 2。5.5 离 心机。5.6 电 子 天平，感 量 0.0001 g。5.7 氮吹仪。5.8 超 声波清洗仪。5.9 250 mL鸡心瓶。5.10 SCX小 柱：Sep Pak小 柱，500 mg，3 mL。6 采样 选 取有 代表性饲 料 样 品 至 少 500 g，四 分 法缩 减到 100 g，粉碎，全部通过 0.42 mm试 验 筛，混 匀，装入密闭 容 器 中，避光 保存，备 用。7 分析步骤 7.1 提取 称取 5 g（精 确至 0.01g）混 匀样 品于 50 mL具塞聚四 氟乙 烯 离 心管 中，加入 乙酸钠缓冲溶液（4.14）20 mL，用 2 mol/L盐酸（4.4）调节 pH值 至 5.2，添加 50 L 2.0 mg/L克伦 特罗 内 标，涡旋 3 min，超 声30 min，于 离 心机 5000 r/min离 心 5 min。上 清 液 移入 另 一 50 mL具塞聚四 氟乙 烯 离 心管 中，在残留 样 中 分 2次 加入 10 mL乙酸钠缓冲溶液（4.14），重复 以上 提 取 过程，合并 上 清 液 于 同一 50 mL具塞聚四 氟乙烯 离 心管 中，加入 5 g氯化钠（4.6）和 15 mL乙酸乙酯（4.2）溶液，涡旋 5 min，5000 r/min离 心 10 min，分 层 后 将 上 层 有 机 溶剂 层移入 250 mL鸡心瓶 中，在 下 层 水 相中 分 2次 加入 10 mL乙酸乙酯-异丙醇（4.15），涡旋振荡 3 min，5000 r/min离 心 5 min，分 层 后 将 上 层 有 机 溶剂 合并于 上 述 250 mL鸡心瓶 中，45 旋转蒸干，用 3 mL乙酸钠缓冲溶液（4.14）溶 解残渣，备 用。7.2 净化 SCX阳离子交换柱依次 用 甲醇（4.1）、超纯水、30 mmol/L的 盐酸（4.13）各 3 mL活 化。将 乙酸钠 提 取液（7.1）移入固 相 萃取柱 中，用 1 mL乙酸钠缓冲溶液（4.14）淋冼鸡心瓶，洗 液 过 柱，弃去流 出DB22/T 1826 2013 3 液，依次 用 6 mL超纯水、6 mL甲醇（4.1）淋洗小 柱，弃去流 出 液，最后 用 6 mL氨化甲醇（4.16）洗 脱小 柱，收集 洗 脱 液 于 10 mL衍生 管 中。7.3 衍生 在 50 下用氮吹仪吹干洗脱液（7.2），迅速加入 100 L BSTFA-TMCS（4.11）衍生试剂，盖紧螺盖，涡旋 1 min，于 70 2 恒温箱 中衍生 40 min，取出后冷却至室温，50 下用氮吹仪吹干，以甲苯（4.9）定 容 至 0.5 mL，进行 气相色谱-质谱 测定。同时 用 非诺特罗标准 使 用 液 做系 列 同 步 衍生。7.4 测定 7.4.1 仪器 条 件 色谱 柱：用于气相色谱-质谱 仪 的 5%聚 硅 氧 烷 毛细 柱（30 m 0.25 mm 0.25 m）或 性 能 相 当者；载 气：氦 气（4.10）；流速：1.0 mL/min，恒 流模式；进 样 口 温 度：230；进 样 量：2 L，不 分 流；升 温程 序：80（保 持 1min），以 30/min升 至 200（保 持 5 min），再以 15/min升 至 280（保 持 5 min）；离子 源（EI）温 度：230；离子 源（EI）电 子 轰击能 量：70 eV；接 口 温 度：280；溶剂 延迟：10 min；四极杆温 度：170；质量 扫描范围：50 400 u；选 择 离子 监测方 式（SIM）；监测 离子（m/z）：克伦 特罗 86*、212、258；非诺特罗 73*、236、356；其 中 带*离子 为定量 离子。7.4.2 气相色谱-质谱测定 7.4.2.1 定性测定 在 相 同 试 验 条 件下，试样 中 待 测 物 与 同 时 检测的标准 物 质的 保 留 时间之差 在 2s之 内，并 且 所 选 择的 离子 相对 丰 度 比符 合 表 1要 求，可 判 定为 试样 中 存 在该 药 物残留。表 1 试样 离子丰度比 与标准 物 质 离子丰度比 的 允许偏差 范围 占 基 峰 相对 丰 度（）最 大允许偏差（）50 10 20 50 15 10 20 20 10 50 7.4.2.2 定量测定 以 峰面积 按 内 标法 进行 单 点或多点校 准定量，标准 工作 液 和 试样液 中非诺特罗 响 应 值 均 应 在仪器 检 测 线 性 范围 内。标准 物 质 总 离子 流图参见附录 A；标准 物 质质谱 图参见附录 B。DB22/T 1826 2013 4 8 结果计算 试样 中非诺特罗的含量按 式（1）计算：10001000=mV AX.(1)式 中：X 试样 中非诺特罗的含量，单位 毫 克 每千 克（mg/kg）；A 经 计算得 试液 中非诺特罗的含量，单位 毫 克 每升（mg/L）；V 样 品 最 终 定 容 体积，单位 毫升（mL）；m 样 品 取样 质量，单位 克（g）；1000 单位 换 算系数。计算结果 保 留小 数点 后 两 位 有 效 数字。9 重复 性 在重复性 条 件下 获得 的 两 次 独立 测定 结果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 30%。DB22/T 1826 2013 5 A A 附 录 A（资 料性 附录）样 品 中非诺特罗标准 物 质 总离子流图 1 克伦 特罗 2 非诺特罗 图 A.1 样 品 中非诺特罗标准 物 质 总离子流图 DB22/T 1826 2013 6 B B 附 录 B（资 料性 附录）样 品 中非诺特罗衍生 物 的质谱 图 图 B.1 样 品 中非诺特罗衍生 物 的质谱 图 _