ICS 65.140 B 47 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 23472016 中红侧沟茧蜂人工繁育技术规程 2016-05-23发布 2016-07-01实施 河北省质量技术监督局 发 布 DB13/T 23472016 I 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009给出的规则编写。本标准由河北省农林科学院提出。本标准起草单位：河北省农林科学院植物保护研究所。本标准起草人：李建成、路子云、冉红凡、刘文旭、马爱红、屈振刚。DB13/T 23472016 1 中红侧沟茧蜂人工繁育技术规程 1 范围 本标准规定了中红侧沟茧蜂Microplitis mediator（Haliday）以粘虫为繁育寄主的人工繁育技术的术语和定义、粘虫的人工饲养和中红侧沟茧蜂繁育的环境条件、种源、方法等内容。本标准适用于以粘虫为中间寄主的中红侧沟茧蜂的人工繁育。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。2.1 中红侧沟茧蜂 属膜翅目Hymenoptera茧蜂科Braconidae，是重要的农业害虫天敌，其寄主涉及到鳞翅目夜蛾科和尺蛾科的40多种昆虫，其中包括棉铃虫Helicoverpa armigera（Hubner）、粘虫Mythimna separata（Walker）、地老虎Agrotis ypsilon(Rottemberg)和甘蓝夜蛾Mamestra brassicae（Linnaeus）等。2.2 粘虫人工饲料 用于人工饲养粘虫的饲料，人工饲料配方及制作方法见附录C。2.3 滞育茧 处于滞育状态的中红侧沟茧蜂蜂茧，颜色为褐色，纺锤形，长宽=4.5 mm1.5 mm，重3.8 mg4.4 mg，04可保存一年。2.4 发育茧 处于发育状态的中红侧沟茧蜂蜂茧，颜色为绿色，纺锤形，长宽=4.6 mm1.7 mm，重3.2 mg3.7 mg，04可保存7d10d。3 人工繁育环境条件 3.1 厂房条件 厂房水电设施齐全、具有良好的防水、保温性能，周围植物稀少或可严密隔离。3.2 车间组成 DB13/T 23472016 2 由人工饲料制备室、粘虫养殖室、接蜂室、繁蜂室、消毒室、质量检测室、包装车间、恒温冷藏室、原材料库组成。3.3 配套设施 3.3.1 通风系统 在各养殖室内安装通风设备，通风口用60目纱网隔离。3.3.2 控温、控湿系统 采用全自动温湿度调控系统控制环境条件；粘虫幼虫饲养室环境条件为温度：261，相对湿度3龄以下幼虫70%80%，4龄以上幼虫为60%70%；成虫饲养室环境条件为温度211，相对湿度为75%85%，光周期为LD=1212。发育茧繁殖条件温度为261，相对湿度60%70%，光周期LD=1410；滞育茧繁殖条件温度为161，相对湿度60%70%，光周期LD=1014。3.3.3 防逃逸设施 在门口设置隔离间，在通风口、窗户等处设置防虫网，防止幼虫和成虫逃逸。4 粘虫的人工饲养 4.1 粘虫种源 由玉米田间采集幼虫，室内继代培养，挑选生长发育良好，健康的个体作为种源。粘虫鉴定特征见附录B。4.2 粘虫卵 4.2.1 粘虫卵的收集 以聚丙烯塑料绳为产卵底物，将其穿入产卵箱顶层事先挖好的小孔中，末端系扣防止塑料绳脱落；塑料绳长度以达到或超过产卵箱底部为准，每天收集有粘虫卵的塑料绳。