ICS 71.040.40 G20 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3313 2018 肥料中壳聚糖含量测定 分光光度法 Determination of Chitosan in Fertilizer by Spectrophotometry 2018-06-12 发布 2018-07-12 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 3313 2018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出 的规则起 草。本标准由山 东省质量 技术监督 局提出。本标准由山 东化工标 准化技术 委员会归 口。本标准起草 单位：山东 省产品质 量检验研 究院、济 南阿波罗 甲壳素肥 业有限公 司、青岛 海 力源生物科技有限公 司、山东洁 晶集团股 份有限公 司、济南 高新区阿 波罗甲壳 素工程技 术研究中 心、青岛海大 生物集团有限 公司。本标准主要 起草人：刘 金凤、焦毅、于晓菲、齐 云、王景超、刘鹏飞、赵丽芳、商 姗姗、张娟、刘有利、张守 福、林成 彬、王海 华。DB37/T 3313 2018 1 肥料中壳聚糖含量测定 分光光度法 1 范围 本标准规定 了含壳聚 糖肥料中 壳聚糖含 量的测定 方法。本标准适用 于由虾蟹 壳为原料 加工处理 而成的水 溶性壳聚 糖的测定。2 规范性引用 文件 下列文件对 于本文件 的应用是 必不可少 的。凡是注 日期的引 用文件，仅所注日 期的版本 适 用于本文件。凡是不 注日期的 引用文件，其最新 版本（包 括所有的 修改单）适用于本 文件。GB/T 6682 分析实验 室用水规 格和试验 方法 HG/T 2843 化肥产品 化学分析 常用标准 滴定溶液、标准溶 液、试剂 溶液和指 示剂溶液 3 方法原理 肥料中壳聚 糖经水解 后生成 氨基葡萄 糖，与 乙酰丙酮 和对二甲 氨 基苯 甲醛生成 红色化 合 物，在525 nm波长处用 分光光度 计测定。4 试剂或材料 本标准中所 用试剂、水和溶液 的配制，在未注明 规格和配 制方法时，应符合HG/T 2843 的 规定。4.1 盐酸：分析 纯。4.2 无醛乙醇（或四无乙 醇）：分 析纯。4.3 氢氧化钠：分析纯。4.4 无水碳酸钠：分析纯。4.5 氢氧化钠溶 液：400 g/L。称取 分析纯氢 氧化钠 40 g，加水至 100 mL。4.6 碳酸钠溶液：c（1/2Na2CO3）=1.0 mol/L。称取无水 碳酸钠 2.65 g，加水至 50 mL。4.7 乙酰丙酮溶 液：取乙 酸丙酮 3.5 mL，加入碳 酸钠溶液（4.6）至 50 mL，置冰 箱中备用，应于使用前一日配制。4.8 对二甲 氨基 苯甲醛溶 液：称取 对二甲 氨 基苯甲醛 0.8 g，加无醛 乙醇（4.2）15 mL 及盐酸（4.1）15 mL，摇匀。4.9 盐酸氨基葡 萄糖 标准 品：99.9%。4.10 盐酸氨基葡 萄糖标准 储备 溶液：（盐 酸氨基葡 萄糖）=1.000 mg/mL。称取 105 干 燥 至恒重的盐酸氨基 葡萄糖 0.1 g（准确至 0.0002 g），置 100 mL 容量瓶中，加水溶 解并稀释 至 刻度，摇匀。4.11 盐酸氨基葡 萄糖标准 溶液：（盐酸氨 基葡萄糖）=0.1000 mg/mL。准确 移取 盐酸氨基 葡 萄糖标准储备 溶液（4.7）10.00 mL，至 100 mL 容量瓶 中，加水 至刻度，摇匀。5 仪器 DB37/T 3313 2018 2 5.1 分光光度计，带有光 程为 1 cm 的吸收池，可在 525 nm 处 测量。5.2 恒温水浴锅。