ICS 65.020.01 B 05 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 23892015 水稻对稻瘟病抗性鉴定技术规程 Technique specification for identification of rice blast disease resistance 2015-12-15发布 2016-01-25实施吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 23892015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。本标准主要起草人:任金平、刘晓梅、姜兆远、李莉、张金花、李淑芳、孙辉、王琳、高鹏、郑建波、吴宪。DB22/T 23892015 1 水稻对稻瘟病抗性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了水稻抗稻瘟病鉴定接种体准备、鉴定方法、抗性评价与副产物处理。本标准适用于水稻种质资源及水稻品种（系）对稻瘟病抗性的鉴定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 1300 农作物品种区域试验技术规范 水稻 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 接种体 inoculum 用于人工接种鉴定用的稻瘟病菌(Pyricularia grisea)分生孢子悬浮液，其孢子浓度约为2105 个/ml。3.2 苗瘟 blast of seedling 水稻3叶4叶期发生的稻瘟病。3.3 参鉴材料 tested cultivars 包括水稻种质资源、品种（系）。3.4 对照材料 control cultivars 抗性为感病的蒙古稻。3.5 喷雾接种 spray inoculation 苗期鉴定时，用与空气压缩机（0.8 Mpa）链接的猴头喷雾器将接种体喷洒于稻苗上，喷雾量为 300 ml/m2。3.6 产孢培养基 sporulated medium 燕麦片30 g、西红柿汁200 ml、琼脂20 g、蒸馏水1000 ml。3.7 自然诱发鉴定 identification by natural induction 在自然条件下利用感病品种诱发的鉴定方法。DB22/T 23892015 2 3.8 叶瘟 leaf blast 水稻移栽后叶片上发生的稻瘟病。3.9 穗瘟 panicle blast 水稻抽穗后穗颈和枝梗上发生的稻瘟病。3.10 病圃 disease nursery 在稻瘟病易发区设立具有代表性的诱发水稻叶瘟和穗瘟的鉴定圃。4 接种体准备 4.1 病原标样采集与保存 采集省内各地区田间具有典型稻瘟病症状的穗颈，去掉多余枝梗及籽粒保留穗颈长度5 cm，阴干后阴凉干燥处保存。4.2 病原物分离 将穗颈浸泡4 h后放在铺有无菌滤纸的培养皿内，于27 温箱保湿培养24 h，孢子达到透明状态时，采用震落法震落在水琼脂培养基上，然后挑取单孢至PDA培养基上培养。4.3 菌种保存 将有致病性的纯培养物接种到灭菌的稻节上，置于干燥器内室温保存。4.4 生理小种鉴定与编号 应按全国统一的生理小种鉴别方法进行病原菌生理小种鉴定并编号。4.5 接种体悬浮液的制备 选择10 个优势小种菌株，27 条件下在PDA培养基上培养7 d后，移至产孢培养基上，再培养5 d 7 d，无菌条件下洗去表面菌丝进行12 h光暗培养3 天，用无菌水洗涤稀释至孢子终浓度2105 个/ml。5 鉴定方法 5.1 苗瘟鉴定 5.1.1 鉴定设计 将试验材料直接穴播于盛有肥沃土壤的育苗盘（60 cm30 cm）内，每盘60 穴，每份材料播一穴，每穴10 粒种子，每盘设对照材料1 份。一叶一心期和接菌前各施一次氮肥，每平方米施硫酸铵30 g。试验设3 次重复。5.1.2 接种时间和方法 在水稻3 叶4 叶期进行喷雾接种。每平方米接种孢子液300 ml，接种后于26 28 的温室内，黑暗保湿(RH95%)16 h后移去遮光物，保湿控温管理。DB22/T 23892015 3 5.1.3 调查时间方法 水稻接种后7 d8 d当对照材料发病达7级或以上时进行调查，每份材料逐株逐叶调查。