ICS 65.020.01 B 05 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 14692011 杨树耐盐性鉴定技术规程 Rules for identifying salt tolerance of poplar 2011-11-15发布 2011-11-30实施河北省质量技术监督局 发布 DB13/T 14692011 I 前 言 本标准依据GB/T 1.12009的规定编写。本标准由沧州市质量技术监督局提出。本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心、沧州市农林科学院。本标准主要起草人：杨迎霞、刘仲齐、黄素芳。DB13/T 14692011 1 杨树耐盐性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了利用叶表皮细胞进行杨树耐盐性鉴定的方法及评价指标。本标准适用于杨树品种资源和育种材料的耐盐性鉴定及评价。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。2.1 叶片表皮细胞死亡率 指从杨树叶片上剥离下来的表皮细胞，浸泡在一定浓度的NaCl溶液中胁迫一段时间后，表皮细胞死亡的数量占观察细胞总数的比率。3 耐盐性鉴定原理 用叶表皮细胞的死亡率能快速鉴定杨树的耐盐潜力。杨树的叶表皮细胞在高盐环境中，发生质壁分离，最后导致细胞质膜的破裂。耐盐能力不同的细胞，在盐胁迫环境中发生质膜破裂的程度不同。以染料中性红为指示剂，对杨树的叶表皮细胞进行染色，质膜没有破裂的活细胞，其液泡内的微酸性环境使中性红变成樱桃红色。质膜破裂的死细胞不着色。根据着色细胞的多少可以区分耐盐能力不同的杨树品种和杨树个体。4 鉴定方法 4.1 鉴定准备 4.1.1 培养器皿的选择 水培槽是长宽高=35 cm25 cm15 cm的塑料箱，水槽内铺泡沫棉，泡沫棉的厚度 2 cm。4.1.2 营养液的配置 营养液选用 Hoagland 营养液，配方见附录 A。4.1.3 盐溶液的配置 将234 g 分析纯 NaCl 溶解在 1 000 ml 去离子水中，配制成 4 molL-1 NaCl溶液。4.1.4 染色剂的配置 将0.3 g 中性红溶解在 1 000 ml 去离子水中，配制成 0.03的中性红（3-氨基-6 甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐，分子式 C15H16N4HCl）溶液。DB13/T 14692011 2 4.2 鉴定步骤 4.2.1 样品准备 选取整齐一致的一年生杨树枝条截成 1520 cm的茎段，插于泡沫棉中，置于含有 Hoagland 营养液的水培槽中培养，1 个月后从生长一致的杨树插条上选取第一和第二片完全展开叶进行叶片表皮细胞耐盐性鉴定。4.2.2 培养条件 培养时平均温度白天为 28，夜间为22，光照周期为 14 h/10 h，光照强度为 5 000 LuX，平均湿度为65。4.2.3 盐胁迫及染色处理 取准备好的杨树叶片，用镊子或刀片从离体叶片上剥取表皮细胞，浸入 4 molL-1 NaCl 溶液中，胁迫 10 min，然后在 0.03中性红溶液中染色 10 min。3 个叶片为一个重复，共 3 次重复。5 耐盐性评价 5.1 叶片表皮细胞死亡率的计算 把染色后的叶表皮放在（1010）倍的光学显微镜下观察，用 C5 型0.5 网形目镜尺在（55）mm2范围内统计活细胞数量和细胞总数。叶片表皮细胞死亡率的计算公式如下：细胞死亡率（）=（单位面积细胞总数-单位面积活细胞数）/单位面积细胞总数100 5.2 耐盐性评价 根据单位面积叶片表皮细胞的死亡率，把杨树的耐盐性分成强、中、弱三个等级。表1 杨树耐盐性分级标准 级别 叶片表皮细胞死亡率（A）耐盐性 1 A20 强 2 20A60 中等 3 A60 弱 DB13/T 14692011 3 A A 附 录 A（规范性附录）Hoagland 营养液配方营养液的配置 Hoagland 营养液配方营养液元素配比见表 1。表A.1 Hoagland 营养液配方表 化合物名称 浓度 Ca(NO3)24H2O 945mgL-1 KNO3 607 mgL-1 NH4H2PO4 115 mgL-1 MgSO47H2O 493 mgL-1 H3BO3 2.86 mgL-1 MnCl24H2O 1.81 mgL-1 ZnSO47H2O 0.22 mgL-1 CuSO45H2O 0.08 mgL-1(NH4)24H2OMo7O24 0.02 mgL-1 Fe2SO4 7H2O 27.85 mgL-1 Na 2EDTA 37.25 mgL-1 注：Na 2EDTA加热溶解（70）后，加入 Fe2SO4。