4.2.2 粘虫卵的保存 将每天收集的粘虫卵放入保鲜袋中，置于温度04的冰箱内保存。4.2.3 粘虫卵的消毒 将带有粘虫卵的塑料绳先用无菌水冲洗23遍，然后用4%甲醛溶液浸泡10min，最后再用无菌水冲洗23遍，充分晾干。4.2.4 粘虫卵的孵化 晾干的有粘虫卵塑料绳放入保鲜袋，加少许玉米苗保湿。放入温度261，光周期为LD=1212的光照培养箱中使其孵化，卵孵化后转入养虫袋内饲喂。4.3 粘虫幼虫 4.3.1 养虫袋 DB13/T 23472016 3 养虫袋用100目锦纶纱制成，长、宽均为33cm，袋口用塑料拉杆封住。袋内放入U形铁丝，撑起一定空间，供幼虫在其间取食活动。此袋可供养12龄小幼虫1000头左右，34龄幼虫200300头，5龄以上幼虫70头左右。4.3.2 粘虫低龄幼虫饲养 13龄粘虫小幼虫需选择较鲜嫩的玉米苗作为饲料在养虫袋中饲养，在养虫袋内每天加入100g200 g新鲜玉米苗供幼虫食用。每天清除虫粪和更换饲料，操作时注意把残余在玉米芯叶内的幼虫收回，防止幼虫丢失；待幼虫到达3龄及时调整养虫袋内幼虫密度。4.3.3 粘虫大龄幼虫饲养 幼虫到达4龄后用人工饲料在养虫袋饲养，人工饲料配方及配制方法见附录C。此时幼虫取食量、排粪量不断增加，每天添加60g120g人工饲料，必须保证养虫袋每饲料的足量供应和及时清除粪便。同时随着幼虫的生长及时调整幼虫密度并且剔除病虫，5龄前每袋供养200头左右，5龄后每袋供养70头左右。养虫室内要注意通风换气，此时幼虫适宜的环境温度为261，湿度为60%70%，光周期为LD=1212。4.4 粘虫蛹 4.4.1 粘虫化蛹盒 用长35cm，宽25cm，高10cm的塑料盒供粘虫化蛹，盒盖中间配有纱网。4.4.2 粘虫化蛹 将6龄幼虫挑出放入化蛹盒内，每盒可放幼虫100150头。盒底铺有35层吸水纸，喷洒适量水并放少量玉米苗保湿。4.4.3 粘虫蛹收集 待粘虫化蛹3d后收集蛹。4.4.4 粘虫蛹消毒 将蛹放入4%甲醛溶液浸泡20min，然后用清水冲洗23遍。4.4.5 粘虫蛹羽化 将消毒后的蛹放入与化蛹盒内，盒底放35层吸水纸，用湿毛巾盖在盒子顶部。放入温度为261，湿度为75%85%，光周期为LD=1212的养虫室内使其羽化。4.5 粘虫成虫 4.5.1 粘虫成虫营养补充 成虫羽化后需饲喂10%蜂蜜水以补充营养。将80ml100ml 10%蜂蜜水倒入容积250ml三角瓶中，用脱脂棉制作一灯芯状吸绳，一端插入蜂蜜水中，另一端在瓶口，供粘虫成虫取食。4.5.2 粘虫成虫产卵箱 产卵箱规格为50cm35cm55cm，框架、底座、后座为铝合金材料，前面为玻璃推拉门，其余面为不锈钢纱网，每笼可供300头左右成虫产卵。DB13/T 23472016 4 4.5.3 粘虫成虫产卵 在产卵箱内放置300头粘虫成虫，雌雄虫随机。箱顶盖上湿毛巾保湿，成虫3天后开始产卵，产卵介质为聚丙烯塑料绳。5 中红侧沟茧蜂的繁育 5.1 中红侧沟茧蜂种源 在非抗虫棉田采集棉铃虫幼虫，通过室内饲养获得自然蜂种。中红侧沟茧蜂鉴定特征见附录A。5.2 中红侧沟茧蜂接种箱 接种箱规格为40cm35 cm35cm的透明盒，前盖带有60目的锦纶纱网以保持盒子的通透性。5.3 中红侧沟茧蜂接种 在中红侧沟茧蜂羽化后按雌雄1:1的比例放入蜂箱（雌雄鉴别见附录A），并使之交配48h。然后在接蜂箱底部放150g200 g玉米苗，并饲喂10%蜂蜜水以补充营养。