ICS 65.020.01 B 05 备案号：DB42 湖北省地方标准 DB42/T 972 2014 甘薯种质 资源离体 保存技术 规程 Technical regulations for in vitro conservation of sweetpotato germplasm（报批稿）(完成 时间：2013-09-28)2014 04 28 发布 2014 07 28 实施 湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发布 DB42/T 972 2014 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 术语 与定 义.1 2.1 甘 薯种 质资 源 sweetpotato germplasm.1 2.2 甘 薯脱 毒试 管苗 virus-free tube seedling.1 2.3 离 体保 存 in vitro conservation.1 3 甘薯 种质 资源 离体 保存 的流程 图.1 4 甘薯 种质 资源 离体 保存 技术.1 4.1 外 植体 获取.1 4.2 外 植体 消毒.1 4.3 茎 尖剥 取.2 4.4 茎 尖培 养.2 4.5 病 毒检 测.2 4.6 继 代培 养保 存.2 DB42/T 972 2014 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 标准 化工 作导 则 第1部 分：标 准的 结构 和编 写 给出的 规则 起草。本标准 由湖 北省 农业 科学 院提出 并归 口。本标准 起草 单位：湖 北省 农业科 学院 粮食 作物 研究 所、湖 北郧 府薯 业有 限公 司。本标准 主要 起草 人：杨新 笋、王 连军、苏 文瑾、雷 剑、柴 沙沙、韩 堂伍、焦 春海、郭英。DB42/T 972 2014 1 甘 薯种质 资源离体 保存技 术规程 1 范围 本标准 规定 了甘 薯种 质资 源离体 保存 技术 的离 体 保 存的流 程图 和离 体 保 存技 术相关 内容。本标准 适用 于甘 薯种 质资 源的离 体保 存。2 术语与 定义 下列 术语 和定 义适 用于 本文件。2.1 甘薯种 质资 源 sweetpotato germplasm 携带不 同遗 传物 质的 甘薯 品种（品系）的统 称，包 括 地方品 种、选育 品种、品 系和国 外引 进材 料。2.2 甘薯脱 毒试 管苗 virus-free tube seedling 应用茎 尖分 生组 织培 养技 术获得，经 检测 确认 不带 甘薯褪 绿矮 化病 毒(Sweet potato chlorotic stunt virus，SPCSV)和甘 薯羽 状斑驳 病毒(Sweet potato feathery mottle virus，SPFMV)。2.3 离体保 存 in vitro conservation 利用组 织培 养技 术对 甘薯 种质进 行低 温保 存。3 离体保 存的 流程 图 外 植 体 获 取 外 植 体 消 毒 茎尖剥取 茎 尖 分 生 组 织 培 养 继 代 培 养 保存。4 离体保 存技 术 4.1 外 植体 获取 选用健 康薯 块，定 植于 盆 钵中，置 于适 宜的 环境 条 件中生 长，取 3 cm-5 cm 的薯芽 为外 植体，保湿 备用。4.2 外 植体 消毒 DB42/T 972 2014 2 去除外 植体 材料 上肉 眼可 见的小 叶，留 下 1 cm-1.5 cm 长的茎尖，用 自来 水冲 洗后在 无菌 条件 下，先用 70 的 乙醇 溶液 浸泡 30s，再 用 2%次 氯酸 钠 溶液浸 泡 5 min-10 min，然后用 无菌 水漂 洗 3 次，每次 30s 以上，保 湿备 用。4.3 茎尖 剥取 将经过 表面 消毒 的外 植体 置于倒 扣的 无菌 培养 皿上，用 无菌 的镊 子和 手术 刀 在双筒 体式 显微 镜下 剥 离外层幼 叶，切 取 0.5mm 左右的茎 尖组 织。4.4 茎尖 培养 将剥取 的茎 尖组 织接 种 在 MS 培 养基 附加 2 mg/L 6-BA、3 蔗 糖、0.8%琼 脂 粉、pH 值 5.8，置 于28 2、光强 1500lux 2000lux、光 照时 间 12h 的条件 下培 养，获得 试管 苗。4.5 病毒 检测 采用酶 联免 疫技 术检 测甘 薯褪绿 矮化 病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus，SPCSV)和 甘薯 羽状 斑 驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus，SPFMV)，选 留脱毒 试管 苗。4.6 继代 培养 保存 采用单 节段 繁殖，接 种 在 MS 培 养基 附加 5g/L 甘露醇、3 蔗 糖、0.8%琼脂 粉、pH 值 5.8，置 于18 2、光强 1500lux 2000lux、光 照时 间 12h 的条件 下培 养保 存。