ICS 67.060 X 04 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 18432013 水体中三嗪类除草剂检测方法 分子印迹固相萃取-液相色谱串联质谱法 Determination of triazine herbicides in waterHPLC/MS/MS method with molecularly imprinted solid phase extraction 2013-04-07 发布 2013-04-07 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 18432013 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准起草单位：中华人民共和国安徽出入境检验检疫局、安徽国家农业标准化与监测中心。本标准主要起草人：胡艳云、韩芳、徐慧群、姚剑、卢业举、余晓峰、郑平、蒋俊树。DB34/T 18432013 1 水体中三嗪类除草剂检测方法 分子印迹固相萃取-液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了水体中莠去津、西玛津、特丁津、扑灭净、西草净、异丙净、莠灭净、莠去通、特丁通、扑灭通的分子印迹固相萃取-液相色谱串联质谱法。本标准适用于各类水体中莠去津、西玛津、特丁津、扑灭净、西草净、异丙净、莠灭净、莠去通、特丁通、扑灭通三嗪类除草剂的检测和确证。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 水样中三嗪类除草剂以分子印迹固相萃取柱富集净化，液相色谱串联质谱法检测，外标法定量。4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 二氯甲烷：色谱纯。4.3 乙腈：色谱纯。4.4 甲酸：色谱纯。4.5 三嗪类除草剂分子印迹固相萃取柱：50 mg，10 mL，或相当者。用前依次用 1 mL 甲醇，1 mL水预淋洗固相萃取柱，在此过程中注意防止填料表面干涸。4.6 标准品：莠去津、西玛津、特丁津、扑灭净、西草净、异丙净、莠灭净、莠去通、特丁通、扑灭通，纯度大于等于98，相关信息参见附录 A。4.7 标准储备溶液：准确称取适量的标准品（精确至0.01 mg），用乙腈溶解，配制成 1000 gmL的标准储备溶液，-18下避光保存。4.8 混合标准工作溶液：根据需要，分别吸取适量标准储备溶液用流动相稀释成适当浓度的混合标准工作溶液。4.9 微孔针头滤膜：有机系，0.22 m。5 仪器和设备 DB34/T 18432013 2 5.1 液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）或相当者。5.2 天平：感量为 0.1 mg。5.3 离心机：转速不低于4 000 rmin。5.4 离心管：50 mL。5.5 固相萃取装置：配有真空泵。5.6 氮吹仪。6 试样制备与保存 样品应采集在棕色玻璃容器中。水样应充满样品瓶并加盖密封，置于 4冰箱内避光保存。采样后应在 7 天内对样品进行分析。7 分析步骤 7.1 提取和净化 取水样 50 mL 于离心机上以 4 000 r/min 离心 5 min 后，移取上层水样 10.0 mL 倾入预处理好的分子印迹固相萃取柱中，控制流速不超过 0.5 mL/min，待溶液全部流出后，用 1 mL 水淋洗，弃去全部流出液，然后抽干柱体，并保持连续抽干状态 30 min。以 1 mL 二氯甲烷淋洗柱体，重复 3 次，每次淋洗之间用真空泵抽至柱体近干，弃去全部流出液，再以 1 mL 甲醇洗脱，重复 3 次，控制流速不超过 0.2 mL/min，每次洗脱之间用真空泵抽至柱体近干。在 40条件下用氮吹仪浓缩至干，再以 1 mL 流动相溶解并定容，过 0.22 m 有机系微孔针头滤膜，供液相色谱串联质谱测定。7.2 测定 7.2.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下：a)液相色谱柱：C18，3.5 m，100 mm2.1 mm 或相当者。b)柱温：40。c)流动相：乙腈+0.05 甲酸，梯度比例见表 1。d)进样量：10.0 L。表1 流动相梯度洗脱条件 时间（min）流速（L/min）B(0.05乙酸铵)A(乙腈)0 200 80 20 5.0 200 30 70 10.0 200 30 70 10.1 200 80 20 20.0 200 80 20 7.2.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下：a)监测离子对及电压参数离子源：电喷雾离子源（ESI）；DB34/T 18432013 3 b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测（MRM）；d)电喷雾电压（IS）：5500 V；e)雾化气压力（GS1）：60 Psi；f)气帘气压力（CUR）：20 Psi；g)辅助气流速（GS2）：60 Psi；h)离子源温度（TEM）：450；i)碰撞气（CAD）：Medium；j)定性离子对、定量离子对、去簇电压（DP）、碰撞气能量（CE）参见附录B。