接蜂时，在箱内放入交配后的中红侧沟茧蜂雌蜂100头，箱底部放入2龄2龄末的粘虫幼虫2000头，封闭好箱盖以防粘虫幼虫逃逸。接种24h后取出被寄生粘虫幼虫，并更换下一批粘虫幼虫。5.4 被寄生粘虫幼虫饲养 将接种24h的粘虫幼虫过筛后，放入养虫袋，幼虫密度为每袋500头。每天更换饲料并清除粪便，及时剔除病虫和未寄生幼虫。饲养控制条件因繁育滞育茧和发育茧而不同（见5.5）。5.5 中红侧沟茧蜂蜂茧的繁育 5.5.1 发育茧的繁育 将被寄生的粘虫幼虫在温度261，LD=1410，相对湿度65%75%的条件下饲养，一般10d左右即可出茧。5.5.2 滞育茧的繁育 将被寄生的粘虫幼虫在温度161，LD=1014，相对湿度65%75%的条件下饲养，一般25d左右出茧。5.6 中红侧沟茧蜂蜂茧贮存 5.6.1 发育茧的贮存 将发育茧放到底部有湿沙土的玻璃瓶中保湿，置于温度05的冷藏箱，可存放7d10d。5.6.2 滞育茧的贮存 将滞育茧放到底部有湿沙土的玻璃瓶中保湿，置于05的冷藏箱，可存放一年左右。DB13/T 23472016 5 A A 附 录 A（资料性附录）中红侧沟茧蜂形态特征 A.1 成虫 中红侧沟茧蜂Microplitis mediator（Haliday）体长 3 mm。头 触角丝状，18节，深黑，长4.20mm5.00 mm，约与体等长。横形，向后圆形收窄。颜面和颊具革状细皱。额和头顶具细刻点。唇基基部稍隆起，与颜面微分开；幕骨陷深。颚眼距稍长于上颚基宽。单复眼间距约为单眼直径的2.8倍。胸 前胸背板侧方光滑，中央凹陷，内有短横脊。中胸盾片及小盾片具皱状刻点；盾纵沟由浅而细的皱显出；小盾片前凹内具纵脊。中胸侧板前方具皱状刻点，中央侧沟之后平滑有光泽。后胸侧板满布粗糙皱纹。翅 径脉从翅痣中央发出；第2肘室四边形，向端部狭；第1肘间横脉与肘脉第1段端或肘脉第2段着色部位等长；小脉在基脉外方，其距稍短于小脉本身长度。腹 并胸腹节具网状粗皱；中纵脊明显。第一背板长约为宽的2倍，满布皱纹，中央稍纵凹，侧缘几乎平行，端部圆，后端中央有明显的光滑小隆丘；其余背板光滑。体色 体黑色，腹部有时呈黑褐色，第2+3节背板赤黄色；触角黑褐色，柄节基部多半红褐色。须淡黄色；足赤黄色，基部或中后足基节基部黑褐色；翅基片淡赤色，翅稍带烟褐色，翅痣和翅脉暗褐色，翅痣基部有黄白色斑。触角较粗且长，上颊稍长于复眼横径。其余同。A.2 卵 中红侧沟茧蜂产生无卵黄卵，初产卵长289.9430.9m，卵椭圆型，稍微有点儿弯曲，颜色为乳白色或无色透明。A.3 幼虫 中红侧沟茧蜂将卵产于寄主体内，幼虫在寄主体内生长发育。其发育时期随着温度和湿度的不同而不同，一般为6d11d，中红侧沟茧峰幼虫有 3个龄期。初孵幼虫长0.51 mm、宽0.12mm，腹部扁平，非常活跃；头部高度骨化，头长 0.12mm、宽0.21mm，比身体其余部分宽，具l对触角和1 对运用自如的角质化的颚；体色乳白色，有13节，最后1节长80m、宽 40m，呈圆锥型尾巴状。随着幼虫的生长，在尾丝的背侧面凸出 1个球状器官，该器官为尾囊，尾巴消失，这时幼虫体长1.77mm、宽 0.51mm。在产卵后 108h113h，1 龄幼蜂开始蜕皮；2 龄幼蜂为无头型，尾囊发达，可见 10 节腹节。在寄生后7d8d，3龄幼蜂在寄主腹节45节处钻出结茧化蛹，平均体长 4.5mm、宽1.5mm，头不再比身体宽，腹节第 27节各有 1对气孔。至幼蜂钻出寄主后，寄主血腔中仍能观察到幼蜂蜕下的皮壳。