5.1.4 分级与记录 应按附录A表A.1分级，按附录B表B.1记录。5.2 叶瘟和穗瘟鉴定 5.2.1 病圃选择 选择常年易发生重病田块设为病圃，每份材料每次重复的病圃面积不少于1 m2。5.2.2 病圃试验设计 每份材料移栽3 行，行长1 m，行距为20 cm，每行7 穴，每穴3 株，按顺序排列，区行垂直两端栽诱发。品种蒙古稻2行作为诱发行，株行距与参鉴品种相同。其余应按NY/T 1300的规定执行。5.2.3 病圃管理 病圃施肥量高于当地生产田10%，其余应按NY/T 1300的规定执行。5.2.4 调查时间和方法 5.2.4.1 叶瘟 在水稻孕穗期（7月下旬）对参鉴材料进行逐株逐叶调查，1周后复查1次。5.2.4.2 穗瘟 在水稻黄熟期（9月上中旬）对每份参鉴材料进行调查，连续实查100 穗，1 周后复查1 次，记载每穗的发病情况、总穗数、病穗数，计算病穗率。5.2.5 分级与记录 5.2.5.1 叶瘟 应按附录A表A.1分级，按附录B表B.2记录。5.2.5.2 穗瘟 穗瘟发病率与分级的关系见附录A表A.2，应按附录B表B.3记录。6 抗性评价 6.1 评价原则 依据苗瘟、叶瘟、穗瘟的调查数据，以最高数值作为参鉴材料的抗性级别，在中抗到高感的评价区间，当同级别数值在各个点次出现频率低于25%时，抗性评价上调一个级别，作为参鉴材料的苗瘟、叶瘟和穗瘟的最终级别。6.2 评价标准 DB22/T 23892015 4 稻瘟病抗性评价分级标准见附录A表A.1、表A.2，将参鉴材料划分为高抗（HR）、抗(R)、中抗(MR)、中感(MS)、感(S)、高感(HS)6个类型。6.3 抗性记录 按附录B表B.4记录。7 副产物处理 7.1 接种体 将接种后剩余的接种体集中灭菌处理。7.2 病株 将发病稻株深埋或焚烧。DB22/T 23892015 5 附 录 A（规范性附录）水稻稻瘟病分级标准 水稻苗叶瘟调查分级见表A.1。表A.1 水稻苗叶瘟调查分级标准 病 级 病 情 抗性评价0 无病。高抗 1 针头状大小褐点 2 褐点较大，直径小于1 mm 抗 3 圆形至椭圆形的灰色病斑，边缘褐色，直径1 mm2 mm 中抗 4 典型纺锤形病斑，长1 cm2 cm，通常局限在两叶脉之间，病斑面积小于叶面积的2.0%5 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的3.0%10.0%中感 6 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的11.0%25.0%7 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的26.0%50.0%感 8 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的51.0%75.0%9 全叶枯死 高感 水稻穗瘟发病率群体抗性分级见表A.2。表A.2 水稻穗瘟发病率群体抗性分级标准 病 级 病穗率（d）抗性评价 0 0 高抗 1 5.0%抗 3 5.0%d10.0%中抗 5 10.0%d25.0%中感 7 25.0%d50.0%感 9 50.0%高感 DB22/T 23892015 6 附 录 B（资料性附录）水稻稻瘟病记录表 水稻苗瘟调查记录表见表B.1。表 B.1 水稻苗瘟调查记录表 地点：调查日期：调查人：分菌系 田间编号 品种名称 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 最高病级 1 2 水稻叶瘟调查记录表见表B.2。表 B.2 水稻叶瘟调查记录表 地点：调查日期：调查人：病级 最高病级 田间编号 品种名称 第一次 第二次 1 2 水稻穗瘟调查记录表见表B.3。表 B.3 水稻穗瘟调查记录表 地点：调查日期：调查人：田间编号 品种名称 调查总穗数 穗颈瘟数 枝梗瘟数 发病率/%发病率级别 1 2 DB22/T 23892015 7 水稻稻瘟病抗性鉴定结果表见表B.4。表 B.4 水稻稻瘟病抗性鉴定结果表 地点：调查日期：调查人：苗瘟 叶瘟 穗瘟 田间 编号 品种名称 病级 抗性 病级 抗性 发病率/%发病率级别 抗性 1 2 _