7.2.3 液相色谱-串联质谱检测及确证 按照确定的液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，响应值均应在仪器检测的线性范围内，以色谱峰面积按外标法定量。在上述色谱条件下十种三嗪类除草剂的参考保留时间为莠去通 4.47 min、西草净 6.85 min、扑灭通 7.02 min、特丁通 8.05 min、西玛津 8.51 min、莠灭净 9.48 min、莠去津 10.94 min、扑灭净 11.43 min、异丙净 12.84 min、特丁津 13.03 min，标准溶液的选择离子流图见附录 C。在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的标准物质保留时间偏差在2.5之内；在试样谱图中所选择的待测物离子对均出现，且相对丰度与标准工作溶液中定性离子的相对丰度允许偏差不超过表 2 规定的范围时，则可确定为样品中存在相应的目标化合物。表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度 50 20至50 10至20 10 允许的相对偏差 20 25 30 50 7.2.4 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。7.2.5 结果计算 试样中待测物质含量按公式(1)计算：V SV C SX.(1)式中：X 试样中待测物质含量，单位为微克每升(g/L)；S 样液中待测物质的峰面积；C 标准工作溶液中待测物质的浓度，单位为微克每升(g/L)；V 样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；S 标准工作溶液中待测物质的峰面积；V 最终样液所代表的试样体积，单位为毫升(mL)；注：计算结果需将空白值扣除。计算结果应保留三位有效数字。8 检出限和回收率 DB34/T 18432013 4 8.1 检出限 本标准中莠去津、西玛津、特丁津、扑灭净、西草净、异丙净、莠灭净、莠去通、特丁通、扑灭通的检出限均为 0.1 g/L。8.2 回收率 本标准三嗪类除草剂添加浓度为 0.1 g/L5 g/L 范围，平均回收率为 80.1113.7，相对标准偏差为 4.19.5。DB34/T 18432013 5 A A 附 录 A（资料性附录）三嗪类除草剂信息表 表A.1 十种三嗪类除草剂基本信息 化学结构式 中文名 英文名 取代基 R1 取代基 R2 取代基R3 莠去津 Atrazine Cl NHCH(CH3)2 NHCH(CH3)2 西玛津 Simazine Cl NHCH2CH3 NHCH2CH3 特丁津 Terbuthylazine Cl NHC(CH3)3 NHCH2CH3 扑灭净 Prometryn SCH3 NHCH(CH3)2 NHCH(CH3)2 西草净 Simetryn SCH3 NHCH2CH3 NHCH2CH3 异丙净 Dipropetryn SCH2CH3 NHCH(CH3)2 NHCH(CH3)2 莠灭净 Ametryn SCH3 NHCH(CH3)2 NHCH2CH3 莠去通 Atraton OCH3 NHCH(CH3)2 NHCH2CH3 特丁通 Terbumeton OCH3 NHCH2CH3 NHC(CH3)3 扑灭通 Prometon OCH3 NHCH(CH3)2 NHCH(CH3)2 DB34/T 18432013 6 B B 附 录 B（资料性附录）液相色谱-串联质谱仪器参数参考条件 表B.1 三嗪类除草剂的定性定量离子对及 DP、CE 值 物质名称 定性离子对 定量离子对 DP（V）CE（V）莠去津 216.1/174.3 216.1/103.9 216.1/174.3 30 25 40 西玛津 202.0/132.2 202.0/104.2 202.0/132.2 55 27 35 特丁津 230.1/174.2 230.1/132.3 230.1/132.2 40 23 33 扑灭净 242.3/158.2 242.3/200.1 242.3/200.1 40 30 25 西草净 214.2/124.3 214.2/96.2 214.2/124.3 35 26 32 异丙净 256.2/144.2 256.2/172.0 256.2/172.0 40 37 30 莠灭净 228.1/96.2 228.1/158.3 228.1/96.2 45 37 30 莠去通 212.0/170.3 212.0/100.0 212.0/100.0 30 25 35 特丁通 226.5/170.3 226.5/114.2 226.5/114.2 30 25 33 扑灭通 226.5/142.3 226.5/184.1 226.5/184.1 30 30 26 注：非商业性声明：附录 B 所列参数是使用 API 4000 质谱仪完成的，此处所列试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。DB34/T 18432013 7 C C 附 录 C（资料性附录）标准物质色谱质谱图 表C.1 10 种三嗪类除草剂选择离子流图 D 标准物质色谱质谱图 _