5.3 恒温干燥箱。5.4 分析天平：感量 0.0001 g。6 分析步骤 6.1 试 样 的制备 固体样品缩 分至约 100 g，将 其迅速研 磨至全部 通过 0.50 mm 孔径试验筛（如样 品潮湿，可 通过 1.00 mm 试验筛），混合均 匀，置于 洁净、干 燥容器中；液体样 品经多次 摇动后，迅速取出 约 100 mL，置于洁净、干 燥容器中。6.2 试 样 溶液的 制备 称取含壳聚 糖约200 mg 的试 样（固体 或液体）适量（称准至0.0002 g），置于50 mL 烧 杯 中加水溶解，定量转 移到100 mL 容量 瓶中，加 水稀释 至刻度，混匀，如有必要 干过滤，弃去初 滤 液。准确 移 取1.00 mL 于25 mL 具塞 刻度试 管中，加5 mL 浓盐 酸溶液，摇匀，盖上试 管塞，于100 水 浴（或能达到 同等水解温度 的恒温干 燥箱）水解2 h，冷却，用氢氧化 钠溶液 中和至7（用pH 试 纸检测），加 水稀释至 刻度，摇 匀，作为试样 溶液。6.3 标准曲线的 绘制 移取盐酸氨 基葡萄糖 标准溶液（4.11）0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL分别置于25 mL 具 塞刻度试 管中，然 后再分别 加入5.00 mL、4.00 mL、3.00 mL、2.00 mL、1.00 mL、0.00 mL蒸馏水 至5.00 mL，各加入 乙酰丙 酮溶液（4.7）2.00 mL，摇匀，于100 水 浴中（1 min 后加盖）静置25 min，取出，用 冰水迅 速冷却后，加入 无醛乙醇3.00 mL，于60 水浴中 静置10 min 后，再加入 对二甲氨基苯 甲醛（4.8）2.00 mL，用 力振摇后，由60 水浴中 静置1 h，取出 立即用冷 水 冷却至室温，加蒸馏水 定 容至25mL，摇匀，配成一系 列含 盐酸 氨基葡萄 糖 分别为0 mg、0.1 mg、0.2 mg、0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg 的 标准工作 溶液。在 波长525 nm 处，用1 cm 比色 皿，以试 剂空白为 参比液，测 其吸光值，拟定标准曲线 方程。比 色过程在30 min 内 完成。6.4 试样的测定 6.4.1 准确 移取试 样 溶液 2.00 mL（约含盐 酸氨基葡 萄糖 300 g）置于具 塞试管中，按 6.3 中“用 蒸馏水稀释至 5.00 mL”及 其后面的 步骤进行。对于颜 色较深的 样品，以 1 mL 盐酸（4.1）代替 对二甲 氨基苯甲醛溶 液 作为空 白，其他 操作同样 品。6.4.2 将测得的吸 光值带入 标准曲线 方程，求 得氨基葡 萄糖的质 量。6.5 空白试验 除不加试样 外，其他 步骤同试 样溶液。7 分析结果的 表达 DB37/T 3313 2018 3 以质量分数 表示的壳 聚糖（以 氨基葡萄 糖计）的 质量分数：100 8309.02 100025 100)(w0 1 mm m.(1)式中：m1 求得的试 样盐酸氨 基葡萄糖 的质 量，单位 为毫 克（mg）；m0 空白 盐酸 氨基葡萄 糖的质量，单位 为 毫克（mg）；m 试样的 质量，单 位 为克（g）；0.8309 盐酸氨基 葡萄糖换算 为氨基 葡萄糖的 系数。8 允许差 平行测定结 果和不同 实验室测 定结果的 允许差应 符 合表 1 要求。表1 平行测定结 果和不同 实验室测 定结果的 允许差 海藻酸 含量，%平行结 果测 定的 绝对 差值，%不同实 验室 测定 结果 的绝 对差 值，%2.0 0.2 0.4 2.0 5.0 0.5 1.0 5.0 10.0 1.0 2.0 10.0 2.0 4.0 _