ICS 65.020.40B 61黑 龙 江 省 地 方 标 准DB23 DB23/T 2323 2019软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程2019-03-19发布 2019-04-18实施黑龙江省市场监督管理局 发 布DB23/T 2323 2019I前 言 本标准依据GB/T 1.12009的编写规则起草。本标准由黑龙江省林业和草原局提出并归口。本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业监测规划院。本标准主要起草人：田新华、李京、周伟政、张玲、卢慧颖、李艳霞、张妍妍、张建瑛、姜天瑞、温爱亭、李念森、黄俊杰、毛洪波、于腊梅、于晓杰、韩贤波、白吉福、徐英华。DB23/T 2323 20191软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程 1 范围 本标准规定了软枣猕猴桃（Actinidia arguta Planeh.）组培快繁育苗技术的仪器设备、环境和设备消毒、培养基制备、外植体培养、炼苗与移栽、生产档案。本标准适用于软枣猕猴桃组培快繁育苗。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 DB23/T 1589 蓝靛果种苗组培快繁技术规程 3 仪器设备 应符合 DB23/T 1589的规定。4 环境和设备消毒 4.1 接种室消毒 接种前用紫外灯照射 30min。4.2 培养室消毒 每周用臭氧消毒 40min。4.3 超净工作台的消毒 接种前用紫外灯照射 30min并用 70 酒精擦拭台面，定期清洗超净工作台过滤膜。4.4 接种器具的消毒 使用前将枪式镊子、解剖剪、培养皿、解剖刀进行高温蒸汽消毒；接种过程中采用酒精灯灼烧消毒。5 培养基制备 5.1 母液配制 按照LY/T 1882的规定执行。5.2 培养基配制 DB23/T 2323 20192按照LY/T 1882的规定执行。诱导培养基：MS培养基+6-BA 0.5 mg/L+ZT 1.0 mg/L；继代增殖培养基：MS培养基+6-BA 1.0 mg/L+ZT 0.5 mg/L；生根培养基：MS培养基+IBA 0.2 mg/L。5.3 培养基灭菌 采用高压蒸汽灭菌，在压力 0.105 MPa、温度 121 条件下灭菌 20 min。锅内的灭菌物以不超过锅容量的 3/4为宜。5.4 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下宜在7d 内使用，24 条件下14d 内使用。培养基应保存于洁净环境中，避免阳光直射。6 外植体培养 6.1 外植体的选择 选择生长健壮、无病的植株作为采样母株，剪取当年生的半木质化的茎段作为外植体，采样时间宜选择晴天或露水干后。6.2 外植体灭菌 先将外植体用洗涤剂作表面清洗，再将外植体用流水冲洗30min 后，将外植体放入消毒瓶中。把装有外植体的消毒瓶放入超净工作台，打开消毒瓶倒入0.1%升汞并摇晃，浸泡消毒3min 取出，用无菌水冲洗5次；再用无菌水浸泡40min，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。6.3 外植体接种与诱导培养 将培养瓶的封口膜取下，瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将表面消毒后的外植体用手术剪刀剪去两端，剪取长约 1.0 cm 左右的带有单个腋芽的茎段接种于诱导培养基。每个培养瓶放 3个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。培养 35 d后进行继代增殖培养。6.4 继代增殖培养 外植体经诱导培养生成丛生芽，转接至继代增殖培养基中培养。培养35d 后再进行继代增殖培养。6.5 生根培养 选取培养瓶中长度 1.5 cm 2.0 cm生长健壮的芽接种至生根培养基中，组培苗生长过程中在基部会出现浅绿色嫩根，培养 35 d后平均生根数 3条以上，根长在 1.0 cm 以上即可炼苗。6.6 组培苗培养条件 培养室的温度控制在 242，相对空气湿度控制在 70%80%，光照强度为 2000 Lux 3000 Lux，光照时间为 12 h/d。7 炼苗与移栽 DB23/T 2323 201937.1 组培苗炼苗 将装组培苗的培养瓶从培养架上轻轻取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在 2025，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，封口炼苗 3d5d。封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注入超过培养基表面 0.5cm 高的自来水，温度控制在 2025，炼苗 1d2d后即可移栽。7.2 移栽 用手指或镊子轻轻取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，速蘸 0.5%高锰酸钾溶液消毒，移栽至装有黑壤土和粗河沙（混合比例为 2：1）的混合基质的育苗盘中。育苗盘规格为 35cm 50cm，育苗盘四壁高度不能低于 7cm，装入育苗盘中的基质厚度不应小于 5cm。7.3 移栽苗管理 育苗期保持育苗基质见干见湿，育苗水分管理按照 GB/T 6001的规定执行。温室空气湿度应保持 60%左右，温度控制在 20 25。8 生产档案 应建立生产档案，内容包括：培养基制备、外植体的选择、外植体灭菌、外植体接种与诱导培养、继代增殖培养、生根培养、炼苗与移栽。