ICS 65.020.20 B.16 备案号：42522-2014 DB63 青海省地方标准 DB 63/T 12942014 蚕豆抗根腐病田间评价技术规程 2014-06-09发布 2014-07-01实施青海省质量技术监督局 发布 DB63/T 12942014 I 前 言 本规程按照CB/T1.1-2009给出的规则起草。本规程由青海省农林科学院提出并归口。本规程起草单位：青海省农林科学院植物保护研究所。本规程主要起草人：朱海霞、李玮、程亮、郭青云。DB63/T 12942014 1 蚕豆抗根腐病田间评价技术规程 1 范围 本规程规定了蚕豆品种（系）抗根腐病田间鉴定方法和蚕豆抗病性评价要求。本规程适用于科研、教学、育种、推广等部门进行蚕豆抗根腐病性田间鉴定评价时使用。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/Z 26574 蚕豆生产技术规范 3 田间抗性鉴定方法 3.1 鉴定圃选址 鉴定圃设置在蚕豆根腐病适发区，选择具备可控排灌条件、地势平坦、土壤肥沃的地块。3.2 菌种准备 3.2.1 菌种的分离及纯化 田间采集自然发病的蚕豆根腐病病株，从发病部位的病健交界处切取组织块2 mm25mm2，用体积分数75%酒精表面消毒30 s，10 g/L NaClO消毒5 min，无菌水冲洗3次，移入马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板，25 倒置恒温培养。待菌落长出后，用灭菌的挑针挑取菌落边缘的菌丝进行病原菌纯化，病原菌形态特点见附录A。3.2.2 菌种的扩繁 将纯化后的蚕豆根腐病菌优势种尖孢镰孢（Fusarium oxysporum），在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上活化培养满皿后，移至灭菌的米粒砂上（质量比3:1），室内散射光2425条件下扩增培养7d，用于土壤接菌。3.3 鉴定圃田间配置及大田播种 3.3.1 田间配置 鉴定圃采用人工手锄开沟点播。每小区播30粒，试验采用随机区组法设计，顺序排列，行距40cm，株距20cm，每个供试品种（系）种植5行，重复4次。在试验区内对照品种种植1个小区，重复4次，顺序排列，编号。鉴定圃四周设100cm宽的保护区。3.3.2 播种时间 播种时间在3月-4月，适时播种。DB63/T 12942014 2 3.4 对照品种的选择 选择感病的蚕豆根腐病品种作为对照品种。3.5 接种试验 在蚕豆分枝期，采取土表撒菌粒的方法进行人工接种，菌粉接种量为5克/行。3.6 田间管理 按GB/Z 26574执行。3.7 病情调查 3.7.1 调查时间 在蚕豆根腐病菌接种后10d和开花期分2次进行挖根调查。3.7.2 调查方法及数据处理 每行中部连续取5株蚕豆，挖根调查，按附录B蚕豆根腐病侵染植株症状描述进行调查。以病变根系占全部根系之比(%)划分病级（见表1），记载根部发病情况，根据各品种根部病级数计算各品种的病情指数。4 抗病性评价 4.1 蚕豆品种（系）根腐病病情分级 见表1。表1 蚕豆品种（系）根腐病病情分级 病级 病情或症状 0 根系健康无变色症状，植株生长正常 1 根系稍有变色，变色根系占全部根系的10%以下，植株不萎蔫 3 根系明显变褐，变色根系占全部根系的11%-30%，植株开始萎蔫 5 变色根系占全部根系的31%-50%，植株明显萎蔫 7 变色根系占全部根系的51%-80%，植株萎蔫 9 变色根系占全部根系的81%-全株枯死 4.2 重复鉴定 初次鉴定表现为高抗、中抗以上的材料，次年需用相同的病原菌进行才重复鉴定。4.3 抗病评价标准 观测不同蚕豆品种（系）的根腐病发病情况、单株生长发育状况，依据鉴定品种（系）发病程度（病情指数和根部发病率）确定其对根腐病的抗性水平，其评价标准见表2。如果两年鉴定结果不一致，以抗性弱的发病程度为准。DB63/T 12942014 3 表2 蚕豆品种（系）根腐病抗性鉴定评价标准 抗病级别 病情指数 抗病(R)0-15.0 中抗(MR)15.1-40.0 中感(MS)40.1-60.0 感病(S)60.1-80.0 高感(HS)80.1-100 4.4 鉴定记载表格 蚕豆抗根腐病鉴定原始记录及结果记载表格见附录C。DB63/T 12942014 4 A A 附 录 A（规范性附录）尖孢镰孢形态特点 A.蚕豆根腐病菌尖孢镰孢形态特点 尖孢镰孢（Fusarium oxysporum）在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上25培养72h后，菌落直径为3.6cm，平均生长速率为12mm/d。气生菌丝发达，基物表面苋菜红，大型分生孢子数量多，纺锤形，稍弯曲，0 6个分隔，多数3隔，大小（2438）m（3.55.2）m。厚垣孢子顶生。DB63/T 12942014 5 B B 附 录 B（规范性附录）蚕豆根腐病侵染植株症状 B.蚕豆根腐病侵染植株症状 主要为害根和茎基部，引起全株枯萎。根和茎基部发病，开始表现为水渍状，后发展为黑色腐烂，侧根枯朽，皮层易脱离，烂根表面有致密的白色霉层，是病菌的菌丝体，以后变成黑色颗粒。病茎水分蒸发后，变灰白色，表皮破裂如麻丝，内部有时有鼠粪状黑色颗粒。DB63/T 12942014 6 C C 附 录 C（规范性附录）蚕豆根腐病调查 C.1 调查记载表 表C.1 蚕豆根腐病田间调查记载表 试验地点：调查、记载人：调查日期：年 月 日 蚕豆根部发病分级 品 种（系）重复 发病率 0级 1级 3级 5级 7级 9级 病情指数 1 2 3 4 C.2 发病指数(各级病株数相应级数)病情指数=调查总株数最高发病级数 _