ICS 67.040 X 00 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 22662014 窖泥中有效磷的测定 氟化铵-盐酸比色法 The determination of available phosphorus in pit mudAmmonium fluoride-hydrochloric acid colorimetric method 文稿版次选择 2014-12-17 发布 2015-01-17 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 22662014 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司。本标准主要起草人：汤有宏、刘国英、李安军、周庆伍、万春环、何宏魁、余秀娟、梁绍勋。DB34/T 22662014 1 窖泥中有效磷的测定 氟化铵-盐酸比色法 1 范围 本标准规定了有效磷的定义及窖泥中有效磷的测定方法。本标准适用于窖泥中有效磷含量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 有效磷 available phosphorus 窖泥中可被微生物吸收利用的磷。4 方法原理 先用酸性氟化铵提取窖泥中的有效磷，溶出的磷酸和磷酸盐与酸性钼酸铵作用，生成的磷钼杂多酸在一定酸度下被还原成蓝色络合物，该络合物的吸光度与与有效磷含量成正比，于波长 725 nm 处测量吸光度。化学反应如下：3NH4F+3HCl+AlPO4H3PO4+（NH4）3AlF3Cl3 3NH4F+3HCl+FePO4H3PO4+（NH4）3FeF3Cl3 12（NH4）2MoO3+H3PO4+21HCl+6O2（NH4）3PO412MOO3+12H2O+21NH4Cl（NH4）3PO412MOO3+2SnCl2+7HCl3 NH4Cl+2 SnCl4+2H2O+（Mo2O54MoO3）2H3PO4 5 试剂与材料 5.1 本标准中所用的水，在未注明其他要求时，均指符合 GB/T 6682 中要求的三级水。所述溶液，在未特别注明，均指水溶液。5.2 氟化铵：分析纯。5.3 盐酸：分析纯。5.4 钼酸铵：分析纯。DB34/T 22662014 2 5.5 抗坏血酸：分析纯。5.6 二水氯化亚锡：分析纯。5.7 丙三醇（甘油）：分析纯。5.8 磷酸二氢钾：优级纯。5.9 浓硫酸：分析纯。5.10 硼酸：化学纯。5.11 氟化铵溶液：1 mol/L。5.12 盐酸溶液：0.5 mol/L。5.13 氟化铵-盐酸浸提液：分别量取15 mL 1 mol/L氟化铵溶液（5.11）和 25 mL 0.5 mol/L 盐酸溶液（5.12），加水定容至 500 mL。5.14 钼酸铵试剂：称取 15 g钼酸铵（5.4）于一定量的蒸馏水中，徐徐加入 250 mL 10 mol/L 盐酸（5.3）并轻轻搅动，冷却后加水定容至 1000 mL，贮于棕色瓶中。过夜用滤纸过滤，备用。5.15 抗坏血酸-氯化亚锡甘油溶液：称取0.50 g 二水氯化亚锡（5.6），0.20 g 抗坏血酸（5.5）溶解于约8 mL盐酸（5.3）中，再加入约 50 mL 丙三醇（5.7），充分摇匀，备用。5.16 磷标准贮备液：准确称取 0.219 g预先经 105烘干 3 h 至恒重的磷酸二氢钾(5.8)溶于蒸馏水中，加浓硫酸5 mL并加水定容至1000 mL。此液为 5 mg/100 mL 磷标准贮备液。5.17 磷标准应用液：吸取 50 mL磷标准贮备液加水定容至 250 mL，即得1 mg/100 mL磷标准应用液。6 主要仪器 分光光度计。7 测定步骤 7.1 绘制磷标准曲线 7.1.1 配制系列浓度梯度的磷标准溶液：先取 7 支 50 mL具塞比色管，分别吸取 1 mg/100 mL 磷标准应用液（5.17）1、2、4、6、8、10、12 mL，加水定容到 50 mL。即得 0.02、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20、0.24 mg/mL的系列标准溶液。7.1.2 取 7 支 10 mL具塞比色管，分别吸取 8 mL 上述系列溶液（按浓度从小到大顺序依次吸取），向每支比色管中各加入 2 mL钼酸铵试剂（5.14），2滴抗坏血酸-氯化亚锡甘油溶液（5.15），充分混匀后，在室温下静置 3 min，以蒸馏水为空白，在波长 725 nm 处比色。7.1.3 以吸光度 A值为纵坐标，系列磷浓度为横坐标，绘制磷标准曲线。7.2 窖泥中有效磷的测定 7.2.1 有效磷浸提液的制备：准确称取 1 g 风干窖泥样（过 40 目筛）于 50 mL 具塞比色管中，向其中加入 25 mL氟化铵-盐酸浸提液（5.13），用力摇动，浸提 30 min，每隔 10 min 摇匀一次。30 min后用定量滤纸过滤，加入约 0.1 g硼酸（5.10），摇匀，得到有效磷浸提液。7.2.2 吸取浸提液 1.00 mL于10 mL比色管中（空白以等量的蒸馏水代替），依次加 7 mL 蒸馏水，2 mL钼酸铵试剂（5.14）、2 滴抗坏血酸-氯化亚锡甘油溶液（5.15），充分混匀后，在室温下静置 3 min（这里室温等环境条件需与制作标准曲线时基本保持一致），得到待测液。以蒸馏水为空白，在波长725 nm处比色，测出吸光度值，带入公式计算得到窖泥中有效磷的含量。DB34/T 22662014 3 8 结果计算 有效磷的含量可按公式（1）进行计算：101251m KV a)b A(X.(1)式中：A 样品测定的吸光度值；b 磷标准曲线回归方程中的截距；a 待测液稀释倍数；V 加入浸提剂的体积，单位为毫升（mL）；K 磷标准曲线回归方程中的系数；m 样品质量，单位为克（g）；1 从 25 mL 浸提液中吸取 1 mL；25 25 mL 浸提液；1 从 10 mL 待测液中吸取 1 mL；10 10 mL 待测液。注：所得结果应表示至小数点后 2 位数字。9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值，不得超过算术平均值的 15。10 最低检出限和线性范围 窖泥样品有效磷的最低检出限为：10 mg/100g，检出线性范围：10 mg/100g1000 mg/100g。_