A.4 茧 纺锤型。中红侧沟茧蜂具有兼性滞育特性，能产生 2种不同颜色的茧，即滞育茧（褐色）和非滞育茧（绿色）。绿色最为常见，特定的条件下产生褐色茧，茧表有时有纵形皱纹。滞育茧的平均单茧重比非滞育茧重，抗逆性强。DB13/T 23472016 6 B B 附 录 B（资料性附录）粘虫形态特征 B.1 成虫 淡黄色或淡黄褐色至淡灰褐色，体长 15mm20mm，翅展 35mm45mm。头部与胸部灰褐色。腹部暗褐色。触角丝状，胸发达，遍被鳞毛。前翅灰黄褐色、黄色或橙色，变化很多，内横线往往只现几个黑点，环纹与肾纹圆形，淡黄色或褐黄色，肾纹后端有 1个白点，其两侧各有1 个黑点。由翅尖向斜后方有 1 条暗色条纹。后翅正面暗褐，反面淡褐，向基部色渐淡，缘毛白色。翅僵针刺状，雌蛾 3根较尖细，雄蛾1根略粗壮。雄蛾较小，体色较深，其尾端经挤压后，可伸出1对鳃盖形的抱握器，抱器略似扫帚，抱器腹大，内突及背突均小，抱器冠发达，抱握器顶端具1长刺，这一特征是别于其他近似种的可靠特征。雌蛾腹部末端有1尖形的产卵器。B.2 卵 半球形，直径约 0.5mm，初产时乳白色，孵化前呈黄褐色至黑褐色。卵粒单层排列成行，但不整齐，常夹于叶鞘缝内，或枯叶卷内，在水稻和谷子叶片尖端上产卵时常卷成卵棒。B.3 幼虫 体色多变，初孵幼虫多为灰褐色；23 龄幼虫灰褐或捎带暗红色，取食嫩叶后，胸腹部前半截常现绿色。密度小时，4龄以上幼虫多呈淡黄褐至黄绿色不等。密度大时，多为灰黑至黑色。头黄褐至红褐色，有暗色网状纹。头部中央沿蜕裂线有黑褐色纵纹，略似“八”字形。幼虫体表有许多纵行条纹，背中线白色，边缘有细黑线，背中线两侧有2条红褐色纵条纹，近背面较宽，两纵线间均有灰白色纵行细纹。胸盾片浓黑，有光泽。胸部第一节和腹部第一至八节两侧各有气门一个，气门盖黑色。腹部第三至六节腹面各有腹足1对，第十节有尾足一对。腹面污黄色，腹足及尾足外侧有半月形黑褐色斑。趾钩黑褐色，呈半环形排列。16龄幼虫体长依次为：3.4mm、7.4mm、9.4mm、16.5mm、23mm、38mm左右；头宽依次为：0.32mm、0.53mm、0.82mm、1.30mm、2.40mm、3.50mm左右。腹足 1 龄只有后2 对；2龄除后2对外，前 2对也已发育，但不完全；3龄后 3 对已发育完全，前 1对尚未发育完全；4龄以上4 对腹足均发育完全。B.4 蛹 初化蛹乳白色，渐变红褐色。蛹长 19mm23 mm，宽约 9mm。第五至七腹节背面近前缘处有横脊状隆起，上具点刻，横列成行呈马蹄形，中央刻点大而密，两侧渐稀，后缘呈锯齿形。腹末有尾刺3对，中间 1对较粗直，两侧 2对细小略内曲。生殖孔雄蛹位于腹部第九节；雌蛹位于腹部第八节的腹面。DB13/T 23472016 7 C C 附 录 C（资料性附录）粘虫人工饲料配方及制作方法 C.1 粘虫的人工饲料配方 玉米叶粉（抽穗前的玉米叶）160 g 麦麸 160 g 酵母粉 50 g 琼脂 25 g 白糖 20 g 维生素C 4 g 复合维生素B 1.5 g 山梨酸 3 g 尼泊金 5 g 水 2000 ml C.2 人工饲料制作 在饲料锅中放入1300ml水煮开；加入琼脂25g、白糖20g；加入玉米叶粉160g、麦麸160g、山梨酸3g、尼泊金5g、酵母粉50g（用700ml水搅拌）；降温加入Vc 4g，Vb 1.5g（混合磨碎），混合均匀。搅拌好的饲料倒入已消毒的瓷盘内，晾凉后放入冷藏箱保存，随用随取。_