ICS 65.020.20 B 47 DB51 四川省地方标准 DB51/T 13672011 桑蚕中肠型脓病诊断技术规程 2011-12-28发布 2012-03-01实施四川省质量技术监督局 发布 DB51/T 13672011 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 名词和术语.1 4 试剂.1 5 仪器、设备.1 6 诊断.1 DB51/T 13672011 II 前 言 本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局发布。本标准起草单位：四川省蚕业管理总站、乐山市蚕种质量检疫检验站、内江市蚕种质量监督检验站。本标准主要起草人：吴钢、张学清、马露芸、颜建平、何东。DB51/T 13672011 1 标准名称 1 范围 本标准规定了桑蚕中肠型脓病诊断的技术要求。本标准适用于四川省桑蚕中肠型脓病诊断。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 DB51/T 1207 桑蚕血液型脓病诊断技术规程 3 名词和术语 下列术语和定义适用于本文件。3.1 桑蚕中肠型脓病(质型多角体病)midgut polyhedrosis 桑蚕中肠型脓病是质型多角体病毒寄生桑蚕中肠圆筒状细胞，并在细胞质内形成多角体的蚕病，又称质型多角体病。4 试剂 4.1 盐酸溶液c(HCl)=1mol/L。4.2 分析用水按 GB/T 6682 规定执行。5 仪器、设备 普通光学显微镜；相差显微镜；冰箱；载玻片；盖玻片；乳钵；乳棒；解剖剪；镊子；吸管；量筒；烧杯；样品袋；冻存管（1.8 mL、5 mL）。6 诊断 6.1 肉眼诊断 6.1.1 外观观察 肉眼观察蚕在幼虫阶段是否具有下列症状。a)群体症状：群体发育显著不齐。DB51/T 13672011 2 b)个体症状：病蚕体躯瘦小，食桑与行动不活泼，常呆伏于蚕座周边或蚕沙中；大蚕病蚕体色灰白，胸部半透明；缩小、吐液及下痢；严重时排便伴乳白色粘液。6.1.2 解剖观察 用手挤压具有上述病症的病蚕尾部，观察是否有乳白色粘液排出；用解剖剪从背中线剪开，观察中肠后部是否有乳白色皱褶。6.1.3 初步诊断 幼虫阶段的蚕出现6.1.1表述的症状，挤压病蚕尾部有乳白色粘液排出，解剖观察中肠后部有乳白色皱褶，初步诊断为中肠型脓病。6.2 显微镜诊断 6.2.1 样品采集 采集6.1.1表述的个体症状病蚕，置于样品袋或冻存管中。6.2.2 样品处置 6.2.2.1 样品保存 样品随机分成2份，一份作检样，另一份作备样。样品置于0 4 冰箱中，保存期30 d60 d。6.2.2.2 样品制备 挤压病蚕胸部与尾部，挤出排泄液和肠液，涂抹于载玻片上，制成肠液玻片样本。剪取病蚕中肠后部小块组织，置于载玻片上，滴入1滴3滴蒸馏水，轻压，制成中肠组织玻片样本。6.2.3 显微镜检查 6.2.3.1 直接检查法 将6.2.2.2镜检标本置于显微镜（1540倍或1640倍）下观察有无多角体，每个样本观察不少于20个视野。6.2.3.2 多角体与类似颗粒鉴别 用盐酸溶解法。取病蚕中肠组织，用蒸馏水清洗后置于乳钵中磨碎，将磨碎液涂抹于载玻片上，阴干，用吸管滴1滴3滴盐酸溶液c(HCl)=1 mol/L；室温下放置3 min5 min，用蒸馏水清洗去酸液，镜检（1540倍或1640倍）。类似颗粒溶解消失，多角体存在。6.2.3.3 核型多角体和质型多角体鉴别 用焦宁甲基绿染色法。参见DB/T 1207 桑蚕血液型脓病诊断技术规程6.2.3.3。6.2.4 判定 镜检发现有多角体存在，呈六角形、不规则四角形及三角形，大小不整齐，样品可诊断为桑蚕中肠型脓病。磨碎液样本用盐酸溶解，类似颗粒消失、多角体存在，且用焦宁甲基绿染色，多角体呈红色，样品确诊为桑蚕中肠型脓病。_ DB51/T 13672011