ICS 65.020 B 16 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 22112015 马铃薯抗早疫病室内鉴定技术规范 Indoor identification standard of potato varieties resistance to early blight 2015-11-06 发布 2016-01-01 实施 河北省质量技术监督局 发 布 DB13/T 22112015 I 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009规定起草。本标准由保定市质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北农业大学。本标准主要起草人：杨志辉、朱杰华、杨毅清、张维宏、刘丽丽、何佳昱。DB13/T 22112015 1 马铃薯抗早疫病室内鉴定技术规范 1 范围 本标准规定了马铃薯品种（系）和种质资源对早疫病抗性的室内鉴定技术规程，包括马铃薯品种室内抗性鉴定方法、马铃薯品种（系）和种质资源对早疫病的抗病性分级标准及评价。本标准适用于马铃薯品种（系）和种质资源对早疫病抗性室内鉴定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 5222 马铃薯生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 马铃薯早疫病 potato early blight 由茄链格孢（Alternaria solani）引起的马铃薯上的一种气流传播的真菌病害，主要为害马铃薯叶片，在叶片上形成具有同心轮纹的坏死斑，也可为害地上茎和薯块，形成坏死斑，该病发生程度与寄主生育期相关，主要表现为生育后期感病严重。3.2 接种体 Inoculum 用于人工接种而引起马铃薯早疫病的病原体，在本标准中指用于接种的茄链格孢分生孢子悬浮液。3.3 室内抗性鉴定 Resistance identification in lab 利用接种体对被鉴定材料叶片进行人工接种，创造病原菌侵染和发病所需的最佳温、湿度以及光照条件，通过对接种叶片发病程度的科学界定（病情分级）来评价被接种马铃薯对早疫病的抗性。3.4 对照品种 Control variety 用于室内鉴定试验中的马铃薯感病品种和抗病品种。3.5 DB13/T 22112015 2 脱毒马铃薯种薯 Virus-free seed potato 除去马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯S病毒（PVS）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯A病毒（PVA）和马铃薯卷叶病毒（PLRV）等主要病毒的马铃薯种薯。3.6 病斑特征 Lesion feature 被接种叶片发病后在不同马铃薯材料上的特异性表现。3.7 病斑直径 Lesion diameter 采用十字交叉法测定病斑的长度和宽度之和的平均值。4 室内抗性鉴定方法 4.1 对照品种的选择 选择对不同地区适应性强、抗性程度已知的脱毒马铃薯作为室内抗性鉴定的对照品种。对照品种包括一个生产中主栽的感病品种费乌瑞它和一个马铃薯抗性测定单位提供的参考对照品种。4.2 栽培及管理 被测马铃薯品种（系）、种质资源按NY/T 5222 要求进行田间种植；施肥按照NY/T 496要求进行。4.3 叶片采集时间及要求 待马铃薯生长至块茎膨大期时采集叶片，采集植株中下部大小一致（宽度约为3cm），且无孔洞、无病斑的健康叶片，装入密封袋带回室内。4.4 接种前器皿及叶片的准备 将含有10.5 mol/L 萘乙酸（NAA）和10 g/mL盐酸四环素的0.5%水琼脂倒入灭菌玻璃皿（d=15cm）中，待琼脂凝固后，将被测叶片叶柄插入水琼脂中，保持叶片正面朝上以备接种。4.5 接种体菌株的选择 选择采自河北省不同地区、产孢量大、致病力强的5个菌株作为早疫病抗性鉴定的菌株组合。4.6 接种体的制备 将选择的早疫病菌菌株活化后接种到番茄汁培养基（番茄125g，琼脂粉5g，补充蒸馏水至1000mL）中，25黑暗培养7d，然后用无菌水冲洗，刮除菌丝，在紫外光下照射5min10 min，20培养3d，再用无菌水冲洗分生孢子，将分生孢子悬浮液浓度调整到1105个/mL，备用。4.7 接种方法 采用微量移液器准确量取4.6所制备的分生孢子悬浮液25 L，利用悬滴法接种到叶片正面中部的主脉附近，每个品种（系）或种质资源重复接种10个叶片。4.8 接种叶片的培养 DB13/T 22112015 3 叶片接种后先置于25黑暗条件下培养12 h，以利于病原菌的侵入。然后，将接种叶片放置在人工气候室或光照培养箱中，每天12 h光照、12 h黑暗，关照强度为8000Lux10000Lux，25培养7d10d，以生产上主栽感病品种充分发病为准，来确定具体培养时间。4.9 调查方法和数据处理 从接种后第7d开始观察对照品种的发病情况，待其充分发病后开始马铃薯接种叶片发病情况程度调查。采用十字交叉法测量接种发病叶片病斑的长度和宽度，填写马铃薯接种叶片发病情况调查表（表1），注意当天必须调查完毕。表1 马铃薯接种叶片发病情况调查表 样品 叶片编号 长度（mm）宽度（mm）病斑特征 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均 5 抗病性标准及评价 5.1 抗性标准 根据被测马铃薯接种叶片上病斑有无、病斑大小及病斑上霉层特征，制订了马铃薯抗早疫病室内鉴定标准，见表2。表2 马铃薯品种对早疫病抗性鉴定标准 5.2 鉴别有效性判别 抗性类型 发病级别 病斑直径（mm）病斑特征 免疫 0 0 无病斑或仅有过敏性坏死斑 高抗 1 d5 边缘无褪绿晕圈；病斑上无霉层。抗病 2 5d10 有褪绿晕圈，病斑上产生霉层，但霉层稀疏。感病 3 10d15 边缘有褪绿晕圈，并产生均匀霉层，且霉层较厚。高感 4 d15 病斑边缘有褪绿晕圈，病斑上产生均匀浓密的霉层。注：d=（l+w）/2。其中，“d”为病斑直径，“l”为十字交叉法测定病斑的长度，“w”为十字交叉法测定病斑。DB13/T 22112015 4 只有当感病对照品种充分发病，与预期发病级别一致，且每个处理9个叶片以上均匀发病时，才视该批鉴定材料试验数据有效。5.3 抗性评价结果 根据鉴定试验材料叶片的病斑特征，按表1判定马铃薯品种（系）或种质资源对早疫病的抗性水平。马铃薯抗早疫病鉴定室内试验要求重复2次，抗性类型相同才能出具抗性鉴定评价报告；若抗性类型不同，以发病级别高的抗性类型为准出具抗性鉴定评价报告。抗性鉴定评价报告式样参见附录A。DB13/T 22112015 5 A A 附 录 A（资料性附录）抗性鉴定评价报告式样 A.1 抗性鉴定评价报告式样按表A.1。表A.1 抗性鉴定评价报告 样品名称 样品编号 样品数量 收获时间 评价时间 评价内容 评价方法 备注 鉴定结果概述 _