I C S 1 1.2 2 0B 4 1备 案 号：DB42湖 北 省 地 方 标 准D B 4 2/T 7 9 2 2 0 1 2猪 乙 型 脑 炎 乳 胶 凝 集 抗 体 检 测 方 法M e t h o d o f t h e l a t e x a g g l u t i n a t i o n f o r t h e d e t e c t i o n o f a n t i b o d i e s a g a i n s ts w i n e e p i d e m i c e n c e p h a l i t i s2 0 1 2-0 1-0 6 发 布 2 0 1 2-0 3-0 1 实 施湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局发 布D B 4 2/T 7 9 2 2 0 1 2I目 次前 言.I I引 言.I I I1 范 围.12 术 语 和 定 义.13 实 验 原 理.14 实 验 条 件.15 实 验 材 料.16 样 品 处 理.17 实 验 方 法.28 结 果 判 定.29 注 意 事 项.2附 录 A.3D B 4 2/T 7 9 2 2 0 1 2I I前 言本 标 准 按 G B/T 1.1-2 0 0 9 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规 则 起 草。本 标 准 由 华 中 农 业 大 学 提 出。本 标 准 由 湖 北 省 农 业 厅 归 口。本 标 准 起 草 单 位：华 中 农 业 大 学 动 物 医 学 院、武 汉 科 前 动 物 生 物 制 品 有 限 责 任 公 司、湖 北 省 动 物 疫病 预 防 控 制 中 心。本 标 准 主 要 起 草 人：曹 胜 波、金 梅 林、陈 焕 春、宋 念 华、黄 少 梅、李 淑 云、董 晓 辉。D B 4 2/T 7 9 2 2 0 1 2I I I引 言乙 型 脑 炎（J a p a n e s e e n c e p h a l i t i s,J E）是 一 种 急 性 自 然 疫 源 性 虫 媒 传 播 的 人 畜 共 患 传 染 病，可 对 人类 的 健 康 造 成 极 大 的 危 害，被 卫 生 部 列 为 乙 类 传 染 病。猪 是 乙 型 脑 炎 主 要 的 传 染 源 之 一，可 与 蚊 虫 一 起形 成 循 环 传 播，严 重 危 害 养 猪 业。国 家 农 业 部 将 猪 乙 型 脑 炎 归 于 二 类 动 物 疫 病。为 有 效 预 防 和 控 制 乙 型脑 炎，在 加 强 预 防 和 免 疫 的 同 时，临 床 上 急 需 一 种 特 异、敏 感、快 速、便 于 操 作 的 诊 断 方 法，以 用 于 检测 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 的 抗 体。D B 4 2/T 7 9 2 2 0 1 21猪 乙 型 脑 炎 乳 胶 凝 集 抗 体 检 测 方 法1 范 围本 标 准 规 定 了 猪 乙 型 脑 炎 乳 胶 凝 集 抗 体 检 测 的 方 法 的 术 语 和 定 义、实 验 原 理、实 验 条 件、实 验 材 料、样 品 处 理、实 验 方 法、结 果 判 定 和 注 意 事 项 等。本 标 准 适 用 于 猪 血 清、全 血 和 乳 汁 中 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 抗 体 的 检 测。2 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。乳 胶(l a t e x)：泛 指 聚 合 物 微 粒 分 散 于 水 中 形 成 的 胶 体 乳 液。3 实 验 原 理乳 胶 凝 集 试 验 也 称 间 接 乳 胶 凝 集 试 验，是 将 抗 原 或 抗 体 结 合 在 聚 苯 乙 烯 乳 胶 微 粒 表 面，然 后 与 相 应的 抗 原 或 抗 体 作 用，在 电 解 质 存 在 的 适 宜 条 件 下，微 粒 发 生 凝 集，从 而 观 察 反 应 的 结 果。4 实 验 条 件4.1 实 验 室实 验 操 作 宜 在 常 温（1 8 2 5）进 行。4.2 仪 器台 式 低 温 高 速 离 心 机、微 量 移 液 器、冰 箱、玻 片、吸 头。4.3 人 员注 意 个 人 防 护 和 环 境 保 护。5 实 验 材 料5.1 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 致 敏 的 乳 胶 抗 原：为 乳 白 色 均 匀 胶 状 液，如 出 现 分 层，使 用 前 轻 轻 摇 匀。5.2 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 阳 性 对 照 血 清。5.3 阴 性 对 照 血 清。5.4 样 品 稀 释 液 配 制 见 附 录 A。6 样 品 处 理6.1 血 清D B 4 2/T 7 9 2 2 0 1 22按 常 规 方 法 采 血 及 分 离 血 清，血 清 宜 清 亮。6.2 全 血用 针 尖 刺 破 待 检 动 物 耳 静 脉，用 吸 头 吸 取 血 液 一 滴，置 于 载 玻 片 上。6.3 乳 汁按 常 规 方 法 采 集 乳 汁，经 3 0 0 0 r/m i n 离 心 1 0 m i n，取 上 清 液 作 样 品。7 实 验 方 法取 样 品(血 清、全 血 或 乳 汁)、阳 性 对 照 血 清、阴 性 对 照 血 清、稀 释 液 各 一 滴，分 别 置 于 玻 片 上。各加 乳 胶 抗 原 一 滴，混 匀 并 晃 动 1 m i n 2 m i n，于 3 m i n 5 m i n 内 观 察 结 果。8 结 果 判 定8.1 凝 集 反 应 可 能 出 现 以 下 几 种 结 果：a)“+”：全 部 乳 胶 凝 集，颗 粒 聚 于 液 滴 边 缘，液 体 完 全 透 明；b)“+”：大 部 分 乳 胶 凝 集，颗 粒 明 显，液 体 稍 混 浊；c)“+”：约 5 0 乳 胶 凝 集，但 颗 粒 较 细，液 体 较 混 浊；d)“+”：有 少 许 凝 集，液 体 略 显 混 浊；e)“-”：液 滴 呈 原 有 的 均 匀 乳 状。8.2 成 立 条 件3 0 s e c 6 0 s e c 内 出 现 如 下 结 果，试 验 方 可 成 立：阳 性 对 照 样 品 与 乳 胶 诊 断 液 进 行 乳 胶 凝 集 反 应，应 出 现“+”以 上 凝 集；阴 性 对 照 样 品 与 乳 胶 诊 断 液 进 行 乳 胶 凝 集 反 应，应 不 凝 集。8.3 结 果 判 断3 0 s e c 6 0 s e c 内 出 现“+”以 上 凝 集，判 为 阳 性；3 0 s e c 6 0 s e c 内 液 滴 呈 原 有 的 均 匀 乳 状 为 阴 性。9 注 意 事 项实 验 过 程 中 注 意 做 好 个 人 的 生 物 安 全 防 护 措 施，废 弃 物 应 做 无 害 化 处 理。D B 4 2/T 7 9 2 2 0 1 23A A附 录 A（规 范 性 附 录）试 剂 配 制A.1 样 品 稀 释 液 的 配 制氯 化 钠（N a C l）8.0 g氯 化 钾（K C l）0.2 g磷 酸 氢 二 钠（N a 2 H P O 3 1 2 H 2 O）2.9 g磷 酸 二 氢 钠（K H 2 P O 4）0.2 g硫 柳 汞 0.2 g加 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 定 容 至 1 0 0 0 m L 即 可，置 2 8 保 存 备 用。B_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _